目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对人结直肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的逆转作用机制.方法:培养人结直肠癌HCT-8细胞及HCT-8/5-FU耐药细胞,计算不同化疗药物的耐药指数(RI)和QFG的逆转倍数(RF);设立空白对照组(0 mg/mL)和不同浓度(0.25、0.5、1.0 mg/mL)QFG干预组;各组干预48 h后,通过罗丹明-123(Rho123)染色和多柔比星(DOX)染色检测细胞外排泵功能,通过克隆形成试验检测细胞存活能力,应用磷脂酰丝氨酸(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡,应用Cyto-ID染色检测细胞自噬,应用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(gP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、选择性自噬接头蛋白(p62/SQSTM1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3 Ⅱ的蛋白表达.结果:HCT-8/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星(DOX)和顺铂(DDP)均耐药,QFG可有效逆转化疗耐药,与空白对照组比较,不同浓度QFG显著增加Rho123、DOX和Cyto-ID的平均荧光强度(均P＜0.05);抑制细胞的克隆形成率(P＜0.05),提高细胞凋亡率(P＜0.05);和空白对照组比较,QFG抑制P-gP、p62的蛋白表达(P＜0.05),降低Bcl-2/Bax比值(P＜0.05),促进LC3-Ⅱ的蛋白表达(P＜0.05).结论:QFG促进细胞凋亡和自噬,抑制耐药细胞对化疗药物的外排泵功能,从而逆转多药耐药.

目的:观察清解防感颗粒预防甲型H1N1流感的临床疗效和安全性.方法:选取甲型H1N1流感密切接触者或易感人群200例,根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组100例.观察组在甲型H1N1流感流行期间连服3 d清解防感颗粒,对照组不服用任何药.对比分析30 d内两组研究对象的流感染病率,并观察是否有不良反应发生.结果:经过预防给药,观察组共有9例感染甲型H1N1流感,总染病率为9％;对照组共有23例感染甲型H1N1流感,总染病率23％,表明两组疗效差异具有统计学意义(P<0.01);对照组23例的淋巴百分率明显高于观察组9例(P<0.01);对照组23例其发热症状 、鼻塞症状及肌肉酸痛症状积分明显高于观察组9例(P<0.05).在试验期间未发现有任何不良事件的发生.结论:清解防感颗粒具有清热解毒,健脾益气,养阴扶正之功,可提高人体正气,抵御外邪入侵,在流感流行期间服用本品能够有效预防甲型H1N1流感的感染,发挥中医药未病先防的作用.

目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制.方法:体外培养人大肠癌SW620细胞,用不同浓度的QFG(0、0.5、1、2 mg/mL)作用于细胞,采用MTT法检测24、48 h后QFG对细胞增殖的抑制能力;在倒置显微镜下观察24 h后细胞形态变化;采用流式细胞术检测24 h后细胞周期;通过Hoechst 33258染色实验检测24 h后细胞凋亡情况;采用划痕实验检测0、6、12、24 h后细胞的迁移能力;通过Western blot方法检测24 h后细胞Ki-67、MMP-2及Cleaved-Caspase-3蛋白的表达.结果:①0、0.5、1、2 mg/mL浓度范围内,QFG对大肠癌SW620细胞增殖抑制率随时间及浓度的增加而增大,明显高于同一时间点对照组的细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05).②0.5、1、2 mg/mL QFG作用SW620细胞24 h后,细胞形态发生明显的改变,随着给药浓度的增高,细胞密度逐渐减少,悬浮细胞增多,部分细胞皱缩变园.③ 流式细胞术检测细胞周期发现,0.5、1、2 mg/mL QFG 组细胞G1期降低,S期增高,而G2期并没有明显的变化,各时期百分比与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),但并不呈剂量依赖关系.④ Hoechst 33258染色结果显示,随着QFG作用浓度增加,SW620细胞凋亡的形态学表现越明显.⑤划痕实验发现,0.5、1、2 mg/mL QFG能降低SW620细胞的迁移能力,划痕愈合率随着作用时间和QFG浓度增加而逐渐降低,呈现明显的时间和剂量依赖作用;与对照组比较,12 h和24 h划痕愈合率差异有统计学意义(P＜0.01).③与对照组比较,0.5、1、2 mg/mL QFG能显著降低Ki-67和MMP-2的蛋白表达,增加Cleaved-Caspase-3的蛋白表达,且呈现明显的剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:QFG具有抑制大肠癌SW620细胞增殖、诱导凋亡及抑制迁移的作用,其作用机制可能与下调Ki-67和 MMP-2蛋白表达及上调Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关.

目的 探讨清解扶正颗粒(Qingjie Fuzheng Granules,QFG)对血管生成因子A(vascular endothelial growth factor,VEGF-A)诱导的肿瘤血管生成的抑制作用及其作用机制.方法 体外培养肠癌细胞HCT-8、肝癌细胞Huh7和胃癌细胞MGC80-3,经不同剂量(0、0.25、0.5、1、1.5、2 mg/mL)QFG干预处理后,用MTF法检测细胞活力,Western blot实验检测VEGF-A蛋白表达;体外培养脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),HUVECs分为对照组、诱导组(VEGF-A 10 ng/mL)、VEGF-A 10 ng/mL+QFG 0.5 mg/mL组、VEGF-A 10ng/mL+QFG 1 mg/m L组和VEGF-A 10 ng/mL+QFG 2 mg/mL组,通过MTT、DAPI染色、划痕实验、Transwell实验,管腔形成及Western blot实验分别检测细胞活力、凋亡、迁移、血管生成和VEGFR-2蛋白表达.结果 QFG可以抑制肠癌细胞HCT-8、肝癌细胞Huh7和胃癌细胞MGC80-3的细胞活力以及蛋白VEGF-A的表达,且具有统计学差异;QFG能够抑制VEGF-A诱导HUVECs的增殖,促进细胞凋亡,抑制其损伤修复、迁移及管腔生成能力,也可以下调蛋白VEGFR-2的表达水平,具有统计学差异.结论 QFG可靶向VEGF-A抑制肿瘤血管生成.