目的:探讨溶血磷脂酸酰基转移酶D（APGAT4）对肝细胞癌生长和仑伐替尼耐药的影响，为肝细胞癌临床治疗提供新的靶点。方法:TCGA数据库中分析APGAT4的表达，及其与肝细胞癌患者预后的关系；免疫组化检测APGAT4在肝癌组织的表达，并分析其表达强弱与患者预后的关系；GEO分析仑伐替尼耐药后APGAT4的表达；使用CCK8、EdU、细胞周期，细胞凋亡实验检测APGAT对肝癌细胞生长和仑伐替尼耐药的影响；使用慢病毒构建APGAT4稳定敲低细胞株并建立裸鼠皮下瘤模型，予仑伐替尼治疗，评估APGAT4对肝癌仑伐替尼疗效的影响。多组间数据比较使用方差分析。结果:APGAT4的mRNA水平和蛋白在肿瘤组织显著高于癌旁组织，提示肝癌患者预后不良（ P < 0.05）。使用小干扰RNA可以显著敲低肝癌细胞Hep3B和HCCLM3中APGAT4的mRNA和蛋白表达水平。APGAT4敲低组肝癌细胞（Hep3B、HCCLM3）与对照组相比，增殖能力明显受抑（ P < 0.05），细胞周期阻滞于G 2/M期。GEO数据分析提示APGAT4在仑伐替尼耐药细胞中表达显著上调（ P < 0.05）。与对照组相比，APGAT4敲低组肝癌细胞（Hep3B，HCCLM3）更容易被仑伐替尼诱导细胞凋亡（ P < 0.05）。此外，在肝癌裸鼠皮下移植瘤模型中，与对照组相比，仑伐替尼显著抑制APGAT4稳定敲低组肿瘤生长和诱导细胞凋亡（ P < 0.05）。 结论:APGAT4促进肝癌细胞的生长和仑伐替尼耐药，是肝癌治疗的潜在治疗靶点。靶向APGAT4治疗有助于抑制肝癌生长和仑伐替尼耐药。

解毒活血汤出自王清任《医林改错》,是国医大师张琪教授根据急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)热毒瘀滞病机从古方中筛选出应用临床数十年的有效方剂,该文拟从调控铁死亡(ferroptosis)角度阐释解毒活血汤对AKI的治疗作用及其潜在机制.将 32 只雄性C57BL/6 小鼠随机分为 4 组:正常组、模型组及解毒活血汤低、高剂量组,每组 8 只.由于临床AKI的治疗普遍以支持或替代疗法为主,尚无特效药,故该实验未设置阳性药物组.解毒活血汤低剂量组对应 0.5 倍的临床等效剂量,高剂量组则对应临床等效剂量,予以每日晨间灌胃,连续干预 7 d;正常组及模型组小鼠分别灌以相应体积的纯水.给药第 5 天时,除正常组外其余各组小鼠均按 20 mg·kg-1 的剂量腹腔注射顺铂溶液进行造模,正常组给予生理盐水注射.造模72 h后取材,留取小鼠血清及肾脏组织,检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平以评价小鼠肾脏功能变化;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清肾损伤分子 1(kidney injury molecule 1,KIM-1)的表达水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察小鼠肾组织病理学改变;过碘酸雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色法观察肾脏糖原沉积变化;普鲁士蓝染色观察肾组织铁沉积水平;生化比色法检测肾组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及过氧化氢酶(catalase,CAT)活力.采用Wes-tern blot法检测小鼠肾组织中酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶 3(lysophosphatidylcholine acyltransferase 3,LPCAT3)及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)蛋白表达;免疫组化法检测YAP在肾组织中的定位与相对表达;再采用实时荧光定量PCR法检测ACSL4及谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)mRNA表达.结果显示,与正常组相比,顺铂诱导的AKI小鼠血清中Scr、BUN、KIM-1水平显著升高;肾组织病理显示,模型组小鼠肾小管上皮细胞发生显著萎缩坏死脱落,肾小管刷状缘消失,管内大量蛋白管型填充,小管空泡样变性,肾间质增宽且可见水肿,肾脏结构严重损伤,肾小管损伤评分显著升高;肾组织部分区域有明显的铁沉积;肾组织GSH含量、SOD及CAT活力显著降低;同时,肾组织中铁死亡标志分子ASCL4、LPCAT3 显著升高,GPX4 显著降低,YAP显著上调.与模型组相比,高剂量解毒活血汤可有效保护肾脏功能,降低Scr、BUN、KIM-1水平,减轻肾脏病理损伤及糖原沉积和铁沉积;提升肾组织中GSH含量、SOD及CAT活力.进一步的机制研究表明,解毒活血汤组AC-SL4、LPCAT3 及YAP蛋白表达较模型组显著降低,而GPX4 水平显著升高.综上,解毒活血汤可以通过调控YAP/ACSL4 信号通路抑制铁死亡,对顺铂诱导的AKI发挥保护作用.

紫苏(Perilla frutescens)是一种重要食药同源油料作物,种子含油量高达46％-58％,其中α-亚麻酸(C18:3)含量占 60％以上.溶血磷脂 酸酰基转移酶(lysophosphatidic acid acyltransferase,LPAT)是植物种子三酰基甘油组装过程中的一类关键限速酶.本研究从紫苏发育种子中克隆了其编码基因(PfLPAT2),并利用qRT-PCR技术检测PfLPAT2基因在紫苏不同组织及不同发育时期种子的表达特性.构建PfLPAT2/GFP融合表达载体并通过农杆菌介导瞬时侵染本氏烟草叶片,检测PfLPAT2蛋白的亚细胞定位.构建大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体、酵母表达载体和组成型植物过表达载体,分别转化大肠杆菌突变株SM2-1、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)野生型菌株INVSc1和普通烟草(Nicotiana tabacum),分析PfLPAT2蛋白的酶活性及生物学功能.结果表明,紫苏PfLPAT2基因ORF为1 155bp,编码384个氨基酸.功能结构域预测显示PfLPAT2蛋白具有溶血磷脂酸酰基转移酶典型的保守区.PfLPAT2基因在紫苏根、茎、叶、花和开花后10、20、30、40 d的种子中均有表达,且在开花后20 d的种子中高表达.亚细胞定位结果显示PfLPAT2蛋白定位于细胞质.大肠杆菌功能互补测试表明,PfLPAT2可恢复SM2-1细胞膜脂生物合成,具有LPAT酶活性.与非转基因对照相比,转PfLPA4T2基因酵母的总油脂含量显著提高,且脂肪酸各组分的含量发生改变,油酸(C18:1)含量增加明显,预示PfLPAT2对C18:1具有较高的底物偏好性.转基因烟草叶片总脂肪酸含量比对照组提高了约0.42倍,C18∶1含量增加了约1倍.转基因株系总脂提高和脂肪酸组分的改变表明PfLPAT2异源表达可以促进宿主油脂合成和健康有益型脂肪酸(C18∶1和C18∶3)的积累.本研究为深入解析紫苏油脂特别是不饱和脂肪酸合成的分子调控机制和改良油料作物油脂品质提供理论依据和基因元件.