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检测牛冠状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用
编辑人员丨2023/8/6
[背景]牛冠状病-毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛死亡的主要病原之一,有效的检测手段是防治该病的前提.目前BCoV ELISA检测方法存在敏感性低、不稳定等缺陷.[目的]对原有BCoV ELISA方法进行改进,建立间接ELISA检测方法.[方法]应用我国BCoV流行毒株CD株n基因为模板,预测N蛋白抗原表位,通过原核表达制备可溶性的重组N蛋白作为抗原,建立间接ELISA方法,应用该方法对黑龙江省2010-2017年的BCoV感染进行血清流行病学调查.[结果]该ELISA方法最佳工作条件为:用50 mmol/L pH 9.6碳酸盐作为包被液,抗原包被浓度2.5 μg/mL;用PBST作为样本稀释液,稀释浓度1∶50,37℃孵育1.5 h;HRP-羊抗牛IgG稀释浓度1∶7 500,37℃孵育1.0 h;用1％明胶37℃封闭30min.阴阳性临界值为0.225.该方法与BRV、BRSV、BVDV、IBRV、BPIV3和E.coli阳性血清均无交叉反应.批内和批间变异系数均小于10％,与病毒中和试验的符合率高达93.5％.对黑龙江省部分地区共603份奶牛血清样品检测结果显示,BCoV抗体阳性率为98.84％.[结论]建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、稳定性好,为进一步研发ELISA试剂盒提供了技术基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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新生犊牛不同时间段肠道微生物菌群结构的变化
编辑人员丨2023/8/5
目的 了解犊牛在不同生长发育的过程中肠道菌群的建立及肠道菌群结构的动态变化.方法 采集不同时间点(1d、3d、6d、9d、12d、24d、36d、48d、60 d和72 d)新生6头健康犊牛的新鲜直肠粪便样本,利用16SrDNA测序技术及生物信息学测序方法,分析犊牛不同时间点的肠道微生物结构组成及多样性.结果 OTUs聚类分析中共有的OTUs有413个.Alpha多样性指数显示,随着日龄的增加,物种的相对丰度逐渐增多.通过不同组间相对丰度展示了在科水平不同种类物种的相对丰度,包括厌氧环境、致病菌等方面生成了物种丰富度柱形累加图.在厌氧环境中,梭菌科随着日龄的增加逐渐增加.真菌科在48d后逐渐出现在肠道菌群中.毛螺菌科从犊牛出生就一直存在肠道中,并逐渐增加成为优势菌群.在致病菌中,肠杆菌科随着日龄的增加逐渐减少,梭菌与瘤胃球菌不断增加.结论 通过分析新生犊牛肠道微生物菌群多样性的动态结构变化,对新生犊牛胃肠道微生态环境的改善和免疫调控及其生产性能具有重要的意义.
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编辑人员丨2023/8/5
