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同种异体牙囊细胞膜片在异种生物牙根再生中作用
编辑人员丨2023/8/6
目的:探究同种异体牙囊细胞膜片在异种生物牙根再生中的作用.方法:应用酶消化法体外分离人和大鼠的原代牙囊细胞并制备牙囊细胞膜片.通过同种异体牙囊细胞膜片(allogeneic dental follicle cell sheets,aDFCSs)复合异种的处理后牙本质基质(xenogeneic treated dentin matrix,xTDM)构建异种生物牙根.活死细胞染色检测细胞膜片中牙囊细胞的活性.实时荧光定量PCR检测xTDM诱导后牙囊细胞内IL-6和TGF-β基因表达.大鼠颌骨体内移植1周和4周后取材,组织学染色观察生物牙根周围组织的再生情况.TRAP染色检测异种生物牙根再生中破骨细胞情况.结果:复合xTDM后的牙囊细胞IL-6基因表达显著降低,TGF-β基因表达略降低.组织学切片结果表明复合牙囊细胞膜片的生物牙根能够延缓破骨细胞的吸收作用,同促进异种生物牙根再生.结论:aDFCSs复合xTDM构建异种生物牙根可降低免疫炎症反应,促进异种生物牙根再生.
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编辑人员丨2023/8/6
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内向整流钾2.1通道蛋白对人牙囊细胞成骨分化的影响及其机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制.方法 组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在hDFC中的表达,定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Kir2.1在hDFC成骨诱导前和诱导后KCNJ2基因表达量的变化;膜片钳技术检测hDFC在成骨诱导前和诱导后的细胞膜电位变化;提高细胞外钾离子的浓度(50 mmol·L-1)观察膜电位去极化对hDFC成骨分化能力的影响,应用Kir2.1钾通道阻断剂氯化铯(CsCl)和4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐(ML133)观察阻断Kir2.1通道对hDFC成骨分化能力的影响,同时行RT-qPCR检测观察2种干预措施前后成骨分化相关基因[RUNX相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)]的表达变化情况.降低细胞外钾离子的浓度(2 mmol·L-1),钙离子成像检测膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的变化.结果 RT-PCR结果显示,hDFC表达Kir2.1通道基因KCNJ2;RT-qP-CR结果显示,成骨诱导7 d后,KCNJ2在hDFC中的表达量上调;膜片钳结果显示,成骨诱导7 d后,hDFC膜电位由(-12±3.2)mV超极化为(-47±5.2)mV;茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示,提高细胞外钾离子的浓度或阻断Kir2.1通道蛋白的功能,能够明显抑制hDFC的成骨矿化能力;钙离子成像结果显示,膜电位超极化能够引起细胞内钙离子浓度的增高.结论 Kir2.1通道蛋白介导的膜电位超极化在hD-FC成骨分化的过程中起重要的作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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Hertwig's上皮根鞘与牙囊共培养细胞膜片的构建及初步研究
编辑人员丨2023/8/5
目的:模拟牙周膜/牙骨质发育微环境,构建一种新型的赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞-牙囊细胞(DFC)直接混合共培养细胞膜片,为上皮参与牙周膜/牙骨质再生的调控提供一种新策略.方法:将处于同一牙胚、同一牙根发育期的HERS细胞与DFC,直接混合共培养后制备成细胞膜片,观察其形态学的特点,免疫组化染色检测共培养细胞膜片与DFC膜片之间成牙周膜/牙骨质能力的差异.结果:成功构建出牙源性上皮-间充质共培养细胞膜片,共培养细胞膜片层数较多,能分泌较多的细胞外基质.免疫组化染色结果显示,共培养细胞膜片骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLI)表达阳性,而DFC膜片的OCN、COLI表达则为阴性,共培养细胞膜片碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达较DFC膜片更强.结论:共培养细胞膜片成牙周膜/牙骨质能力更强,HERS细胞在牙周膜/牙骨质发育过程中的调控作用不可忽视.
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编辑人员丨2023/8/5
