目的:调查云南省4个艾滋病主要流行地区人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)毒株 gag基因序列的变异特征。 方法:利用完全随机抽样法抽取2019年1月至2020年12月云南省昆明市、德宏傣族景颇族自治州、红河哈尼族彝族自治州和临沧市抗病毒治疗定点机构进行随访治疗的480例人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染/艾滋病患者，收集其流行病学信息，采集血浆标本后送至云南省传染病医院进行分析，采用巢式聚合酶链反应扩增HIV-1 gag基因，并进行基因分型，采用MEGA 6.06软件构建系统进化树，采用VESPA在线分析工具分析特征性氨基酸，采用Distance程序计算 gag，以及gag蛋白不同区段的基质蛋白p17、衣壳蛋白p24、核衣壳蛋白p7及p6蛋白的基因距离。采用SNAP程序分析同义突变频率与非同义突变频率比值(Ks/Ka值)。多组间统计学比较采用方差分析。 结果:404例患者成功获得 gag基因序列，其中以男性居多(250例，61.9%)，年龄为40~59岁者占59.7%(241/404)，传播途径主要为异性性传播(61.4%, 248/404)。主要流行的HIV-1亚型依次为流行重组型(circulating recombinant form, CRF)08_BC 155例(38.4%)，CRF01_AE 74例(18.3%)，独特重组型(unique rebombinant form，URF)52例(12.9%)、CRF07_BC 39例(9.7%)，C亚型34例(8.4%)，其他亚型28例(6.9%)，B亚型22例(5.4%)。构建系统进化树发现，CRF08_BC亚型形成了2个主要传播簇，2个传播簇间共有8个位点的特征性氨基酸分布存在显著差异，分别为第79、93、121、122、151、363、395和396位点。CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC的 gag基因距离分别为0.090±0.004、0.088±0.004和0.078±0.002，差异有统计学意义( F＝118.33， P<0.001)。3种主要亚型中， gag区段的Ks/Ka值分别为4.003±1.309、4.141±0.860和4.514±1.215，差异有统计学意义( F＝1.35， P<0.001)；p17区段的Ks/Ka值分别为2.590±0.186、2.831±0.496和2.936±0.475，差异有统计学意义( F＝1.59， P<0.001)；p24区段的Ks/Ka值分别为12.579±1.116、10.185±0.494和8.522±0.595，差异有统计学意义( F＝1.61， P<0.001)；p7区段的Ks/Ka值分别为10.850±0.711、9.717±0.932和8.522±0.026，差异有统计学意义( F＝4.24， P<0.001)；p6区段的Ks/Ka值分别为3.122±0.134、3.040±1.498和4.841±0.353，差异有统计学意义( F＝10.68， P<0.001)。 结论:云南省4个地区中主要流行的亚型为CRF08_BC亚型，CRF08_BC的不同传播簇形成了不同的氨基酸组成模式，不同亚型 gag基因不同区段的变异程度不同，应加强对HIV变异毒株的监测，控制其流行蔓延。

目的:本研究对2019年陕西省三带喙库蚊标本中分离的病毒(SX1943)进行病毒学和分子生物学鉴定。方法:蚊虫研磨液接种组织培养细胞，对分离物进行病毒学和病毒分子遗传学分析。结果:在2019年于陕西省采集的三带喙库蚊标本中获得1株病毒分离物(SX1943)，将该病毒接种至C6/36细胞后第3天发生明显细胞病变，表现为细胞圆缩、聚集和脱落等，分离物可稳定传代。然而，该批标本在BHK-21细胞连续传代3次均未发现显著细胞病变。SX1943病毒接种至C6/36细胞后经电子显微镜(负染)观察，可见大量圆形病毒颗粒，直径约25 nm。SX1943病毒基因组扩增与测序结果显示，该病毒基因组序列全长为3 594 nt，共编码3种蛋白，分别为非结构蛋白(NS1和NS2)和衣壳蛋白(VP)，3种蛋白的基因长度分别为2 376 nt、1 098 nt和1 136 nt。经病毒分子遗传进化分析发现，SX1943病毒与浓核病毒亚科 Brevidensovirus病毒属中的淡色库蚊浓核病毒(Culex pipiens pallens Densovirus, CppDNV)处于同一进化分支，上述结果提示SX1943病毒为CppDNV。 结论:陕西省三带喙库蚊中分离到CppDNV。

目的:调查北京市市售结球生菜诺如病毒(norovirus，NoV)和轮状病毒(rotavirus，RV)污染情况。方法:2015年11月至2016年10月，在北京市某菜市场摊位采集结球生菜54件。用离心法和直接法，分别对应3种洗脱液洗脱菜叶中病毒并浓缩，用荧光PCR法检测NoV和RV核酸。用半巢式RT-PCR方法扩增NoV阳性样本的衣壳蛋白区基因，PCR产物直接测序，用BioEdit7.0. 9.0软件进行序列比对，用MEGA6.06软件构建进化树。结果:54件结球生菜，未检出RV。NoV总检出率为11.1%(6/54)，其中GI组1件、GⅡ组3件、GI/GⅡ组混合2件。春夏秋冬季检出率依次为8.3%(1/12)、0.0%(0/8)、28.6%(4/14)和5.0%(1/20)。1件GⅡ阳性样本测序成功，为GⅡ.3基因型，该毒株与2014年广东省人源毒株KY348698相似性最高100.0%。结论:北京市市售部分结球生菜存在人源NoV污染，生食未洗净结球生菜有引起病毒性急性胃肠炎的风险。

目的:了解北京市肠道门诊散发腹泻病例中札如病毒的基因型别及特征。方法:收集2019年北京市肠道门诊散发腹泻病例的粪便样本，应用实时荧光RT-PCR对样本进行札如病毒核酸检测，对阳性样本应用不同种RT-PCR方法进行札如病毒衣壳蛋白VP1区和聚合酶RdRp区部分基因片段扩增，对扩增阳性产物进行测序，应用BioEdit 7.0.9.0软件对序列进行比对，应用Mega 6.06软件构建进化树进行分析。结果:札如病毒总检出率为2.89%（44/1 522），<5岁病例的检出率为3.34%（18/539），≥5岁病例的检出率为2.64%（26/983）。衣壳蛋白VP1区基因测序成功23株，包括8个基因型（GⅠ.2型6株、GⅠ.1型和GⅡ.3型各5株，GⅠ.3型和GⅡ.5型各2株，GⅠ.5型、GⅡ.1型和GⅣ.1型各1株）；≥5岁病例占16株，GⅠ.2型构成比最高（37.50%，6/16），<5岁病例占7株，GⅠ.1型和GⅡ.3型构成比最高（均为42.86%，3/7）；每个基因型内部相似性为95.5%~100.0%，与不同年份、不同国家的人源或污水源的51株参考株相似性为92.2%~100.0%。聚合酶RdRp区测序成功25株8个基因型（9株GⅡ.P3型，4株GⅠ.P3型，GⅠ.P1型、GⅠ.P2型和GⅡ.P1型各为3株，GⅠ.P5型、GⅡ.P5型和GⅣ.P1型各为1株）；≥5岁病例占15株，GⅡ.P3型构成比最高（40.00%，6/15），<5岁病例占10株，GⅠ.P1型、GⅡ.P1型和GⅡ.P3型构成比最高（均为30.00%，3/10）；每个基因型内部相似性为94.0%~100.0%，与不同年份、不同国家的人源或污水源的39株参考株相似性为90.2%~99.1%。结论:札如病毒是北京市散发腹泻病例的病原之一，主要基因组为GⅠ和GⅡ，基因型多样且分散；≥5岁和<5岁人群腹泻病例主要基因型不同。

目的:了解传染性单核细胞增多症(IM)患儿血清抗EB病毒(EBV)抗体谱类型，分析抗EBV衣壳抗原(VCA)免疫球蛋白(IgG)抗体亲合力检测在诊断IM中的价值。方法:回顾性分析2016年5月至2019年5月在首都医科大学附属北京儿童医院诊断为IM的150例住院患儿的血清抗EBV抗体谱结果及血浆EBV核酸检测结果，抗EBV抗体谱包括抗VCA IgG和IgM，抗早期抗原(EA)IgA，抗EBV核抗原(EBNA)IgG和VCA IgG抗体亲合力。抗EBV抗体谱的检测方法为酶联免疫吸附法，血浆EBV核酸检测使用实时荧光定量PCR方法。结果:150例IM患儿中抗EBV抗体谱大致可分为2种类型：1.抗VCA-IgM/IgG阳性、抗EBNA-IgG阴性和抗VCA-IgG低亲合力抗体阳性130例(86.7%)，其中抗EA-IgA阳性50例；2.抗VCA-IgM阴性，抗VCA-IgG阳性、抗EBNA-IgG阴性和抗VCA-IgG低亲合力抗体阳性18例(12.0%)，其中EA-IgA阳性5例。132例患儿进行了血浆EBV DNA检测，阳性率37.9%(50/132例)。结论:儿童IM患者血清抗EBV抗体谱呈现多种类型，12.0%的IM患儿住院时抗VCA-IgM阴性，依靠抗VCA-IgG抗体亲合力检测可明确诊断。

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)是全球性的公共卫生威胁，肝硬化和肝细胞癌是致患者死亡的2个主要并发症。虽然核苷(酸)类似物的广泛使用降低了这些并发症的发生率和患者的病死率，但在功能性治愈方面仍收效甚微。随着技术的进步与发展，CHB的治疗策略研究取得了丰硕成果，这些策略分为感染相关治疗策略和免疫相关治疗策略，前者靶向病毒的生命周期，在病毒进入、基因转录、蛋白质翻译、核衣壳组装、病毒释放等环节发挥作用，后者靶向宿主的免疫应答，在细胞免疫应答、体液免疫应答、固有免疫应答等环节发挥作用。现从以上两个方面对这些最新成果进行回顾和展望。

目的:分析江苏省3个城市疱疹性咽峡炎（HA）流行病学与病原学特征，为江苏省HA的精准防控提供参考依据。方法:选择无锡市、苏州市和盐城市的3家监测哨点医院，2018年5月至2022年12月定期从医院住院管理系统分年龄段收集HA的就诊和住院病例的相关信息。采用RT-PCR方法进行肠道病毒核酸检测，并对主要流行株的衣壳蛋白VP1编码基因序列进行测序分析、基因亚型的鉴别和系统进化分析。结果:无锡市、苏州市和盐城市的HA就诊病例数为57 709例，是同期报告的手足口病例数的1.76倍（57 709/32 831）；HA住院占比为1.35%（781/57 709），住院占比逐年呈上升趋势（ χ2=62.79， P<0.001）。HA流行高峰为5-7月。发病年龄主要为12~59月龄组儿童（67.07%，38 708/57 709），以36~59月龄组居多（34.40%，19 852/57 709）。HA阳性率为33.82%（644/1 904）；以肠道病毒A组为主（54.04%，348/644）；其中柯萨奇病毒（CV）A6占比最高（52.59%，183/348），CVA16和CVA4分别占24.71%（86/348）和15.23%（53/348）。10株CVA4 HA流行株均属于C2基因亚型，6株CVA6 HA流行株均属于D3a基因亚型；并与我国部分地区（福建省、广州市、江西省、云南省、天津市等）毒株的遗传距离和亲缘关系较为接近。 结论:HA疾病负担较重，12~59月龄组是HA发病的重点人群，流行高峰为5-7月。HA病原多样化，以肠道病毒A组为主。HA流行株具有较低的型内分化，未发现新的进化分支。建议将HA纳入手足口病监测工作或法定传染病。

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球持续关注的重大公共健康问题之一。由于对HBV生命周期的认识还不够充分，目前尚缺乏有效治愈慢性乙型肝炎的药物。在HBV复制过程中，共价闭合环状DNA作为病毒复制的模板，可转录产生长度为3.5、2.4、2.1 kb以及0.7 kb的5种病毒RNA，分别翻译产生HBeAg、core蛋白、聚合酶（P）蛋白、HBsAg和HBx蛋白。其中，3.5?kb的前基因组RNA（pgRNA）也是病毒逆转录的模板，P蛋白可识别并结合pgRNA上的衣壳组装信号，启动衣壳组装和逆转录。近年来研究发现，HBV RNA的剪接、核输出、稳定性、翻译以及pgRNA衣壳化等过程均受到宿主细胞内的转录后调控网络调控，并依赖HBV RNA结构中独特的转录后调节元件。现对HBV RNA的转录后调控机制及其在HBV抗病毒治疗药物研究中的应用进行综述，以期为靶向HBV RNA的新药研发提供新思路。

目的:获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles, CLPs)并评价其免疫原性。方法:将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein, HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star (DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis, NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠，通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果:重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP，S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1 000 000。结论:在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs，S1-57-CLP具有良好的免疫原性，为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

目的:探讨自噬诱导剂雷帕霉素及抑制剂3-甲基腺嘌呤对水痘-带状疱疹病毒（VZV）感染豚鼠背根神经节模型中病毒结构及功能蛋白生物合成的影响及机制。方法:在人胚肺成纤维细胞（HELF）中培养扩增VZV，同时分离提取豚鼠外周血单个核细胞（PBMC），VZV-HELF与PBMC共培养18~20 h，离心收集VZV-PBMC。32只豚鼠随机平均分为4组，每组8只：空白对照组于内眦静脉丛注射自体PBMC；自噬抑制组、自噬诱导组、VZV感染组分别先腹腔注射3 mg/kg 3-甲基腺嘌呤溶液、0.5 mg/kg雷帕霉素溶液、相同体积的0.9% NaCl溶液，2 h后均于内眦静脉丛注射VZV-PBMC 50 μl。14 d后，处死各组豚鼠，取背根神经节组织，透射电镜观察病毒颗粒形态及自噬囊泡形态及数目，Western印迹检测VZV核衣壳蛋白（NCP）和立即早期蛋白62（IE62）及自噬相关蛋白Beclin-1和p62的表达，免疫组化检测VZV感染的背根神经节中抗VZV抗体的表达。统计分析采用两独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD- t检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:透射电镜下，VZV感染组背根神经节中可见核衣壳病毒粒子及散在的自噬体结构。空白对照组、VZV感染组、自噬诱导组及自噬抑制组自噬囊泡数量[ M（ Q1， Q3）]分别为0、5（4，6）、7（5，9）、0个，差异有统计学意义（ H = 135.60， P<0.01），VZV感染组显著高于空白对照组及自噬抑制组（均 P<0.05），但与自噬诱导组差异无统计学意义（ P>0.05），而自噬诱导组显著高于自噬抑制组（ P<0.05）。Western印迹显示，VZV感染组IE62蛋白表达水平（1.49 ± 0.06）显著高于空白对照组（0.50 ± 0.09）， t = 9.17， P<0.05；自噬抑制组抗VZV抗体表达显著低于自噬诱导组和VZV感染组（ t值分别为9.24、7.78，均 P < 0.01），而自噬诱导组与VZV感染组抗VZV抗体表达差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:VZV感染豚鼠背根神经节后发生了自噬；通过抑制自噬，豚鼠背根神经节中部分VZV结构及功能蛋白的表达水平下降。