目的 水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法.方法 针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化.结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×104拷贝、MEV每微升3.02×104拷贝和CDV每微升1.72×105拷贝.临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致.结论 建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品.

目的 探讨水貂肠炎细小病毒(mink enteritis virus,MEV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)灭活后的联合免疫效果.方法 用甲醛灭活MEV-L和CDV-L弱毒株,固定MEV-L的血凝效价为26,与CDV-L病毒液(CDV-L TCID50 10-529/mL)分别按1∶1(Ⅰ组)、1∶2(Ⅱ组)、1∶3(Ⅲ组)的量混合,加入10％氢氧化铝胶,充分混匀后免疫大鼠,均为1 mL/只.分别于免疫前及免疫后第7、14、30、60、90天采血,分离血清,采用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和间接ELISA检测血清MEV抗体效价,血清中和试验和间接ELISA检测血清CDV抗体效价.结果 大鼠在免疫后7d时产生MEV和CDV抗体,30 d时抗体效价最高,随后下降,90 d时抗体效价仍较高;Ⅰ组CDV抗体效价较其他两组高.结论 3组不同比例的CDV和MEV联合免疫大鼠均可产生较高的抗体水平,其中以1∶1比例的免疫效果最佳.

目的 建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病-毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测.方法 根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,并进行特异性、敏感性和稳定性分析.结果 建立的标准曲线在1.0 ×102拷贝/μL至1.0×108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数(r2)大于0.994.该方法检测的灵敏度为102拷贝/μL,且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应,特异性良好.重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3％,重复性良好.利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示,中国部分地区的AMDV阳性率为81.5％.结论 本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR检测方法,可用于AMDV的临床检测和流行病学调查.

水貂冠状病毒(Mink coronavirus,MCoV)属于冠状病毒科α冠状病毒属的成员,通常会引起以卡他性腹泻为主要症状的水貂流行性卡他性胃肠炎(Mink epizootic catarrhal gastroenteritis,ECG).该病已在各国许多貂场暴发,给养貂业造成巨大经济损失.本文总结了自1975年报道ECG以来,水貂冠状病毒的研究进展,包括MCoV的基因组结构、遗传进化分析、受体特点及ECG的诊断及防治,以期引起人们对水貂冠状病毒的重视,为水貂冠状病毒病的防控提供参考.

本研究旨在研究水貂博卡病毒(Mink bocavirus,MBoV)在山东省的流行状况及基因特征.采用PCR对采自山东省境内水貂养殖场的85份水貂腹泻样品进行MBoV检测,挑选1份单阳性样品进行全基因扩增,使用MegAlign进行序列同源性比对分析,利用DNAMAN V6对基因组5'末端和3'末端回文结构进行预测,应用MEGA V6进行遗传进化分析.结果表明,所采集的腹泻样品中MBoV阳性率为3.5％(3/85),其中1份为MBoV单阳性,2份为MBoV与水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)双阳性.获得MBoV全基因序列1条(SDMBoV2020),全长5252 bp;经分析,5'-和3'-UTR分别由98和145 bp短回文序列组成,具有典型的细小病毒末端的茎环样结构;基因组含有3个ORFs,分别编码非结构蛋白NS1、NP1以及结构蛋白VP1和VP2;SDMBoV2020与NCBI登录的MBoV参考毒株KU950356各编码基因的推导氨基酸序列同源性较高,为98.5％～99.0％;基于MBoV全基因序列构建的系统发育进化树也显示,SDMBoV2020和参考毒株KU950356株同处于MBoV 1型基因群分支上,亲缘关系较近.

[目的]本研究旨在研究水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的基因组遗传进化特征.[方法]对采自山东境内水貂养殖场的109份水貂腹泻样品进行MEV的分离和鉴定,利用血凝和血凝抑制试验、多步生长曲线绘制以及蛋白的三级结构模拟等,对分离毒株生物学特性进行分析,通过重叠PCR对分离株进行全基因扩增,使用MegAlign进行序列同源性比对分析,利用DNAMAN V6对基因组5'末端和3'末端回文结构进行预测,应用MEGA V6进行遗传进化分析.[结果]共分离得到5株病毒,经电镜观察和间接免疫荧光试验鉴定为MEV毒株,分别命名为MUTQS-1-5,GenBank 登录号分别 为 OK275645.OK275646、OK275647、OK275648 和 OK275649;各分离株5'-和3'-UTR分别由长回文序列组成,具有典型的细小病毒基因组末端的茎环样结构,NS1和VP2基因的推导氨基酸序列存在多个非同义突变位点,其中NS1蛋白的E/Q545V位氨基酸突变,以及VP2蛋白的F267Y、Y324I位氨基酸突变为首次在MEV上发现;生物学特性分析表明,上述突变并未明显改变病毒的血凝及血凝抑制效价、生长趋势和病毒粒子的空间构象.全基因序列系统发育进化树也显示,本次分离株处于同一分支上,与山东分离株SDNH亲缘关系最近.[结论]本研究报道了包含新型变异位点的MEV毒株的基因组特征,试验初步证实了新型变异位点的出现并未改变病毒的血凝性、抗原性以及在易感细胞内的增殖能力.以上研究结果为进一步开展病毒的流行病学与变异规律研究奠定了基础.

三、犬细小病毒3.兽疫流行学a.宿主范围 有关自然宿主范围和影响地方流行性和自然疫源性的因素的资料有限.犬是主要宿主,其它犬科包括鬣狼、丛林犬、郊狼和食蟹狐等也有发病.1979年还报导了由一种细小病毒引起的水貂严重性肠炎.水貂的分离物对犬具有致病性.浣熊也可能易感CPV.家猫对实验性CPV感染具有易感性,但患病不明显.尽管猫与CPV病犬频繁密切接触,但此种犬的病毒从未使猫发病.由于FPV和CPV之间有交互的抗原关系,因而关于野生动物对FPV的易感性的血清学调查均未得到确切结论.