目的 探讨花姜酮对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道黏膜屏障功能的影响.方法 将 42 只SD大鼠随机均分为对照组(蒸馏水处理SD大鼠)、模型组(蒸馏水处理SAP大鼠)、花姜酮组(花姜酮处理SAP大鼠).采用HE染色观察各组大鼠小肠组织病理学变化;ELISA法检测血清和小肠组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Griess法测定血清一氧化氮(NO)水平;偶氮基质显色法测定内毒素(ET)含量;胶乳增强免疫比浊法测定髓过氧化物酶(MPO)含量;EB染色检测肠道血管通透性;免疫荧光法检测小肠组织和肠系膜淋巴结组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)阳性细胞数;免疫组织化学染色法检测小肠组织和肠系膜淋巴结组织中Casepase-1 蛋白表达水平,以及小肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平.结果 花姜酮组大鼠小肠组织有少量炎症细胞浸润,但组织充血、水肿程度较模型组减轻.与模型组比较,花姜酮组大鼠ET、IL-1β、TNF-α、NO、MPO水平及肠道血管通透性降低(P<0.05);小肠组织和肠系膜淋巴结NLRP3、ASC阳性细胞数及Casepase-1蛋白表达水平减少(P<0.05);小肠黏膜sIgA蛋白表达水平增加(P<0.05).结论 花姜酮对SAP大鼠肠黏膜屏障具有保护作用,其机制可能与上调sIgA水平,抑制NL-RP3 炎症小体活化,调节肠道免疫功能有关.

目的 探究花姜酮(ZER)对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及潜在的作用机制.方法 缺氧诱导H9c2 心肌细胞损伤模型.将H9c2 心肌细胞分为空白组(正常培养)、对照组(缺氧培养)、ZER处理组(8 μmol/L ZER组、16 μmol/L ZER组、24 μmol/L ZER组,缺氧+8、16、24 μmol/L ZER).CCK-8 法检测H9c2 心肌细胞活力;流式细胞仪检测各组H9c2 心肌细胞凋亡率;Western印迹检测各组H9c2 细胞中凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路相关蛋白的水平.结果 H9c2 心肌细胞活力随着缺氧诱导时间的延长而降低,在缺氧36h后细胞的活力低于一半.与空白组相比,对照组、ZER处理组细胞的增殖活力显著降低,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2 相关 X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-3 和caspase-9]显著上调,MAPK/ERK通路相关蛋白(p-MAPK、p-ERK)显著下调(P<0.05).与对照组相比,ZER处理组H9c2 细胞增殖活力显著增高,凋亡率显著降低Bax、caspase-3 和caspase-9 显著下调,p-MAPK、p-ERK表达量显著上调,且均呈现浓度依赖性(P<0.05).结论 ZER可能通过激活MAPK/ERK信号通路减轻缺氧对心肌细胞的损伤.

目的 研究花姜酮对人口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)花姜酮处理人口腔鳞状细胞癌HSC-3 细胞,分别在培养 24、48、72h时,应用实时定量荧光PCR检测EMT标志物波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA表达水平,并于培养48h时采用Western blot法检测Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平;采用MTT检测细胞增殖能力、流式细胞仪测定细胞凋亡能力、Transwell小室测定细胞侵袭能力.结果 花姜酮处理后,HSC-3 细胞E-cadherin mRNA表达水平显著提高(P＜0.05);HSC-3 细胞Vimentin mRNA表达受到明显抑制,且具有浓度依赖性(P＜0.05).花姜酮处理 48h时,随着花姜酮浓度的增加,HSC-3 细胞中Vimentin蛋白表达水平逐渐降低,E-cadherin蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.05).随着花姜酮作用时间的延长及花姜酮浓度的增加,HSC-3 细胞的增殖率逐渐降低(P＜0.05).花姜酮处理后,HSC-3 细胞凋亡率明显升高,且随着花姜酮浓度的增加凋亡率显著升高(P＜0.05);花姜酮处理后,HSC-3 细胞侵袭数显著减少,随着花姜酮浓度的增加细胞侵袭数逐渐减少(P＜0.05).结论 花姜酮可以通过抑制人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡,进而抑制EMT进程.

目的 探究花姜酮(zerumbone,Zer)治疗黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)的机制研究,以期为临床上开发 MEC靶向治疗药物提供新的思路以及理论依据.方法 购入 MEC细胞系 H292 及 H3118,通过 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]检测出Zer对 MEC细胞系的 IC50;在 IC50 的浓度下,进一步通过集落形成实验检测细胞增殖,利用流式细胞术检测细胞凋亡及表面钙网蛋白(calreticulin,CRT)蛋白水平,Western blot 检测细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达水平,观察Zer是否可以影响 MEC的免疫原性死亡;最后为探寻Zer可能的分子调控机制,采取 pcDNA3.1-STAT3 上调 MEC 细胞中信号转导因子和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的水平,通过实时荧光定量 PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测转染效率及 qRT-PCR、Western blot 检测内质网应激相关因子活化的转录因子 4(activating transcription factor 4,ATF4)、ATF3 及转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的表达水平,三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)测定试剂盒检测培养基中 ATP 含量,MEC.结果 Zer 组细胞凋亡率高于Control组(P<0.05),Zer组 H3118 细胞上清液中 HMGB1 蛋白含量高于 Control 组(P<0.05),Zer 组 H3118 细胞中 ATP含量高于 Control 组(P<0.05),Zer 组细胞内质网应激相关基因 ATF4、ATF3 及 CHOP 的蛋白和mRNA表达水平均高于 Control 组(P<0.05),Zer 组的 MEC 细胞中 STAT3 mRNA 水平低于 Control 组(P<0.05),Zer+oe-STAT3 组细胞内质网应激相关基因 ATF4、ATF3 及 CHOP 的蛋白和 mRNA 表达水平均低于Zer+oe-NC组(P<0.05).结论 Zer介导 STAT3 促进 MEC细胞内质网应激由此诱导 MEC细胞免疫原性死亡.

目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制.方法:采用CCK-8法检测MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related fac-tor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平.结果:MPP+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600 μmol/L MPP+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P<0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)具有相似的作用;沉默PARK7 基因后,Nrf2 和HO-1 蛋白的表达水平明显下降(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P<0.05).结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关.

目的 探讨花姜酮对激素不敏感哮喘小鼠的治疗作用及其可能机制.方法 将30只BALB/c小鼠随机均分为五组:第0、1、2、7天,B、C、D、E组用75 μg鸡卵清蛋白+10μtg脂多糖滴鼻致敏,A组用PBS滴鼻致敏;第14、15、21、22天,五组小鼠均用50 μg鸡卵清蛋白滴鼻激发;每次激发30 min前,A、B、C、D、E组小鼠分别腹腔注射200μl PBS、200μl PBS、花姜酮10mg/kg、花姜酮50mg/kg、地塞米松1 mg/kg.采用瑞氏-吉姆萨复合染色进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类计数,HE染色观察气道炎症的改变,ELISA法检测BALF及血清中的IL-17水平,流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17细胞的比例.结果 与A组相比,B组小鼠气道炎症加重,IL-17水平、Th17细胞的比例以及总细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞计数均增加(P＜0.05),而C组和D组能抑制上述各指标的增加过程(P＜0.05),其中D组的抑制作用更为明显(P＜0.05).结论 花姜酮能有效治疗激素不敏感哮喘小鼠;其机制可能是通过抑制Th17细胞及IL-17介导的中性粒细胞性气道炎症.

目的 探究花姜酮对人口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响.方法 将人口腔鳞癌细胞株分为空白组、花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组和花姜酮20 μmol/L组.空白组使用常规细胞培养液培养,其他3组分别使用相对应浓度的花姜酮进行培养,观察4组细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移情况及PI3K、蛋白激酶B( Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因( Bcl-2)表达水平.结果 花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组、花姜酮20 μmol/L组细胞增殖率均低于空白组,且花姜酮20 μmol/L组细胞增殖率低于花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组,差异具有统计学意义(P＜0. 05).花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组、花姜酮20 μmol/L组细胞凋亡率均高于空白组,且花姜酮20 μmol/L组细胞凋亡率高于花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组,差异具有统计学意义(P＜0. 05).花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组、花姜酮20 μmol/L组细胞迁移数及侵袭数均低于空白组,且花姜酮20 μmol/L 组细胞迁移数及侵袭数均低于花姜酮5 μmol/L 组、花姜酮10 μmol/L 组,差异具有统计学意义(P＜0. 05).在花姜酮的干预下,PI3K、Akt、Bcl-2表达水平均出现下调,且随着花姜酮浓度的提升,PI3K、Akt、Bcl-2表达水平下调幅度逐渐增大,差异具有统计学意义(P＜0. 05).结论 花姜酮能够促进人口腔鳞癌细胞的凋亡,抑制人口腔鳞癌细胞的增殖及迁移、侵袭,且呈浓度依赖性.

目的 研究花姜酮对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和细胞周期的影响.方法 应用终浓度为10、25、50 μmol/L的花姜酮处理人绒毛膜癌JEG-3细胞24、48和72 h,对照组加入MEM(minimum Eagle medium)完全培养液,CCK-8 (Cell Counting Kit-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期.结果 CCK-8检测细胞增殖结果显示,25 μmol/L和50 μmol/L花姜酮组与对照组比较,细胞增殖受到抑制,且具有浓度依赖性(P＜0.05);50 μmol/L花姜酮组随着时间的延长,细胞增殖受到抑制,具有时间依赖性(P＜0.01).流式细胞仪测定细胞周期结果显示,25 μmol/L和50 μmol/L花姜酮处理人绒毛膜癌JEG-3细胞72 h,G0/G1期峰值变低,细胞数量减少(P＜0.01);G2/M期峰值变高,细胞数量增多(P＜0.01),细胞周期阻滞在G2/M期.结论 花姜酮通过抑制绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及阻滞细胞周期从而抑制肿瘤的生长,花姜酮有望成为绒癌化疗方案的新型辅助治疗药物.

目的 探究花姜酮对Hela细胞株增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响.方法 购买人宫颈癌Hela细胞株,进行培养并分为空白组、花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10μmol/L组、花姜酮20μmol/L组4组.空白组使用常规细胞培养液培养,其他三组分别使用相对应浓度的花姜酮进行培养.观察4组细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡情况及上皮细胞间充质(EMT)相关蛋白相对表达量.结果 24、48、72 h花姜酮20 μmol/L组细胞增殖率低于花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组及空白组(P＜0.05);24、48、72 h花姜酮20 μmol/L组细胞凋亡率高于花姜酮5μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组及空白组(P＜0.05);花姜酮20μmol/L组细胞迁移、侵袭数均低于花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10μmol/L组及空白组(P＜0.05);花姜酮20 μmol/L组细胞波形蛋白(Vimentin)、组蛋白甲基转移酶同源序列2增强子(EZH2)相对表达量均低于花姜酮5 μmol/L组、花姜酮10μmol/L组空白组;花姜酮20μmol/L组细胞α-连环蛋白(α-cat)、上皮性钙粘蛋白(E-cadherin)相对表达量均高于花姜酮5μmol/L组、花姜酮10 μmol/L组及空白组(P＜0.05).结论 花姜酮能够促进HeLa细胞株的凋亡,抑制Hela细胞株的增殖、迁移及侵袭能力,其能力呈现浓度依赖.