-
AGPS在神经胶质瘤细胞中的相互作用蛋白及作用模式
编辑人员丨2024/4/6
目的 探讨胶质瘤细胞(U251细胞)中癌基因烷基甘油酮磷酸合酶(AGPS)的相互作用蛋白及作用模式.方法 常规培养U251细胞并随机分为对照组、shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组,分别加入阴性对照慢病毒和不同沉默水平的AGPS shRNA慢病毒,用Western blotting法检测AGPS蛋白表达以验证沉默效率.通过免疫共沉淀技术和质谱技术鉴定AGPS相互作用的蛋白,用Western blotting法进行验证;用计算机模拟技术进行相互作用蛋白的同源模建并推测二者相互作用模式.结果 与对照组比较,shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组AGPS表达低(P均<0.05),且shR-AGPS-1组AGPS表达低于shR-AGPS-2组(P<0.05).将筛选获得的数据进行整理,初步判断不均一核糖核蛋白K(HNRNPK)为AGPS的靶蛋白.在AGPS抗体免疫共沉淀的细胞裂解物中可同时检测到AGPS蛋白、HNRNPK蛋白,表明AGPS与HNRNPK可形成复合体,二者均在细胞核中表达.计算机模拟结果显示AGPS和HNRNPK通过氨基酸残基以氢键和共轭、疏水键和静电力形式相互作用.结论 胶质瘤细胞中HNRNPK是AGPS的相互作用蛋白,氢键和共轭、疏水键和静电力相互作用可能是其主要的作用模式.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/4/6
-
AGPS基因沉默对神经胶质瘤细胞lncRNA、mRNA表达谱的影响及意义
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察沉默烷基甘油酮磷酸合酶(AGPS)表达对神经胶质瘤细胞长链非编码RNA (lncRNA)及其共表达mRNA表达谱的影响,并预测其生物学功能.方法 将神经胶质瘤U251细胞分为shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组和对照组,分别转染shR-AGPS-1、shR-AGPS-2和阴性对照慢病毒,筛选单克隆细胞后观察细胞形态.采用Western blotting法检测AGPS表达,基因芯片技术检测lncRNA及其共表达mRNA的差异表达谱,对lncRNA共表达mRNA进行基因本体(GO)及京都基因与基因组大百科全书(KEGG)通路富集分析,构建信号通路作用网络、全局信号转导网络、lncRNA对通路的调控网络.结果 与对照组比较,shR-AGPS-1组和shR-AGPS-2组细胞均出现团缩以及增殖抑制等变化,且shR-AGPS-2组变化更加显著.shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组细胞AGPS蛋白相对表达量均低于对照组,且shR-AGPS-2组降低更明显(P均＜0.05).与对照组比较,shR-AGPS-1组有73个lncRNA表达上调、107个lncRNA表达下调、13个mRNA表达上调、63个mRNA表达下调,shR-AGPS-2组266个lncRNA表达上调、233个lncRNA表达下调、61个mRNA表达上调、111个mRNA表达下调.GO富集分析显示共表达的mRNA主要参与细胞对缺氧的反应等生物学过程,KEGG富集分析显示晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体信号通路的富集度最高.信号通路作用网络和全局信号转导网络中连线较多的节点为磷脂酰肌醇三激酶(PI3K)信号通路、Toll样受体信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路等.incRNA对通路的调控网络中lncRNAAK093732处于网络调控的枢纽地位,细胞因子及其受体相互作用为差异lncRNA调控的核心通路.结论 沉默AGPS表达可通过引起神经胶质瘤细胞中相关lncRNA及其共表达mRNA的差异表达而影响细胞增殖和凋亡,其中PI3K、Toll样受体及VEGF信号通路可能是其主要靶点通路.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
