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水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用
编辑人员丨2023/8/6
目的 水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法.方法 针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化.结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×104拷贝、MEV每微升3.02×104拷贝和CDV每微升1.72×105拷贝.临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致.结论 建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品.
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编辑人员丨2023/8/6
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肉食兽阿留申病毒VP2和NS1蛋白功能区回顾及比较分析
编辑人员丨2023/8/5
水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)是引起水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AD)的病原体,归属肉食兽阿留申病毒基因Ⅰ型,是主要研究的阿留申病毒种.AMDV结构蛋白VP2与病毒趋性、致病性和宿主范围密切相关,非结构蛋白NS1在病毒的复制、转录调控和衣壳组装过程中起重要作用.本文首先回顾了与AMDV的复制、致病性、宿主范围和抗原性相关的VP2、NS1功能位点及区段的研究进展,在此基础上,与近年来发现的其它5种肉食兽阿留申病毒对应位点、区段进行比对分析,有助于认识肉食兽阿留申病毒蛋白功能区的自然变异和预测病毒的未知功能区,为阿留申病毒的蛋白功能研究和疫苗株筛选提供新的视角.
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编辑人员丨2023/8/5
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水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病-毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测.方法 根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,并进行特异性、敏感性和稳定性分析.结果 建立的标准曲线在1.0 ×102拷贝/μL至1.0×108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数(r2)大于0.994.该方法检测的灵敏度为102拷贝/μL,且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应,特异性良好.重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3％,重复性良好.利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示,中国部分地区的AMDV阳性率为81.5％.结论 本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR检测方法,可用于AMDV的临床检测和流行病学调查.
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编辑人员丨2023/8/5
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貉源阿留申病毒全基因组测序及末端序列分子特征分析
编辑人员丨2023/8/5
貉源阿留申病毒(Raccoon dog and arctic fox amdoparvovirus,RFAV)是自然感染貉和蓝狐的新种阿留申病毒(Amdoparvovirus),为测序RFAV全基因组序列,预测分析RFAV末端发夹结构序列分子特征.本研究采用分段克隆成功获得3株长4 832nt、4 827nt、4 830nt的RFAV全基因组序列,分别命名为RFAV-Y9J、RFAV-RD15、RFAV-HS-R,利用在线软件预测RFAV末端序列二级结构,并与水貂阿留申病毒(AMDV)末端序列进行同源性比对.结果显示阿留申病毒种间、种内3'末端基因组序列保守性强,均存在116nt的Y型发夹结构;RFAV-Y9J与RFAV-RD15毒株5'末端分别存在310nt、305nt的U型发夹结构,RFAV和AMDV种内5'末端基因组序列保守性强,而种间5'末端基因组序列有较大变异.本研究首次完整测序了 RFAV的3'和5'末端序列,为其他种阿留申病毒的末端序列扩增提供一种有效方法,为构建RFAV的全基因组序列感染性克隆奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
