为解析江西省辣椒育种骨干亲本材料的遗传多样性并构建其DNA指纹图谱,本研究利用毛细管电泳和SSR分子标记技术对江西60份辣椒种质材料进行位点检测.结果表明,49对SSR引物共检测到202个等位基因,平均4.122个,平均有效等位基因为2.172个,平均香农信息指数为0.850,平均多态信息含量为0.414,说明60份供试材料具有较为丰富的遗传多样性;平均期望杂合度0.475大于观测杂合度0.126,表明多代自交导致材料纯合度较高.聚类分析、群体结构分析和主坐标分析结果一致,即江西辣椒育种亲本材料以南方地区和小果型尖椒材料为主,遗传背景狭窄且保持较纯的血统.此外,本研究根据多位点匹配分析确定了 PM1、CAMS-855、CO911525S、PM22、HpmsE015和Hpms1214为核心引物,并利用这6对核心引物构建了 60份辣椒育种亲本的指纹图谱,为江西辣椒资源的鉴定和保护提供了有力支撑,为分子辅助育种中亲本的选择提供理论依据.

目的:研究并建立针对抗淀粉样肽(amyloid-β,Aβ)单克隆抗体的关键质量属性质量控制方法.方法:基于胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进行肽指纹图谱分析,分子排阻色谱法(SE-HPLC)进行单体聚体纯度分析,采用还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)进行大小变异体纯度分析,采用阳离子色谱法(CEX-HPLC)进行电荷变异体纯度分析,采用HILIC-UPLC法进行寡糖分析,采用ELISA法测定Aβ抗原相对结合活性.其他各项指标均应符合《中华人民共和国药典》2020年版以及其他相关要求.结果:肽指纹图谱起到良好的鉴别作用;SE-HPLC法中单体相对百分含量为(99.40±0.00)％,聚体的相对百分含量为(0.55±0.00)％;还原CE-SDS法中轻重链之和的相对百分含量为(98.11±0.08)％,非还原CE-SDS法的主峰相对百分含量为(96.57±0.15)％,HHL峰相对百分含量为(1.91±0.10)％;CEX-HPLC法中主成分相对百分含量为(75.08±0.06)％,酸性变异体的相对百分含量为(16.12±0.05)％,碱性变异体的相对百分含量为(8.80±0.05)％;HILIC-UPLC寡糖图谱分析的(G0F+G1F+G2F),Man5,G0 相对百分含量分别为(91.56±0.04)％,(1.21±0.03)％,(2.60±0.01)％;ELISA 法中与 Aβ 抗原的相对结合活性为(101.40±0.53)％.结论:针对抗Aβ单抗的质量属性,研究建立质控方法并进行质量研究,确保产品安全有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据.

[目的]为快速鉴定和利用文冠果种质资源,探明文冠果种质亲缘关系.[方法]从 20 对SSR引物筛选得到 11 对条带清晰、多态性好的引物,对 29 个文冠果品种(系)进行分析,采用荧光毛细管电泳技术进行多态检测,通过邻接法进行聚类分析,利用数字和字母赋值编码构建分子身份证.[结果]共检测到 66 个等位基因(Na),每对引物检测到 3-10 个Na.Shannon信息指数(I)变化范围介于 0.349-1.723 之间,平均值为 1.16.不同引物揭示的多态信息含量(PIC)变幅介于 0.276-0.841,平均为 0.66.观测杂合度(Ho)变幅为 0.137-0.958,平均值为 0.739;期望杂合度(He)变幅为 0.187-0.79,平均值为 0.648;在 11个位点中,有 7 个位点的平均观测杂合度大于平均期望杂合度.遗传相似系数变化范围为 0-1,平均为 0.31,遗传相似系数在 0.6以上的有 15 个,仅占全部数据的 5.17%.邻接法聚类分析结果显示,在遗传距离为 0.42 时,可将 29 份文冠果种质分为三大类群.构建了 0/1 形式的指纹数据库和分子身份证,除个别品种外均具有唯一性,可用于品种鉴定.[结论]29 份文冠果种质资源的遗传多样性相对较高,但也存在一定的近交现象.利用SSR标记构建文冠果分子身份证操作简便可行,可为文冠果品种真伪鉴定、权益保护、身份识别、溯源管理及新品种选育提供技术支撑和科学依据.

目的 建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法.方法 根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肱指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量.结果 PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)％、(46.44±0.35)％、(4.28±0.04)％;"重链+轻链"峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)％、(4.11±0.76)％、(0.85±0.20)％,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)％、(2.85±0.08)％、(2.88±0.15)％;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)％、(0.75+0.01)％、(0.96±0.02)％;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)％、(34.69+0.41)％、(9.09±0.14)％、(12.61±0.50)％;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)％;聚山梨酯20含量为(0.012±0.000 3)％.结论 本研究建立了 PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控.

目的 对复方甘草片工艺变革进行综述,总结其分析方法,提出复方甘草片质量一致性评价操作流程.方法 通过查阅文献研究复方甘草片制备工艺变革,总结复方甘草片和原料组分的主要分析方法,从中药质量一致性评价体系角度出发设计复方甘草片质量一致性评价流程.结果 复方甘草片制备工艺几经变革,大大简化制备工艺,药效得到充分发挥.复方甘草片原料分析方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法和毛细管电泳法,建立HPLC定量指纹图谱是复方甘草片多组分质量一致性评价的重要核心方法.结论 复方甘草片制备工艺历经多次优化,制剂和原料分析方法丰富,但基于标准制剂控制模式的系统指纹定量法是其质量一致性评价核心方法.复方甘草片质量一致性评价方法为中药质量一致性评价提供了理论和方法上的参考.

目的 利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A”软件对不同产地样品毛细管电泳图谱进行分析.方法 建立了中药白车轴草毛细管电泳指纹图谱.结果 10批不同产地白车轴草毛细管电泳指纹图谱共确认10个共有峰,除济宁汶上样品毛细管电泳图谱相似度小于0.8外,其他各地样品图谱相似度均在0.8 ～0.9之间.结论 该方法简便、准确、稳定性好,可为白车轴草质量评价提供方法依据.

目的:为全面控制中药三七的质量提供参考.方法:以"三七""指纹图谱""Panax notoginseng""Fingerpint"等为关键词,组合查询2003年1月-2017年12月在中国知网、万方、维普、PubMed等数据库中的相关文献,对三七指纹图谱的相关研究进行综述.结果与结论:共检索到相关文献209篇,其中有效文献80篇.目前三七指纹图谱分析方法主要有色谱法(包括高效液相色谱法、薄层色谱法、毛细管电泳色谱法、气相色谱法等)、光谱法(包括红外光谱法、紫外光谱法、荧光光谱法、核磁共振等)、非线性化学法、生物学方法等.三七化学指纹图谱的研究报道较多,特别是色谱指纹图谱广泛应用于三七及其制剂的质量评价,而基于其指纹图谱与药效作用结果的谱-效关系研究有待进一步深入.

目的 建立适用于附子药材饮片的指纹图谱法.方法 采用FASS-HPCE技术对检测条件进行优化,确立高效毛细管电泳色谱分析中药附子质量的指纹图谱方法 .采用所建立的中药高效毛细管电泳指纹图谱对10个批次的附子饮片进行考察.结果 经考察确定适于附子指纹图谱研究的电泳条件为背景缓冲液100 mmol·L-1硼砂-硼酸缓冲溶液(pH 9.0):甲醇=7: 3的电解质溶液;电压进样:20 kV, 20 s;分离电压:10 kV;检测波长:230 nm;柱温:25 ℃.所采集的10批药材中有8个共有峰,其中的3个峰分别指认为苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱,是附子主要的药效物质.结论 所建立的基于高效毛细管电泳技术的指纹图谱法作为一种快速、有效的分析方法 可用于中药附子的研究.

通过对近年来国内外有关地龙研究文献的整理和分析,总结归纳了地龙的品种鉴定、药材质量控制、化学成分、药理作用及地龙人工养殖的最新研究进展.根据2015年版《中国药典》记载,地龙包括参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓.目前的研究表明,已有很多学者以地龙线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)与16S rDNA基因作为DNA条形码进行地龙品种的鉴别,还运用了X射线衍射Fourier谱法及线粒体中12S rRNA基因作为分子标记来鉴定地龙品种,其鉴定方法还需进一步研究.目前已建立起多种地龙药材质量的控制方法,包括地龙HPLC指纹图、高效毛细管电泳特征图谱、酶活性为指标评价地龙药材质量及以灰关联度模型评价地龙药材质量等方法.地龙主要的化学成分包括蛋白质、氨基酸、酶类、脂类、微量元素、核苷酸等化合物,其主要药理作用有平喘降压、解热镇痛、抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、增强免疫等.地龙的主要药效成分包括地龙蛋白、酶类、氨基酸、微量元素等,在有的药理作用中具体哪种成分发挥作用及其作用机制尚未明确,还需进一步深入研究.有关地龙的人工养殖鲜有报道,其养殖技术尚未成熟,规范化人工养殖地龙还处于摸索阶段.目前对地龙的研究还不足,使其具有广阔的研究和开发的前景.本文综述了近年来地龙的研究进展,为地龙的进一步研究提供参考依据.

目的 研究不同产地苣荬菜的高效毛细管电泳(HPCE)指纹图谱.方法 区带毛细管电泳法的条件为:未涂层石英毛细管柱(56 cm × 75 μm,有效长度51 cm),以20 mmol· L-硼砂-0.5 mol·L-1硼酸-18 mmol·L-1α-环糊精(pH8.5)作为缓冲溶液,工作电压15 kV,压差进样(高度11.5 cm),进样时间20 s,检测波长214 nm.结果 建立了苣荬菜的HPCE指纹图谱,对其进行相似度评价和聚类分析;在指纹图谱中有9个共有峰,并指认了其中的3个共有峰;除德州平原样品的相似度小于0.9外,其余10个产地样品的相似度均大于0.9;聚类分析将11个产地的样品分为两类.结论 所用方法简便、准确、重复性好,可为苣荬菜药材的质量评价提供参考.