[目的]利用代谢组学分析患枣花病意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂中肠内代谢物变化,挖掘出与蜜蜂枣花病相关的重要代谢通路,旨在揭示蜜蜂枣花病发病机制,为枣花病靶向药物的研发提供理论依据.[方法]分别利用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)和气相色谱.质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术对患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂进行中肠非靶向代谢组检测;通过主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA),以变量投影重要性(variable projection importance,VIP)＞1.0,差异倍数(fold change,FC)＞2.0和P＜0.05为标准筛选差异代谢物,并对其进行KEGG注释和通路富集;利用生化方法测定意大利蜜蜂工蜂中肠中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性,并通过qRT-PCR测定抗氧化基因Sod1,Sod2和CAT及免疫基因Defensin,Hymenoptaecin,Apidaecin和Abaecin在中肠内的表达量.[结果]基于LC-MS代谢组检测,正离子和负离子模式下分别获得患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间差异代谢物49和43种,其中分别有33和30种能够在HMDB和KEGG数据库中鉴定到.基于GC-MS代谢组检测,患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间筛选到22种挥发性差异代谢物,其中11种能够在HMDB和KEGG数据库中鉴定到.与健康意大利蜜蜂工蜂相比,患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠内经鉴定的73种差异代谢物中,28种含量上升,45种含量下降;其中,京尼平苷酸、吲哚-3-乙酸、喹啉和棉子糖在患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠内大量积累,而乌索酸、L-苏糖酸、葡萄糖酸、D-半乳糖酸、苏糖酸和芦丁的含量下降最为明显.KEGG代谢通路富集分析结果表明,患枣花病和健康意大利蜜蜂工蜂间差异代谢物显著富集在抗坏血酸和醛酸代谢、半乳糖代谢及丁酸甲酯代谢这3条碳水化合物代谢通路.酶活性测定及qRT-PCR结果显示,与健康意大利蜜蜂工蜂相比,患枣花病意大利蜜蜂工蜂中肠中SOD和CAT酶活显著降低,Sod1,Sod2,CAT,Defensin,Hymenoptaecin和Apidaecin的表达量均呈下调趋势.[结论]利用LC-MS和GC-MS非靶向代谢组学均能够有效地分析枣花病影响下蜜蜂中肠内代谢物的变化差异.研究结果表明,意大利蜜蜂采集枣花后其中肠内碳水化合物代谢发生异常,引起肠道抗氧化和免疫能力显著下降,推测肠道功能障碍是导致蜜蜂死亡的主要原因.该研究为蜜蜂枣花病的发病机理提供了新见解.

目的:观察沙枣花乙醇提取物对哮喘模型小鼠气道炎症及血清白介素4(Interleukin-4,IL4)、IgE-免疫球蛋白(IgE-immtmoglobulin,IgE)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)含量的影响,探讨其抑制哮喘气道炎症的作用机制.方法:将BALB/c小鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、地塞米松10mg/kg组和沙枣花乙醇提取物4g/kg、8g/kg、16g/kg组,除空白对照组外,其余各组用改良的卵白蛋白多点注射致敏与雾化吸入激发法建立小鼠哮喘模型,连续14 d.小鼠末次激发24h后,处死各组小鼠留取标本.镜下观察各组哮喘小鼠肺组织病理形态变化及支气管肺泡灌洗液中白细胞计数和分类计数,并进行炎症评分;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠支气管肺泡灌洗液及血清中IL-4、IgE、IFN-γ含量.结果:与模型组比较,沙枣花乙醇提取物8g/kg、16g/kg组和地塞米松组可显著降低哮喘模型小鼠支气管肺泡灌洗液及血清中IgE、IL-4含量和IL-4/IFN-γ比值;16g/kg、8g/kg组和地塞米松组可显著升高支气管肺泡灌洗波及血清中IFN-γ含量.与模型组比较,沙枣花乙醇提取物16g/kg、8g/kg组和地塞米松组可显著降低白细胞总数、嗜酸性粒细胞及巨噬细胞比率;各给药组可显著升高中性粒细胞比率.病理切片染色结果显示沙枣花乙醇提取物16g/kg、8g/kg组能够明显减轻肺组织细胞炎性浸润等病理症状,与模型组比较,可显著降低炎症评分.结论:沙枣花提取物可通过降低IL-4及IgE含量、升高IFN-γ的含量,调节Th1/Th2免疫平衡而改善哮喘模型小鼠气道炎症.