目的:建立基于超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）多反应监测（MRM）模式的温心方中人参皂苷Rb1、肉桂酸、芍药苷及小檗碱同时定性定量的分析方法，为温心方新药研发提供评价方法。方法:采用Waters ACQUITY UPLC TM HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.03%甲酸水溶液，梯度洗脱，利用三重四极杆在MRM扫描模式下检测，以保留时间及相对丰度比（定性离子对/定量离子对）定性，以定量离子对峰面积进行定量研究。 结果:温心方中4种有效成分均被定性检出且线性关系良好；准确度、精密度、重复性、稳定性良好；回收率为96.24%~104.19%， RSD为1.29%~3.27%。 结论:该方法简便、准确、快速、灵敏，可用于温心方中4种有效成分的定性定量研究。

目的 研究温心方治疗冠心病抑郁症的分子机制,探索温阳益心调神法作用机理.方法 通过TCMSP、ETCM、化源网、PubChem、SwissTarget Prediction、Gene Cards、DrugBank、TTD 等获取中药有效成分、药物和疾病靶点.通过 STRING11.5、Cytoscape3.9.1 获取核心成分和核心靶点,构建蛋白质-蛋白质互相作用(protein-protein interaction,PPI)和"药物-成分-核心靶点"网络.通过Metascape进行富集分析,筛选通路.通过Cytoscape3.9.1 算法分析,获取蛋白受体(关键基因)和小分子配体(逆靶向化合物),由RCSB PDB、TCMSP、PubChem、AutoDockTools1.5.6、pymol等进行分子对接及可视化呈现.结果 温心方有效成分 103个,核心成分5 个,分别为五味子酯乙(gomisin B)、黄芩素(baicalein)、柚皮素(naringenin)、维生素E(vitamin E,VE)、前列腺素B1(prostaglandinB1,PGB1).作用靶点608 个,核心靶点 138 个,主要募集在磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end product,AGE)-晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycosylation end products,RAGE)通路、叉头盒转录因子(forkhead box,FOXO)通路、两面神激酶(janus kinase,JAK)-信号转导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路,涉及细胞增殖与凋亡、细胞形态调节与骨架重构、细胞周期调节、轴突运输、血管内皮生长、血管紧张度等细胞功能和生物进程.关键基因和逆靶向化合物对接构象合理,对接结果可行.结论 黄芩素、柚皮素、维生素E等可能是温心方加减治疗冠心病抑郁症的重要成分,通过VEGFA、NFKB1、MAPK1 等靶点调控AGE-RAGE通路、JAK-STAT通路、PI3K-AKT通路、FOXO通路,发挥药理作用.温阳益心调神法通过降低心肌细胞、神经元的氧化应激反应,促进抗氧化机制启动,清除氧化应激物质,抑制炎症过程,从而调节细胞增殖、凋亡的动态平衡,维持机体稳态,保护血管内皮生长、改善神经功能,达到治疗冠心病抑郁症的目的.该研究也间接表明冠心病和抑郁症的共病机制与氧化应激有关.

目的 从人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外泌体及人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)表型转化角度探讨温心方治疗冠心病的可能作用机制.方法 30只SD大鼠给予温心方水煎剂33.75 g/(kg·d)灌胃,连续7天,末次灌胃2 h后腹主动脉取血制备含药血清.取对数生长期的HUVECs,分别设立对照组、模型组及温心方高、中、低剂量组,对照组使用完全培养基培养,温心方高、中、低剂量组分别用5％、15％、25％温心方含药血清培养24 h后加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养24h,模型组仅加入50mg/L ox-LDL培养24h造模.各组高速离心分离获取HUVECs外泌体,透射电镜观察外泌体形态,BCA法测定外泌体蛋白浓度,检测外泌体粒径,Western Blot法检测外泌体标志蛋白溶酶体相关膜蛋白3(CD63)、肿瘤易感基因101(TSG101)表达,qRT-PCR法检测外泌体miR-145表达.各组HUVECs外泌体50 ng与HAVSMCs共培养24h,观察外泌体摄取,于6、12、24、48 h应用MTT法检测HAVSMCs细胞增殖率,Transwell法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α蛋白(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)水平.结果 成功提取HUVECs外泌体,在镜下可见HAVSMCs细胞摄取HUVECs外泌体.模型组HUVECs外泌体中CD63、TSG101及miR-145表达较对照组显著减少(P＜0.01),温心方组各剂量组CD63、TSG101及miR-145表达较模型组显著升高,且温心方高剂量组在升高CD63、miR-145方面优于温心方低、中剂量组(P＜0.05或P＜0.01).各组外泌体与HAVSMCs共培养后,与对照组比较,模型组HAVSMCs细胞增殖率、细胞凋亡率增加,细胞迁移个数增多,α-SMA、SM22α蛋白表达降低、OPN升高(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,温心方各剂量组在24、48 h时细胞增殖率及细胞凋亡率均降低,12、24、48 h时细胞迁移个数减少,α-SMA、SM22α表达升高,OPN表达降低(P＜0.05或P＜0.01);与温心方中、低剂量组比较,温心方高剂量组在24、48 h细胞增殖率降低,在12、24、48 h细胞迁移个数降低,α-SMA、SM22α表达升高,OPN表达降低(P＜0.05).结论 温心方含药血清可通过促进HUVECs外泌体释放,抑制HAVSMCs表型转化,减轻细胞增殖迁移,从而发挥治疗冠心病作用.

目的 采用复杂网络方法 探究温心方治疗冠状动脉狭窄的作用机制,为中药新药研发提供参考.方法利用多种中医药知识、药物靶点、疾病靶点数据库筛选温心方有效成分,构建温心方成分-靶点网络及冠状动脉狭窄疾病-靶点网络,采用Cytoscape软件整合并构建成分-疾病-靶点蛋白质相互作用(PPI)网络,对该网络进行拓扑分析及核心靶点筛选,然后进行生物过程及信号通路的富集分析.结果 温心方含148种药物成分,可作用于226个靶点基因,冠状动脉狭窄共计471个疾病靶点,其中66个与温心方作用靶点重合.PPI网络及拓扑分析显示,温心方作用于冠状动脉狭窄的核心靶点380个,涉及ErbB信号通路、B细胞抗原受体信号通路、HIF-1信号通路、TGF-β信号通路、凝血活动、G1/S细胞周期转换、Wnt信号通路等多种生物过程及信号通路.结论 温心方治疗冠状动脉狭窄多靶点、多途径的作用网络,提示其可能通过抗凋亡、调控细胞周期、抗炎、抗凝、促血管新生、保护内皮细胞发挥治疗作用.

目的 基于网络药理学探讨温阳益心法(温心方)治疗冠心病(CHD)作用机制.方法 检索TCMSP数据库检索各中药化合物(OB≥30％、DL≥0.18),将整合的数据导入Cytoscape 3.5.1软件,构建"中药-化合物-靶点"可视化网络图.登录DisGeNET、Genecard、DrugBank、OMIM、GAD、TTD数据库对冠心病基因靶点进行检索,并将疾病与药物的交集靶点录入String网站及Cytoscape 3.5.1构建PPI网络,将靶点基因导入Metascape网站进行GO及KEGG富集分析对通路进行预测,运用AutoDock4.2,PyMOL2.3.2软件对核心靶点进行分子对接验证.结果 共筛选出97种化合物,PPI网络包含745个节点、10 303条边,核心靶点为VEGFA、NOS3、KDR、PTGS2等.与冠心病相关的核心通路共4条,分别是PI3K-Akt、NF-KB、剪切与动脉硬化、HIF-1.结论 温心方中豆甾醇、槲皮素等关键化合物可能通过VEGFA、NOS3等靶点对PI3K-Akt、NF-KB、HIT-1等通路进行调控从而对冠心病起到治疗作用.

目的:观察温心方对动脉粥样硬化(AS)大鼠第一间歇期/合成期(G1/S)细胞周期转换关键靶点的作用,揭示温心方治疗AS的作用机制.方法:无特定病原体(SPF)级Wistar大鼠90只,随机分为正常组6只和造模组84只,模型组给予高脂饲料(4％胆固醇,0.5％胆酸钠,0.2％丙基硫氧嘧啶,10％猪油,5％白糖,80.3％基础饲料)喂养60 d,每7d腹腔注射40万U·kg-1维生素D3,连续3次.成模大鼠随机分为模型组、温心方高、中、低剂量组及瑞伐舒他汀组,每组6只,温心方高、中、低剂量组及瑞伐舒他汀组分别给予24,12,6 g·kg-1温心方水煎剂及1.8 mg·kg-1瑞舒伐他汀灌胃治疗30d,模型组灌胃等量蒸馏水.治疗后观察各组大鼠一般情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),总胆固醇(CHO),计算粥样硬化指数(AI),苏木素-伊红染色观察冠状动脉及主动脉病理形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉E2F转录因子1(E2F1),磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb),细胞分裂周期因子25(Cdc25),细胞周期素E(CyclinE),细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白及mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠冠状动脉及主动脉内膜增厚,平滑肌增殖,粥样斑块形成,HDL-C水平显著降低(P＜0.01),LDL-C,CHO,AI水平显著升高(P＜0.01),主动脉E2F1,Cdc25,p-Rb,CyclinE,CyclinD1蛋白及基因表达均有所上升(P＜0.05);与模型组比较,温心方各剂量组及瑞伐舒他汀组大鼠冠状动脉及主动脉内膜增生及管腔变窄不明显,LDL-C,CHO,AI水平显著降低(P＜0.01),主动脉E2F1,Cdc25,p-Rb,CyclinE,CyclinD1蛋白及基因表达均有不同程度的下降(P＜0.05).结论:温心方可显著抑制AS大鼠主动脉G1/S细胞周期关键调控蛋白及基因表达,调控G1/S细胞周期转换,减轻血管平滑肌及内膜增生.

目的:揭示温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的改善作用及其对沉默信息调节因子1(SIRTI)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)/雌激素受体相关受体α(ERRα)能量信号通路的作用.方法:SPF级Wistar雄性大鼠90只,随机分为假手术组、模型组、温心方低、中、高剂量组;温心方低、中、高剂量组分别给予0.99、1.98、3.96 g? kg-1的颗粒剂灌胃,假手术组和模型组均予以等体积生理盐水灌胃;预给药21 d后,模型组及温心方组采用冠状动脉左前降支结扎30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型,假手术组只穿线,不结扎;TTC染色观察心肌梗死面积,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态,试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织ATP含量及线粒体复合体Ⅳ(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组心肌纤维断裂,排列紊乱,细胞胞质水肿,细胞核出现固缩、偏移;CK-MB、LDH活性明显升高(P＜0.05,P＜0.01),ATP含量及CCO、SDH活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01),心肌组织心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、mtTFA mRNA及蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,温心方预处理各组心肌梗死面积显著缩小,且以高剂量组最显著(P＜0.01),心肌组织病理形态有所改善,CK-MB、LDH活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01),ATP含量及CCO、SDH活性均有提高,以高剂量组最显著(P＜0.01),心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达均有不同程度提高(P＜0.05,P＜0.01).结论:温心方可通过调控SIRT1/PGC-1α/ERRα信号通路,改善心肌线粒体能量代谢,保护心肌缺血再灌注损伤.