目的:探讨1个Hunter综合征家系的临床表型和遗传学特征，并为其构建永生化类淋巴母细胞系。方法:选取2022年7月就诊于西安市儿童医院的1例Hunter综合征患儿及其家系成员(2代共6人)作为研究对象。回顾性分析患儿的临床资料，对其进行家系全外显子组测序，对候选变异进行Sanger测序家系验证，并进行生物信息软件分析。通过EB病毒转染构建患儿及其父母的外周血B淋巴细胞永生化细胞系并进行酶活性分析。结果:患儿为5岁7月龄男性，表现为手足关节不能伸直、四肢关节大，3月龄出现疝气、舟状头、桶状胸等。患儿的舅舅表现为四肢关节不能伸直、听力差、失明、右侧腹股沟斜疝等。基因检测显示患儿及其舅舅均携带 IDS基因(NM_000202.8)c.823G>A(p.D275N)变异。生物信息学分析表明，D275是一个具有高度保守性的位点，D275N变异可能会影响蛋白质空间构象的稳定性，从而降低酶的催化活性。患儿及其父母的永生化类淋巴母细胞系在构建过程中细胞体积增大、呈不规则形状，周围存在毛刺状结构和聚团生长。患儿永生化类淋巴母细胞的IDS酶活值低于检测限。根据美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)相关指南， IDS: c．823G>A(p.D275N)被评级为可能致病变异(PS3＋PM2_Supporting＋PM5＋PP1＋PP3)。 结论:IDS：c.823G>A考虑为该Hunter综合征患儿手足关节不能伸直、四肢关节大的遗传学病因。永生化细胞系的构建为进一步研究上述变异对IDS功能的影响提供了细胞模型。

目的:通过构建携带突变的永生化淋巴细胞系,探讨原发性高血压患者线粒体tRNAMet(以下简写为m.)4435A＞G基因突变和YARS2 c.5750A＞C基因突变对线粒体功能的影响.方法:根据临床表现、线粒体DNA全序列以及YARS2外显子测序结果,寻找并确定含有m.4435A＞G以及YARS2基因突变的先证者,并对其家系成员进行拓展筛查.采集确诊家系的外周静脉血标本,并将血液中的淋巴细胞转化为永生化类淋巴母细胞系,经过一段时间的培养后进行线粒体膜电位(MMP)测试和细胞内活性氧(ROS)检测,Northern blot印记杂交实验等一系列反映细胞功能的相关实验.结果:线粒体DNA全序列扩增检测确定含有m.4435A＞G以及YARS2基因突变的先证者和其家庭成员,进一步的种系发生学分析发现4435位点的保守性指数高达100%.成功建立永生化淋巴细胞系,tRNA稳态水平结果显示,携带m.4435A＞G突变的样本tRNAMet稳态水平明显降低,携带YARS2 c.5750A＞C突变样本的tRNATyr稳态水平亦明显降低,且双突变样本的tRNAMet降低量要多于单突变样本;与对照组相比,含有m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C基因突变的细胞株其ROS水平均升高,且双突变的升高水平大于单突变,差异均有统计学意义(P＜0.05);m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C基因突变细胞株中MMP降低水平明显大于对照组(P＜0.05).结论:m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C突变分别引起tRNAMet和tRNATyr的代谢异常,造成线粒体翻译缺陷,ROS水平上升,MMP水平下降,并且核基因突变对线粒体突变具有加重作用,最终导致细胞功能障碍.

目的 探讨血小板CD36缺失个体永生化淋巴母细胞株的构建及验证方法.方法 选择2012年1月至2018年1月经相关检测确定为血小板CD36缺失的8例个体为研究对象.其中,6例为于南宁中心血站参与献血的无偿献血者,1例为广西923医院收治的血小板输注无效(PTR)患者,1例为广西壮族自治区妇幼保健院收治的胎儿/新生儿同种免疫血小板减少症(FNAIT)患儿母亲.全部受试者年龄为15～66岁,研究前期经流式细胞术与血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)及CD36基因分型等技术的检测,鉴定为血小板CD36缺失者,其中1例为CD36基因538T>C突变杂合子,3例为380C>T突变杂合子,1例为329-330del突变纯合子,3例为329-330del突变杂合子.采集受试者肝素抗凝血5 mL,并且分离淋巴细胞.采用EB病毒(EBV)与环孢素处理血小板CD36缺失个体的外周血淋巴细胞,获得永生化淋巴母细胞株,稳定传代后冻存,并且对这些细胞株进行复苏活性与支原体检测,同时进行CD36基因的测序验证.本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学会赫尔辛基宣言》的要求,征得受试者的知情同意,并与之签署知情同意书.结果 ① 受试者外周血淋巴细胞经EBV与环孢素处理后,继续培养7 d后,细胞母细胞化,细胞边缘多刺,部分细胞凝集呈团状.持续更换全培养液约1个月,细胞大量增殖,生长旺盛,肉眼可见较多克隆球形成,成功获得CD36缺失永生化淋巴母细胞株.②CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代20代后,冻存于液氮;全部CD36缺失永生化淋巴母细胞株均复苏成功,倒置相差显微镜下观察细胞株生长状态良好.③CD36缺失永生化淋巴母细胞株支原体检测结果示阴性.④ 对CD36缺失永生化淋巴母细胞株DNA进行PCR扩增测序结果显示,其与建株前血小板CD36缺失个体的CD36基因型完全一致,没有发生基因突变.本研究建立的CD36缺失永生化淋巴母细胞株基因类型包括CD36基因538T>C突变杂合子(1例),380C>T突变杂合子(3例),329-330del突变纯合子(1例),329-330del突变杂合子(3例).结论 CD36缺失永生化淋巴母细胞株传代稳定,血小板CD36缺失个体的基因能够稳定地被保存,并且为CD36基因相关的血小板免疫学等方面研究提供永久性实验材料.