目的:探讨微RNA（microRNA，miRNA）-223在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）X蛋白（HBV X protein，HBx）诱导的HBV相关性肾炎（HBV-associated glomerulonephritis，HBV-GN）足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法:采用人肾足细胞中过表达 HBx基因来模拟HBV-GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白［核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）］及炎性因子［白细胞介素1β、白细胞介素18］mRNA和蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-223的下游靶标；TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况；免疫荧光检测足细胞损伤标志物Desmin和Nephrin的表达；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定检测Caspase-1活性。将足细胞分为以下9组：对照组（不予特殊处理）、空质粒组（转染空质粒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223模拟物）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223抑制剂）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3 siRNA）。 结果:与对照组相比，HBx过表达组miRNA-223表达较低（ P < 0.05）。TUNEL染色和免疫荧光结果显示，敲低NLRP3减弱HBx过表达引起的足细胞损伤和焦亡（ P < 0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明NLRP3是miRNA-223的下游靶点之一。功能回复实验证明，NLRP3过表达削弱了miRNA-223对足细胞损伤的保护作用（ P < 0.05）。miRNA-223 mimic和NLRP3 siRNA的共同加入使HBx过表达诱导升高的NLRP3炎症小体及炎性因子表达下降，焦亡细胞数量减少（均 P < 0.05）；而同时引入miRNA-223 inhibitor和NLRP3过表达质粒则使足细胞中NLRP3炎症小体和炎性因子的表达上调，Caspase-1活性升高，焦亡细胞数量增加（均 P < 0.05）。 结论:HBx可能通过下调miRNA-223靶向NLRP3炎症小体促进HBV-GN足细胞焦亡。miRNA-223有望成为治疗HBV-GN的潜在靶点。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是临床上常见的呼吸系统疾病之一，目前是全球第三大死亡原因，严重威胁人类的生命健康。COPD确切的发生机制至今尚未完全阐明。核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体通过多种机制调控肺部炎症的反应过程，从而参与COPD的发生和发展。本文进一步阐明炎症小体在COPD发病机制或干预中的作用，并提供了新的研究方向，NLRP3炎症小体及其调节的细胞因子或受体可能是肺部疾病和其他炎症介导的疾病的新的诊断或治疗靶点。

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/转录因子GATA结合蛋白4(GATA-4)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)中的作用。方法:利用TRANSFAC转录因子数据库搜索人源和鼠源VEGF启动子及其上游序列，分析可能影响VEGF转录活性的转录因子。将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组和脂多糖(LPS)刺激组，qRT-PCR检测LPS对NLRP3炎症小体活化、GATA-4和血管内皮生长因子A(VEGFA)mRNA表达的影响；应用特异性NLRP3小分子抑制剂MCC950预处理RAW264.7细胞(LPS+MCC950组)，检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA基因表达水平的变化。结果:人源和鼠源VEGF启动子上游均存在多个GATA转录因子结合位点。与对照组比较，LPS组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA表达增加(均 P<0.05)；与LPS刺激组比较，LPS+MCC950组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA水平均明显降低(均 P<0.05)。 结论:NLRP3/GATA-4/VEGF信号通路可能在nAMD的病理过程中发挥重要调节作用。

糖尿病是临床上常见的内分泌系统疾病之一，其确切的发病机制至今尚未明确。核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3）炎症小体不仅可以被上游信号通路调控激活，在细胞焦亡、凋亡、坏死、自噬等方面发挥重要作用，而且调节下游炎症因子参与疾病的慢性炎症过程。现阐明NLRP3炎症小体在糖尿病及其并发症发病机制或干预中的作用，并提供了新的研究方向，NLRP3炎症小体及其调节的细胞因子或受体可能是糖尿病及其并发症新的诊断或治疗靶点。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体可由NLRP3作为支架蛋白结合凋亡相关的斑点样蛋白质(ASC),活化后产生二聚物,经过一系列步骤,促使白细胞介素1β(IL-1β)等炎性因子的加工、成熟和释放,进而参与了慢性气道炎症性病变的发展进程,而NLRP3炎症小体活化和控制则直接影响着慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘为代表的慢性气道炎症性病变发展,其具体机制尚未完全明了,进一步研究NLRP3炎症小体的活化和调控机制将有利于慢性气道炎症性疾病的诊治.

目的 探讨花姜酮对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道黏膜屏障功能的影响.方法 将 42 只SD大鼠随机均分为对照组(蒸馏水处理SD大鼠)、模型组(蒸馏水处理SAP大鼠)、花姜酮组(花姜酮处理SAP大鼠).采用HE染色观察各组大鼠小肠组织病理学变化;ELISA法检测血清和小肠组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Griess法测定血清一氧化氮(NO)水平;偶氮基质显色法测定内毒素(ET)含量;胶乳增强免疫比浊法测定髓过氧化物酶(MPO)含量;EB染色检测肠道血管通透性;免疫荧光法检测小肠组织和肠系膜淋巴结组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)阳性细胞数;免疫组织化学染色法检测小肠组织和肠系膜淋巴结组织中Casepase-1 蛋白表达水平,以及小肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平.结果 花姜酮组大鼠小肠组织有少量炎症细胞浸润,但组织充血、水肿程度较模型组减轻.与模型组比较,花姜酮组大鼠ET、IL-1β、TNF-α、NO、MPO水平及肠道血管通透性降低(P<0.05);小肠组织和肠系膜淋巴结NLRP3、ASC阳性细胞数及Casepase-1蛋白表达水平减少(P<0.05);小肠黏膜sIgA蛋白表达水平增加(P<0.05).结论 花姜酮对SAP大鼠肠黏膜屏障具有保护作用,其机制可能与上调sIgA水平,抑制NL-RP3 炎症小体活化,调节肠道免疫功能有关.

目的 观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体在矽肺肺纤维化发生发展的作用机制,探讨NLRP3抑制剂MCC950对矽肺肺纤维化的影响.方法 无特定病原体级Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和抑制剂组,每组20只.采用非暴露式气管插管法,模型组和抑制剂组大鼠一次性予质量浓度为50 g/L的游离二氧化硅混悬液1.0 mL造模,对照组予等体积灭菌0.9％氯化钠溶液;造模的同时,抑制剂组大鼠予剂量为10 mg/kg体质量的MCC950灌胃,模型组和对照组予等体积灭菌0.9％氯化钠溶液灌胃,每隔1天灌胃1次.各组分别于造模后7、14、28、56 d随机处死5只大鼠,称量大鼠体质量,观察肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,采用酶联免疫吸附试验检测肺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,蛋白免疫印迹法检测肺组织中NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的相对表达水平.结果 大鼠体质量随观察时间的延长而增加(P<0.01).大鼠肺纤维化评分及肺组织中IL-1β、IL-18、TGF-β1水平均在染尘处理主效应上有统计学意义(P<0.01),从高到低依次为模型组、抑制剂组、对照组(P<0.01).在造模后7、14、28、56 d时间点上,抑制组大鼠肺泡炎评分和肺组织NLRP3、Caspase-1蛋白的相对表达水平均低于同时间点模型组(P<0.01),但高于同时间点对照组(P<0.01).结论 NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号通路在矽肺肺纤维化发生发展中发挥重要作用;MCC950可能通过抑制NLRP3炎症小体的活化而抑制矽肺肺纤维化的发生发展.

目的 阐明抗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染人巨噬细胞后炎症小体激活的情况,并通过沉默炎症小体探讨其在PA感染过程中的作用与机制.方法 分别用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)、Real-time PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测PA感染后白细胞介素-1β(IL-1β)、胱冬肽酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)家族成员含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)的表达情况;siRNA沉默NLRP3炎症小体后ELISA检测IL-1β和caspase-1的分泌,免疫荧光染色和激光共聚焦显微成像直观观察NLRP3炎症小体确定其激活情况,并用细菌平板计数法检测巨噬细胞对PA的杀伤;继而通过Real-time PCR、Griess reaction、流式细胞术、Western blot和免疫荧光实验从抗菌肽、一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)和自噬4个方面探讨炎症小体影响PA杀伤的机制.结果 PA感染人巨噬细胞能够激活NLRP3炎症小体.沉默NLRP3炎症小体可促进巨噬细胞对PA的杀伤和自噬的发生,而对抗菌肽、NO和ROS无影响.结论 PA激活的NLRP3炎症小体通过促进自噬从而抑制巨噬细胞对PA的杀伤.

NLRP3炎症小体是由核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族成员NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白ASC和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-1)组成的大分子多蛋白复合体,它的激活能够引起caspase-1的成熟,成熟的caspase-1进一步将pro-IL-1β,pro-IL-18剪接成具有活性的IL-1β和IL-18,从而引起机体的炎症反应.由于可以被多种肺源性的危险信号和病原体信号激活,NLRP3炎症小体在肺癌、COPD、哮喘、急性肺损伤、肺纤维化等多种呼吸系统疾病的发病过程中发挥了重要作用.有关NLRP3炎症小体的研究一直是近年来的热点,现就其激活机制和在呼吸系统疾病中发挥的作用及其进展进行简要综述.

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)在甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导人支气管上皮细胞(HBECs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体活化中的作用.方法 (1)TDI-人血清白蛋白(HSA)刺激实验:将对数生长期HBECs随机分为对照组和低、中、高剂量组,分别予剂量为0.00、40.00、80.00、120.00 mg/L的TDI-HSA偶联物处理12 h.(2)HMGB1表达抑制实验:将对数生长期HBECs随机分为对照组、TDI-HSA处理组、TDI-HSA+阴性-siRNA组和TDI-HSA+HMGB1-siRNA组,TDI-HSA+阴性-siRNA组和TDI-HSA+HMGB1-siRNA组细胞分别利用携带阴性-siRNA慢病毒和携带HMGB1-siRNA慢病毒感染后,与TDI-HSA处理组细胞均予剂量为120.00 mg/L的TDI-HSA处理12 h,对照组细胞不予TDI-HSA处理.(3)各组细胞采用蛋白质印迹法检测HMGB1、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-1)前体(pro-caspase-1)和caspase-1 p20蛋白表达,以免疫荧光法观察TDI-HSA刺激实验中NLRP3和caspase-1炎症小体数量.结果 (1)TDI-HSA刺激实验:中、高剂量组HBECs中HMGB1和ASC蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.01);3个剂量组HBECs中NLPR3-casepase-1 p20蛋白相对表达水平和NLRP3-caspase-1炎症小体计数均高于对照组(P值均<0.01);随着TDI-HSA染毒剂量的升高,HBECs中NLRP3-caspase-1炎症小体计数增加(P值均<0.01).(2)HMGB1表达抑制实验:TDI-HSA处理组和TDI-HSA+阴性-siRNA组HBECs中HMGB1、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1 p20的蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.01);TDI-HSA+HMGB1-siRNA组HBECs中上述指标均低于TDI-HSA处理组和TDI-HSA+阴性-siRNA组(P值均<0.01).结论 TDI处理HBECs可诱导HMGB1蛋白表达增加,活化NLPR3炎症小体;抑制HMGB1表达可下调NLPR3及其相关蛋白的表达.