该研究采用方差分析、相关性分析和聚类分析等方法,对105份杜仲种质资源叶片6种主要活性成分含量进行比较分析,探讨其遗传变异特征,为叶用杜仲的良种选育及开发利用提供理论依据.结果显示:(1)不同种质间杜仲叶片6种活性成分含量的变异程度不同,异槲皮苷含量变异系数(34.42％)最大,变异幅度为1.16～6.92mg·g-1,总黄酮变异系数(19.35％)最低,变异幅度为6.70～22.53 mg·g-1;6种活性成分多样性指数较高,均在2.0以上;不同种质间杜仲叶6种活性成分含量差异性均达到极显著水平(P＜0.01).(2)不同地理来源间杜仲叶片的绿原酸、京尼平苷酸、车叶草苷、异槲皮苷和总黄酮含量存在显著差异.(3)相关性分析表明,3种环烯醚萜类化合物桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸及车叶草苷的含量间呈极显著正相关关系;绿原酸与桃叶珊瑚苷、车叶草苷、异槲皮苷、总黄酮间呈极显著正相关关系;总黄酮与异槲皮苷呈极显著正相关关系.(4)根据杜仲叶片6种活性成分的含量聚类,将杜仲种质资源分为4大类群,其中类群Ⅳ为高含量类群,可为优良叶用杜仲资源筛选提供参考.研究表明,杜仲种质资源叶片主要活性成分存在较大变异,表现出丰富的多样性.

目的:观察杜仲叶总黄酮对不完全去势法制备围绝经期大鼠模型的影响.方法:各组分别给予大豆异黄酮、更年安以及大、中、小剂量杜仲叶总黄酮混悬液,连续给药30d,进行大鼠的Open field法测试,观察相关脏器指数,血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)及骨钙素(BGP)、血浆中β-内啡肽(β-EP)的水平,相关组织的雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)含量.结果:与模型组比较,杜仲叶总黄酮能使大鼠活动距离和站立次数增加,使如胸腺指数、脾脏指数、子宫指数、肾上腺指数和血清E2、T、BGP、血浆β-EP水平提高,并使血清FSH、LH、GnRH水平降低;明显或显著的提高下丘脑、垂体、卵巢、子宫中ER水平,以及下丘脑和垂体中AR水平.结论:杜仲叶总黄酮不同剂量组可以对抗围绝经期综合征引起的性激素(E2、T、FSH、LH)水平紊乱,调整失调的雌雄激素受体(ER、AR)水平,纠正骨质疏松状态.

目的 优化杜仲叶总黄酮的提取工艺.方法 以总黄酮提取率为指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳工艺条件.结果 优化的最佳工艺条件为纤维素酶用量30 mg,料液比1:30(g:mL),酶解pH 5.0,酶解温度45℃,乙醇体积分数60％,超声温度50℃,超声时间25 min.结论 超声波技术辅助酶解法提取杜仲叶总黄酮的提取率较高,优选的工艺合理、可行.

目的 以杜仲叶Eucommiae Folium水提液为模型药物,通过探索液、固体物料指标成分含量相关性,构建面向中药澄清精制膜工艺过程评估的简便方法.方法 将杜仲叶水提液依次以多种微滤和超滤膜集成工艺澄清、精制,杜仲叶水提原液记为W1,过200 nm陶瓷膜透过液记为W2,之后分别过相对分子质量为10000、3500超滤膜,透过液记为W3、W4,测量过膜前后药效物质(粗多糖、总黄酮、总多酚、绿原酸)和大分子非药效杂质(蛋白质)含量.并开展液、固体物料指标成分含量相关性模型的理论推导.结果 发现指标性成分在干浸膏中的含量为指标性成分在液体物料中的含量与固含率的比值,以绿原酸与总蛋白为例进行验证,实测值与估算值极为接近.结论 作为实际生产中对膜澄清、精制工艺科学、合理性判断的一种简便方法,该模型虽有一定局限性,但作为解决复杂体系膜工程化问题的手段,则表现出较大的灵活性和实用性,可为基于膜过程的中药制药分离工艺智能化提供新的思路与方法.

目的 从Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路探讨杜仲叶总黄酮促进脑出血大鼠神经功能修复的机制.方法 取SD雄性大鼠,用改良二次注血法建立脑出血模型,并按随机数字表法分为假手术组、模型组、杜仲叶总黄酮组、RhoA抑制剂组、RhoA激动剂组、杜仲叶总黄酮+RhoA激动剂组,每组20只.杜仲叶总黄酮组灌胃200 mg/kg杜仲叶总黄酮,RhoA抑制剂组腹腔注射1 mg/kg的RhoA抑制剂Y27632,RhoA激动剂组腹腔注射30μg/kg的RhoA激动剂U-46619,杜仲叶总黄酮+RhoA激动剂组灌胃200 mg/kg杜仲叶总黄酮的同时腹腔注射30μg/kg U-46619,模型组及假手术组灌胃10 mL/kg生理盐水,1次/d,连续7 d.给药结束后,观察大鼠行为变化,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)对神经功能缺损症状进行评估;取脑组织后称质量,计算脑组织含水量,然后制备脑组织切片并计算脑血肿体积百分比;透射电镜观察血肿周围组织神经突触结构变化;TUNEL染色法观察血肿周围组织神经元凋亡;鬼笔环肽染色观察血肿周围组织神经元骨架变化;蛋白免疫印迹法检测血肿周围组织RhoA、ROCK、细胞骨架蛋白(F-actin)、丝切蛋白(cofilin)、磷酸化cofilin(p-cofilin)、促神经元及突触生长相关蛋白[神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT3)、突触后致密蛋白-95(PSD-95)、突触素(SYP)]的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑血肿体积百分比升高,血肿周围组织神经元凋亡及骨架结构损伤,神经突触结构改变严重,RhoA/ROCK通路激活,促神经元及突触生长相关蛋白表达降低(P<0.05).杜仲叶总黄酮或RhoA抑制剂干预治疗均可抑制RhoA/ROCK通路激活介导的神经元骨架结构改变,提高促神经元及突触生长相关蛋白表达,缓解脑出血后血肿周围组织神经元损伤及凋亡,促进神经功能修复(P<0.05).RhoA激动剂可促进RhoA/ROCK通路激活,加重脑出血后神经功能损伤,并削弱杜仲叶总黄酮的促神经功能修复作用(P<0.05).结论 杜仲叶总黄酮可通过抑制RhoA/ROCK通路活化来改善脑出血大鼠出血症状,促进神经功能修复.