目的:探讨海风藤提取物(KPSE)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用IL-1β处理大鼠软骨细胞建立软骨细胞损伤模型。0.1、1.0、10.0 mg/ml浓度KPSE与10 ng/ml IL-1β处理细胞(分别记为KPSE-L+IL-1β组、KPSE-M+IL-1β组、KPSE-H+IL-1β组)。将anti-miR-con、anti-miR-499a、miR-con、miR-499a mimics转染至软骨细胞并加入10 ng/ml的IL-1β培养(分别记为IL-1β+anti-miR-con组、IL-1β+anti-miR-499a组、IL-1β+miR-con组、IL-1β+miR-499a组)。分别将anti-miR-NC、anti-miR-499a转染至软骨细胞后加入10 mg/ml的KPSE及10 ng/ml的IL-1β培养(分别标记为anti-miR-NC+KPSE-H+IL-1β组、anti-miR-499a+KPSE-H+IL-1β组)。噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测细胞活力，酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6表达，蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved-Caspase-3)表达，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小核糖核酸-499a(miR-499a)表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK- q检验。 结果:KPSE+L+IL-1β组、KPSE+M+IL-1β组、KPSE+H+IL-1β组细胞吸光度值显著高于IL-1β组(0.50±0.05、0.73±0.07、0.79±0.08比0.38±0.03)，cleaved-Caspase-3表达(0.71±0.07、0.57±0.05、0.48±0.04比0.83±0.08)、细胞凋亡率[(22.43±2.17)%、(16.38±1.54)%、(9.85±0.91)%比(27.86±2.61)%]、TNF-α[(61.02±6.23)、(40.56±3.57)、(30.15±2.86) pg/ml比(86.37±8.12) pg/ml]、IL-1β[(516.76±41.05)、(362.45±32.87)、(214.59±20.54) pg/ml比(637.15±53.32) pg/ml]和IL-6表达[(531.52±51.68)、(418.36±40.53)、(246.28±21.08) pg/ml比(584.11±55.05) pg/ml]显著低于IL-1β组，差异有统计学意义( F＝83.568、70.682、103.211、291.687、402.183、250.447， P<0.05)。KPSE+L+IL-1β组、KPSE+M+IL-1β组、KPSE+H+IL-1β组细胞miR-499a表达显著高于IL-1β组(0.53±0.05、0.78±0.07、0.93±0.09比0.34±0.03)，差异有统计学意义( F＝130.619， P<0.05)。IL-1β+miR-499a组细胞吸光度值显著高于IL-1β+miR-con组(0.78±0.06比0.37±0.02)，cleaved-Caspase-3表达(0.37±0.03比0.82±0.09)、细胞凋亡率[(11.56±1.04)%比(26.91±2.45)%]、TNF-α[(43.05±4.06) pg/ml比(85.61±8.17) pg/ml]、IL-1β[(317.81±27.54) pg/ml比(637.01±58.68) pg/ml]、IL-6表达[(264.59±24.13) pg/ml比(578.30±51.04) pg/ml]显著低于IL-1β+miR-con组，差异有统计学意义( t＝24.431、14.653、20.178、12.297、10.563、17.138， P<0.05)。anti-miR-499a+KPSE+H+IL-1β组细胞吸光度值显著低于anti-miR-NC+KPSE+H+IL-1β组(0.38±0.04比0.78±0.06)，cleaved-Caspase-3表达(0.78±0.07比0.46±0.04)、细胞凋亡率[(19.63±1.52)%比(10.23±1.01)%]、TNF-α[(63.22±6.24) pg/ml比(32.57±3.16) pg/ml]、IL-1β[(456.97±43.81) pg/ml比(204.61±18.26) pg/ml]、IL-6表达[(398.74±34.12) pg/ml比(257.19±22.41) pg/ml]显著高于IL-1β+miR-con组，差异有统计学意义( t＝16.133、12.041、17.599、13.431、15.125、25.022， P<0.05)。 结论:KPSE可降低IL-1β诱导的软骨细胞损伤，其机制可能与上调miR-499a表达有关。

目的 对海风藤Piperis kadsurae藤茎的化学成分进行研究,并对分离的化合物进行初步的神经保护活性筛选.方法 运用硅胶、ODS、和Sephadex LH-20等柱色谱以及反相制备型HPLC等各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,利用波谱学方法确定化合物结构.同时采用MTT和RTCA法,以白藜芦醇作为阳性对照,对化合物进行体外神经保护活性实验.结果 从海风藤藤茎的二氯甲烷和醋酸乙酯提取物中分离得到22个化合物,分别鉴定为puberulin(1)、(-)-acuminatin(2)、dihydrocarinatin(3)、海风藤酮(4)、山蒟素C(5)、3-羟基苯甲酸苄酯(6)、2-羟基苯甲酸苄酯(7)、cherrevenol D(8)、trans-2,3-diacetoxy-l-[(benzoyloxy)methyl]-cyclohexa-4,6-diene(9)、(3R,4R)-4-O-acetyl-5-(benzoyloxymethyl)cyclohexa-1,5-diene-3,4-diol(10)、(-)-sootepoxide chlorohydrin A(11)、香草醛(12)、细辛醛(13)、β-细辛醚(14)、α-细辛醚(15)、胡椒内酰胺D(16)、焦谷氨酸甲酯(17)、三羟基异黄酮(18)、去氢木香内酯(19)、木香内酯(20)、spathulenol(21)、β-谷甾醇(22).化合物2、4、19、21对体外神经保护的半数效应浓度(median effective concentration,ECs0)分别为11.1、27.3、32.9、29.3 μmol/L.结论 化合物3、6～8、19～20为首次从胡椒属植物中分离得到,化合物15、21为首次从海风藤中分离得到.其中化合物4的13C-NMR波谱数据为首次报道.化合物2、4、19、21对Aβ25-35诱导PC-12细胞损伤具有显著保护作用.

目的:观察海风藤醇提取物对慢性硬膜下血肿(CSDH)大鼠血管新生的作用及对血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响.方法:50只大鼠建立CSDH模型,3只死亡,40只建模成功,将建模成功大鼠随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只.10只大鼠仅开骨窗、缝合,作为假手术组.低、中、高剂量组大鼠腹腔注射低(10 μg/kg)、中(50 μg/kg)、高(100 μg/kg)剂量的海风藤醇提取物DMSO溶液,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等体积DMSO溶液(10 mL/kg),1次/d,连续给药14d.采用Zea Longa评分评价大鼠神经功能;核磁共振(MRI)扫描观察血肿体积;免疫组织化学染色法检测硬膜新生血管密度;Western blotting法检测硬膜组织中VEGF、bFGF蛋白表达水平.结果:与模型组比较,低剂量组大鼠神经功能评分、血肿外膜新生血管密度明显降低,硬膜下血肿体积明显缩小(P＜0.05);与低剂量组比较,中剂量组大鼠神经功能评分、血肿外膜新生血管密度明显降低,硬膜下血肿体积明显缩小(P＜0.05);与中剂量组比较,高剂量组大鼠神经功能评分、血肿外膜新生血管密度明显降低,硬膜下血肿体积明显缩小(P＜0.05).与模型组比较,低剂量组大鼠硬膜组织中VEGF、bFGF蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05);与低剂量组比较,中剂量组大鼠硬膜组织中VEGF、bFGF蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05);与中剂量组比较,高剂量组大鼠硬膜组织中VEGF、bFGF蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05).结论:海风藤醇提取物可改善CSDH大鼠神经功能,抑制其血管新生,且表现为剂量依赖性,推测其作用机制与抑制硬膜VEGF、bFGF表达有关.