目的 探讨铜离子载体伊利司莫诱导子宫内膜癌细胞发生铜死亡的机制.方法 采用不同浓度伊利司莫和氯化铜处理HEC-1-A细胞.细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测细胞增殖.酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测mRNA表达.免疫印迹法(Western blotting)和免疫组化法检测蛋白表达.结果 单独加入伊利司莫或氯化铜不影响细胞的存活率,但同时加入 50 nmol·L-1伊利司莫和1 μmol·L-1铜离子使HEC-1-A细胞存活率明显下降(P＜0.01).伊利司莫诱导的HEC-1-A细胞死亡并不涉及细胞凋亡.采用50 nmol·L-1伊利司莫和1 μmol·L-1铜离子处理HEC-1-A细胞后,线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的水平显著升高.敲减人铁氧还原蛋白1(FDX1)可明显抑制HEC-1-A细胞的铜死亡(P＜0.01).此外,FDX1 在子宫内膜癌组织中低表达.结论 伊利司莫可能通过FDX1/线粒体呼吸途径促进子宫内膜癌细胞发生铜死亡.

目的 了解奥克托金(HMX)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性及DNA损伤作用.方法 以体外培养V79细胞为研究对象,采用细胞增殖与毒性检测实验方法(CCK-8法)检测5个浓度(5、25、50、75、100 mg/L)HMX溶液染毒24 h对V79细胞的毒性作用;采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和Elisa方法进行3个浓度(50、75、100 mg/L)HMX溶液染毒24 h后致V79细胞的DNA损伤指标及氧化应激指标.结果 与溶剂对照组比较,50、75、100 mg/L HMX染毒组V79细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的存活率呈下降趋势.与溶剂对照组相比,50～100 mg/L HMX染毒组V79细胞的尾长、尾部DNA％、尾距和Olive尾距均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的尾长、尾部DNA％、尾距和Olive尾距均呈上升趋势.与溶剂对照组相比,75和100 mg/L的HMX显著增加了 V79细胞的8-OHdG水平,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的8-OHdG水平呈先上升后下降的趋势.与溶剂对照组相比,仅100 mg/L的HMX显著增加了V79细胞的ROS水平,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的ROS水平呈先上升趋势.与溶剂对照组相比,75和100 mg/L的HMX显著增加了 V79细胞的MDA水平,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的MDA水平呈上升趋势.与溶剂对照组相比,各浓度HMX染毒组V79细胞的GSH水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的GSH水平呈下降趋势.与溶剂对照组相比,仅75 mg/LHMX染毒组V79细胞的SOD水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着HMX染毒浓度的升高,V79细胞的SOD水平呈先下降后升高的趋势.结论 在本实验条件下,HMX能够通过引起细胞氧化损伤诱导细胞毒性,明显抑制V79细胞增殖,导致DNA损伤.

眼表是一个复杂的结构，以稳态机制共同维持角膜的完整性；当眼表因疾病而改变时，其稳态就会失衡，导致不适感、角膜混浊及视力下降。传统的眼表疾病治疗方法主要包括滴眼液或手术移植，眼表重建疗法则是通过刺激眼表细胞增殖、维持眼表稳态及恢复眼表功能修复受损眼表。因此，促进角膜组织再生和改善泪膜稳定性对眼表疾病治疗具有重要价值，且较传统方法更有优势，具有一劳永逸的效果。基于此，本文中笔者就角膜缘干细胞缺乏、神经营养性角膜病、干眼及翼状胬肉等常见眼表疾病的眼表重建技术进展进行综述。

微RNA(microRNA,miRNA)是近年来发现的最短的内源性非编码RN A(non-coding RNAs,ncRNA)之一,普遍认为其通过调节信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达水平来发挥作用,主要功能体现在参与调节生物个体发育、细胞增殖与分化、肿瘤的发生发展等多种病理和生理过程中.miRNA在调控癌基因、抑癌基因的表达和信号通路的活性过程中以及在恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)发生和发展中发挥着重要的作用.本综述对miRNA的生成和miRNA的功能及在MPM发生发展过程中发挥促癌作用和肿瘤抑制作用的相关miRNA进行总结和归纳,以期为MPM的临床诊断以及治疗提供理论参考.

目的 原核可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,纯化后免疫小鼠,检测其免疫原性,为SARS-CoV-2候选疫苗的制备提供新的思路.方法 扩增SARS-CoV-2 RBD蛋白基因片段,酶切后与pNCMO2表达载体连接,构建重组表达质粒pNC-RBD.将重组原核表达质粒转化入短小芽孢杆菌感受态细胞,扩大培养并降温诱导蛋白表达.利用亲和层析纯化目的蛋白,经氢氧化铝佐剂吸附后经背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠,以仅免疫铝佐剂为对照,每组10只.ELISA法检测体液免疫效果,体外增殖试验测定细胞免疫效果,ELISA法测定多种细胞因子的体外分泌,流式细胞术测定细胞分型.结果 重组表达质粒pNC-RBD经菌落PCR及测序证明构建正确.重组蛋白相对分子质量约22 000,可分泌表达.纯化后重组蛋白纯度达95％以上.免疫小鼠后血清结合抗体和中和抗体效价分别可达1∶10000和1∶750左右,均显著高于佐剂组(t分别为2.845和2.528,P均＜0.01);体外可刺激淋巴细胞增殖,并促进IL-1β及IFNγ的分泌;细胞分型试验结果表明促进了CD4+和CD8+T细胞淋巴细胞增殖.结论 成功可溶性表达了SARS-CoV-2 RBD蛋白,其免疫原性良好,为以RBD蛋白为基础研制SARS-CoV-2基因工程疫苗奠定了基础.

目的:分析肾移植术后门诊受者免疫抑制剂的选择及联用情况。方法:回顾性分析2017年1月至2022年12月全国9个城市105家医疗机构肾移植门诊含有免疫抑制剂的处方数据，提取性别、年龄、就诊人次、免疫抑制剂种类和联用情况等信息。结果:共纳入161 989人次的367 526张处方。霉酚酸类药物开具人次最多(125 824，77.67%)，其次为他克莫司(97 979，60.48%)和糖皮质激素类(72 776，44.93%)。联合方案中，他克莫司＋霉酚酸类＋糖皮质激素三联免疫抑制方案(18.87%～27.98%)和他克莫司＋霉酚酸类二联免疫抑制方案使用率(23.14%～27.16%)较高。从年变化趋势上看，环孢素开具人次呈逐年降低趋势(由24.75%降至13.28%，R2＝0.970 8)，咪唑立宾开具人次有逐年升高趋势(由1.33%升至2.67%，R2＝0.956 6)。无CNI方案和西罗莫司开具人次均在2022年最多。无激素方案开具人次在2017年最高(14 813，61.09%)，2020年下降至最低(12 309，49.78%)，随后开始回升。结论:肾移植术后CNI类药物使用中他克莫司占主导地位，抗细胞增殖类药物中霉酚酸类为主要选择，他克莫司＋霉酚酸类联合或不联合糖皮质激素的免疫抑制方案为肾移植术后主要的免疫抑制维持方案。

本研究旨在探讨胰岛素样生长因子-2 mRNA结合蛋白1(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞体外功能的影响及其作用机制.利用TIM-ER2.0数据库、免疫组化及实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析IGF2BP1在ESCC组织和癌旁组织中的蛋白及mRNA水平.采用siRNA敲低IGF2BP1在KYSE30和TE-1细胞中的表达,利用CCK-8实验、平板集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell实验以及流式细胞术检测敲低IGF2BP1对细胞功能的影响.利用Western blot检测敲低IGF2BP1对上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及PI3K/AKT通路磷酸化水平的影响.利用STRING、GEPIA数据库筛选出与IGF2BP1蛋白互作的其余N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化酶并进行差异表达分析.通过RM2Target、SRAMP数据库预测下游靶基因及其m6A修饰位点.结果显示,IGF2BP1在ESCC组织和细胞中高表达(P＜0.05或P＜0.001);敲低IGF2BP1后KYSE30和TE-1细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱(P＜0.05或P＜0.001),细胞凋亡增多(P＜0.05或P＜0.001),同时促进E-cadherin的表达(P＜0.05或P＜0.01),抑制N-cadherin、Vimen-tin的表达(P＜0.05或P＜0.01)以及PI3K/AKT通路的磷酸化(P＜0.05或P＜0.01);锌指CCCH结构域蛋白13(zinc finger CCCH domain containing protein 13,ZC3H13)与 IGF2BP1 蛋白互作且在 ESCC 中的表达水平与 IGF2BP1 正相关;ZC3H13 和IGF2BP1共同调控的潜在靶基因CNNM2、KIAA1549、SP3均具有高可信度的m6A修饰位点.本研究提示,IGF2BP1可能通过m6A依赖的方式与其余m6A甲基化酶协调作用,激活PI3K/AKT通路的磷酸化而促进ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,并促进EMT进程,发挥致癌作用.

目的:探讨miR-28-5p表达与胆管细胞癌患者预后的关系及其对肿瘤增殖和侵袭的作用.方法:纳入2017年10月—2020年12月在我院接受根治性切除的胆管细胞癌患者112例.选取其胆管细胞癌组织和相邻癌旁组织,在胆管癌细胞系TFK-1、RBE、HuH28、HuCCT-1、QBC939及正常胆管上皮细胞HIBEpic中检测miR-28-5p的表达水平.采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析miR-28-5p与患者预后的关系.采用CCK-8和Transwell实验分析miR-28-5p对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果:胆管细胞癌组织和细胞系中miR-28-5p表达水平均显著高于癌旁组织和正常上皮细胞.miR-28-5p低表达与患者的不良预后显著相关.下调miR-28-5p可促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达miR-28-5p则可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭.结论:miR-28-5p有作为胆管细胞癌患者的预后标志物和潜在治疗靶点的前景.

目的 建立一种快速、简单且高效提取细胞培养上清中外泌体的方法,以期促进外泌体在临床与疾病治疗中的应用.方法 将羟基(OH)修饰磁珠与高分子化合物Buffer EXD结合,建立新的外泌体提取系统,并使用该系统提取细胞培养上清中的外泌体.通过Western blot法检测外泌体标志蛋白的表达变化;纳米颗粒追踪分析(nanoparticles tracking analysis,NTA)技术检测外泌体的粒径大小和浓度;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)技术检测外泌体的形态结构.对Buffer EXD系统提取外泌体的方法进行优化(提取pH、Buffer EXD比例、孵育时间、磁珠用量及种类).结合细胞培养和显微拍照技术分析新系统纯化的外泌体对A549细胞增殖的影响.结果 新系统提取的外泌体样品中标志蛋白Alix、CD9和CD81等表达水平较高,而外泌体阴性蛋白Calnexin表达较少;新系统提取的外泌体粒径峰值在100 nm左右,具有茶托状的典型形状.新系统的pH为5.0,Buffer EXD浓度为20％,1.75％的OH磁珠与样品孵育时间为40 min时,提取的外泌体样品中标志蛋白含量最高.新系统提取的外泌体对A549细胞的增殖具有明显的促进作用.结论 以OH修饰的磁珠为介质,结合高分子化合物Buffer EXD,成功建立了一种可快速、简单、高效地从细胞上清中提取结构完整、形态特征明显且具有生物学功能外泌体的新体系.

目的 探讨恩沃利单抗对AGS胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制.方法 体外培养AGS细胞,实验分为恩沃利单抗组(分别含有2.5、5、10、20、40 mg/mL恩沃利单抗的培养液)和对照组(同等体积的生理盐水).细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞的活性,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,流式检测细胞的凋亡.蛋白质组学检测分析两组差异蛋白和相关信号通路,蛋白印迹对发现的差异蛋白和通路进行验证.结果 与对照组相比,恩沃利单抗组显著降低AGS细胞的存活率(P=0.0060);也能够显著抑制AGS细胞的侵袭和迁移细胞数(P=0.0052),并且可以促进AGS细胞的凋亡(P=0.0030).聚类分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集发现,相比于对照组,恩沃利单抗组中溶质载体家族1成员3(SLC1A3)蛋白的表达显著下调,并与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关.蛋白印迹实验显示,加入了恩沃利单抗的AGS细胞中SLC1A3蛋白的表达明显降低(P=0.0041),丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的水平也显著降低(P=0.0008).结论 恩沃利单抗可能通过下调SLC1A3的表达,抑制ERK/MAPK信号通路,发挥抑制AGS胃癌细胞生长的作用.恩沃利单抗可能存在多个抗肿瘤作用机制.