目的:检测胶质瘤组织中核不均一核糖核蛋白C(hnRNPC)表达，探讨hnRNPC对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:分别采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测西南医科大学附属医院神经外科2017年1月至2018年12月经病理证实为胶质瘤组织标本hnRNPC mRNA和蛋白表达，采用小干扰RNA及慢病毒转染U87细胞，干扰U87细胞hnRNPC的表达并检测干扰效率，Transwell侵袭实验及划痕实验检测侵袭和迁移能力的改变，Western blot检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达；在稳定干扰hnRNPC的基础上使用胰岛素样生长因子(IGF)-1激活PI3K/Akt信号通路并检测U87细胞侵袭和迁移能力的变化。两组之间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(SNK- q检验)。 结果:胶质瘤组织中hnRNPC表达为正常脑组织的(4.482±0.760)倍，差异有统计学意义( t＝－2.893， P<0.05)；稳定敲减hnRNPC后，Western blot检测实验组(sh-hnRNPC-1、sh-hnRNPC-2)较对照组(sh-Con)及空白组蛋白(Blank)表达分别下降(2.512±0.684)倍和(2.516±1.795)倍，差异有统计学意义( F＝81.256、70.863， P<0.05)，实验组(sh-hnRNPC)细胞迁移面积[(8.373±0.104)%]相对于对照组(sh-Con)细胞迁移面积[(16.610±0.440)%]和空白组(Blank)迁移面积[(17.867±0.570)%]明显减小，差异有统计学意义( F＝452.083， P<0.05)，实验组(sh-hnRNPC)穿过Transwell小室基底膜的细胞数目为(122.000±12.530)个，较对照组(sh-Con)细胞数目[(359.000±34.771)个]和空白组(Blank)细胞数目[(375.000±14.503)个]明显减少，差异有统计学意义( F＝114.944， P<0.05)，与瞬时敲减hnRNPC后结果一致。敲减hnRNPC后，各组细胞中PI3K、Akt表达无变化，差异无统计学意义( F＝0.388、2.590， P>0.05)，实验组(si-hnRNPC)p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显下调，分别降低了(2.060±1.046)倍和(3.087±0.514)倍，差异有统计学意义( F＝89.393、255.863， P<0.05)。稳定干扰hnRNPC，再加入IGF-1激活PI3K/Akt信号通路后，能逆转U87细胞侵袭和迁移能力。 结论:hnRNPC在胶质瘤组织的表达与胶质瘤病理级别呈正相关，胶质瘤病理级别越高，hnRNPC表达越高，提示hnRNPC可能参与胶质瘤的恶性发展；hnRNPC可通过PI3K/Akt信号通路调控胶质瘤细胞侵袭和迁移。

目的 探讨胶质瘤细胞(U251细胞)中癌基因烷基甘油酮磷酸合酶(AGPS)的相互作用蛋白及作用模式.方法 常规培养U251细胞并随机分为对照组、shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组,分别加入阴性对照慢病毒和不同沉默水平的AGPS shRNA慢病毒,用Western blotting法检测AGPS蛋白表达以验证沉默效率.通过免疫共沉淀技术和质谱技术鉴定AGPS相互作用的蛋白,用Western blotting法进行验证;用计算机模拟技术进行相互作用蛋白的同源模建并推测二者相互作用模式.结果 与对照组比较,shR-AGPS-1组、shR-AGPS-2组AGPS表达低(P均<0.05),且shR-AGPS-1组AGPS表达低于shR-AGPS-2组(P<0.05).将筛选获得的数据进行整理,初步判断不均一核糖核蛋白K(HNRNPK)为AGPS的靶蛋白.在AGPS抗体免疫共沉淀的细胞裂解物中可同时检测到AGPS蛋白、HNRNPK蛋白,表明AGPS与HNRNPK可形成复合体,二者均在细胞核中表达.计算机模拟结果显示AGPS和HNRNPK通过氨基酸残基以氢键和共轭、疏水键和静电力形式相互作用.结论 胶质瘤细胞中HNRNPK是AGPS的相互作用蛋白,氢键和共轭、疏水键和静电力相互作用可能是其主要的作用模式.

目的 检测妊娠期糖尿病患者血清中miR-873-5p、核内不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)的表达,分析二者与糖脂代谢和妊娠结局的关系.方法 回顾性选取2018年4月至2020年4月青岛市妇女儿童医院接收的80例妊娠期糖尿病患者为研究组,另选取年龄相仿、孕周相近的健康孕妇80名为对照组.采用qRT-PCR法检测血清miR-873-5p表达水平,酶联免疫吸附试验检测hnRNP K表达水平,同时检测并比较两组孕妇空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析孕妇血清miR-873-5p、hnRNP K与糖脂代谢指标和不良妊娠结局的相关性.ROC曲线分析血清miR-873-5p和hnRNP K联合对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的评估效能.结果 研究组的空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、总胆固醇、LDL-C、FINS、HOMA-IR、血清miR-873-5p水平均高于对照组,血清HDL-C和hnRNP K水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).妊娠期糖尿病患者血清miR-873-5p表达与空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C、FINS、HOMA-IR以及不良妊娠结局呈正相关(P＜0.05),与血清hnRNP K和HDL-C呈负相关(P＜0.05).血清hnRNP K与空腹血糖、HbA1c、甘油三酯、LDL-C、FINS、HOMA-IR以及不良妊娠结局呈负相关(P＜0.05),与HDL-C呈正相关(P＜0.05).血清miR-873-5p预测不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.765,灵敏度59.09％,特异度91.67％,血清hnRNP K预测的AUC为0.862,灵敏度93.18％,特异度77.78％,二者联合预测的AUC为0.882,灵敏度86.36％,特异度83.33％.结论 妊娠期糖尿病患者血清miR-873-5p水平升高,血清hnRNP K水平降低,二者与糖脂代谢及不良妊娠结局关系密切.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制.方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)和血管内皮生长因子A(VEGFA)的结合位点.HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1(OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA(OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组.采用小干扰RNA(siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中.利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平.6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1(MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1 组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平.结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点.管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1 组比较,OGD/R+ siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路.

目的 探讨hnRNPK与HPV16感染在宫颈上皮内瘤样变(CIN)中的作用及其交互效应.方法 选取2014年6月至2015年6月在山西省介休市建立的社区队列中经病理学确诊的正常宫颈(NC)女性67例和CIN患者137例(CIN Ⅰ患者69例、CINⅡ/Ⅲ患者68例)为研究对象.采用结构式问卷收集研究对象人口学资料及宫颈病变相关因素的基础上,采集宫颈脱落细胞和宫颈活检或手术组织,应用分子导流杂交法检测HPV16感染状况,并采用Western blot技术检测宫颈组织中hnRNPK蛋白表达水平.采用SPSS 23.0软件对资料进行整理分析,研究对象的人口学特征、相关因素、hnRNPK蛋白和HPV16感染在NC组、CIN Ⅰ和CINⅡ/Ⅲ组的差异通过x2检验、趋势x2检验、Kruskal-Wallis H检验进行比较;hnRNPK蛋白表达量的组间两两多重比较采用Bonferroni法;采用非条件logistic回归模型计算hnRNPK蛋白、HPV16感染与CIN的关联强度OR值及其95％CI,采用相加交互模型及交互效应指标评价hnRNP K蛋白和HPV16感染两因素在CIN中的交互效应.结果 CINⅡ/Ⅲ组HPV16感染率(41.2％)高于NC(10.4％)、CIN Ⅰ (14.5％),差异有统计学意义(P＜0.001),且随着CIN程度加重,HPV16的感染率呈上升趋势(趋势x2=18.512).hnRNPK蛋白表达量在NC组、CIN Ⅰ组和CINⅡ/Ⅲ组间差异有统计学意义(H=48.138,P＜0.001),且随着C1N程度加重呈上升趋势(趋势x2=21.765,P＜0.001).交互效应分析显示,hnRNPK蛋白高表达与HPV16感染在CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用(API=0.639,95％CI:0.083～1.196),在CIN Ⅰ组尚未发现存在类似交互作用.结论 hnRNP K蛋白高表达、HPV16感染均可能增加CIN的发生风险,且在高度CIN发生中存在正相加交互作用.

核内不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)是一种与DNA和RNA结合,调控多种基因表达和翻译的多功能蛋白分子.hnRNPK在RNA转录、翻译、剪切和稳定等生物过程中发挥重要作用,参与肿瘤的增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能.hnRNPK在多种肿瘤中异常表达,可作为癌基因或抑癌基因参与肿瘤发生、发展和转移等多种生物过程.尤其近年新发现肿瘤相关的hnRNPK-ncRNAs调控靶基因表达参与肿瘤发生发展,深入研究hnRNPK相关的ncRNAs在肿瘤中的表达情况、调控机制和生物学功能可为临床肿瘤诊断、治疗和预后提供新靶点.

目的:观察核不均一核糖核蛋白K(heterogeneous ribonucleoprotein K,hnRNP K)在健康体检者、慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液和尿液中的表达差异,探讨hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段表达水平及与乙肝相关性原发性肝癌的相关性.方法:选取2018年8月至2018年10月我院收治的健康体检者50例、慢性乙型病毒性肝炎患者43例、肝炎后肝硬化患者35例及乙肝相关性原发性肝癌患者53例,采集其空腹外周静脉血5 mL及清洁中段晨尿标本,利用ELISA分别检测hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段血液和尿液中表达的含量,绘制ROC曲线评价hnRNP K在原发性肝癌诊断中的意义.结果:hnRNP K在慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液、尿液中表达水平均高于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05).乙型肝炎相关性原发性肝癌患者血清hnRNP K的ROC曲线AUC为0.775,敏感度和特异度分别为76.9％和64.3％;尿液hnRNP K的ROC曲线AUC为0.652,诊断乙肝相关性原发性肝癌的敏感度和特异度分别为100％和28.6％.结论:相较于健康体检者,慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者的血清、尿液中hnRNP K表达水平上调,与乙肝相关性原发性肝癌具有相关性,提示hnRNP K可能是乙肝相关性原发性肝癌的潜在标志物,对原发性肝癌的诊断具有一定参考价值.

目的 探讨miR-873-5p对糖尿病肾病足细胞增殖和凋亡的影响以及作用机制.方法 qRT-PCR检测高糖培养的足细胞中miR-873-5p和HNRNPK相对表达水平.细胞增殖和凋亡实验分别采用CCK8和流式细胞仪检测.双荧光素酶实验检测miR-873-5p与核内不均一核糖核蛋白K(HNRNPK)之间的相互作用.Western blot实验检测高糖培养的足细胞中HNRNPK表达水平.结果 高糖培养的足细胞中miR-873-5p相对表达水平显著高于正常培养的足细胞(P<0.05).转染miR-873-5p inhibitor的高糖培养的足细胞增殖能力强于转染NC inhibitor的高糖培养的足细胞(P<0.05),而凋亡细胞比例却低于转染NC inhibitor的高糖培养的足细胞(P<0.05).HNRNPK是miR-873-5p潜在靶点,在高糖培养的足细胞中HNRNPK表达水平与miR-873-5p表达呈负相关.转染si-HNRNPK能显著降低足细胞中HNRNPK表达水平(P<0.05).转染miR-873-5p inhibitor+si-HNRNPK的高糖培养的足细胞增殖能力显著低于转染miR-873-5p inhibitor+si-NC的高糖培养的足细胞(P<0.05),而凋亡细胞比例却高于于转染miR-873-5p inhibitor+si-NC的高糖培养的足细胞(P<0.05).结论 MiR-873-5p在高糖培养的足细胞中高表达.干扰miR-873-5p表达通过靶向调节HNRNPK表达促进高糖培养的足细胞增殖和抑制凋亡.

为研究探讨规律运动对老年大鼠纹状体蛋白质氧化应激与细胞凋亡的影响,通过差异羰基化蛋白质组学特征分析,筛选靶标蛋白质并阐明其作用机制.将24只健康雄性23月龄老年大鼠随机分为静息组(Con-SED)和规律运动组(Aero-EXE).采用运动强度相当于最大摄氧量(VO2max)60％～65％逐渐递增到70％ ～75％的10周中等强度规律运动.HE染色结果显示,规律运动改善了老年大鼠纹状体基质间区和纹状质间区的结构.TUNEL检测出所有老年大鼠纹状体均出现细胞凋亡核.与Con-SED组相比较,Aero-EXE组纹状体基质间区细胞凋亡指数增加了68.24％(P＜0.01),而纹状质间区凋亡指数下降了43.14％ (P＜0.05).亲和素珠富集和电喷雾四级杆飞行时间质谱分离鉴定羰基化蛋白质.进一步使用MASCOT服务器的数据库进行生物信息学搜索,结果显示,羰基化蛋白质涵盖28种氧化修饰位点.其中鉴定出Con-SED组羰基化蛋白质有14-3-3蛋白(e)和核内不均一性核糖核蛋白(HNRNPA2B1)等69个;而Aero-EXE组羰基化蛋白质有电压依赖型阴离子选择性通道1(VDAC1)和VDAC2等71个.生物信息学分析羰基化蛋白质的氧化修饰位点及蛋白质相互作用关系,筛选出14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1羰基化蛋白质与细胞凋亡有着重要关系.免疫组织化学检测结果显示,与Con-SED组相比较,Aero-EXE组的大鼠纹状体SOD和BDNF表达水平显著提高(P＜0.01,P＜0.05);qRT-PCR检测结果显示,14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平显著上调(P＜0.05,P＜0.01);免疫印迹检测结果显示,PI3K/AKT1/mTOR和CAMKⅡα信号通路相关分子的表达水平显著上调(P＜0.05或P＜0.01).综上所述,规律运动刺激了抗氧化系统的适应,改善了与细胞凋亡密切相关的14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1等蛋白质羰基化,维护了纹状体基质间区和纹状质间区细胞凋亡的稳态,其机制是通过上调14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平,促进BDNF的表达,进一步激活并上调下游PI3K/AKT/mTOR和CAMKs信号通路而调控纹状体细胞凋亡.

目的 探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用.方法 在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNPK的磷酸化,通过激光共聚焦显微镜检测KIT、HNRNPL、HNRNPK在COS-1细胞中的定位.结果 野生型KIT需要其配基干细胞因子(SCF)的刺激发生活化,而KITD816V无需SCF刺激即可发生自活化.此外,KIT D816V可诱导HNRNPL和HNRNPK发生磷酸化,而野生型KIT无此功能.HNRNPL和HNRNPK在细胞核表达,野生型KIT在细胞膜和细胞质表达,而KIT D816V主要表达于细胞质.结论 野生型KIT活化需要其配体SCF参与,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化,并能特异性诱导HNRNPL和HNRNPK磷酸化.