2023年4月21日,在湖南南山国家公园开展野生动物多样性调查过程中,于白云湖(26°18′36.23"N,110°20′05.43"E;海拔606 m)采集到2号蛙类标本(1雌1雄),经初步形态鉴定,其与桂北琴蛙(Nidirana guibeien-sis)特征相似.对采集标本的线粒体16S rRNA进行PCR扩增测序后,构建琴蛙属(Nidirana)部分物种贝叶斯系统发育树,结果显示该蛙类标本与桂北琴蛙聚为一支,且具有较高的支持率(1.00);基于Kimura双参数模型估算,该标本与广西兴安县采集的桂北琴蛙标本间的遗传距离为0,远小于琴蛙属不同种间的遗传距离(3.2％～8.7％).经形态特征鉴定和系统发育分析,确定该蛙类标本为无尾目(Anura)蛙科(Ranidae)琴蛙属(Nidirana)桂北琴蛙,为湖南省两栖动物新记录种.

琴蛙属(Nidirana)是广泛分布于东洋界的两栖动物,目前安徽省琴蛙属仅记录了弹琴蛙(N.adenopleura)1种.2022年7月在安徽省黄山地区(九龙峰自然保护区和马金岭自然保护区)采集到9号两栖动物标本,其形态特征与孟闻琴蛙(N.mangveni)相似;此外,基于线粒体COI基因片段的分子系统发育分析显示,此次采集到的琴蛙标本与孟闻琴蛙聚为一支,且具有高的支持率(贝叶斯后验概率/最大似然支持率为1.00/98％),而且和孟闻琴蛙遗传距离最近,与模式产地的孟闻琴蛙遗传距离仅有0.04％.因此,结合形态比较和分子系统学分析,鉴定此次采集的琴蛙属标本为孟闻琴蛙,为安徽省两栖动物分布新记录种.这一发现将孟闻琴蛙的分布范围扩展至皖南地区,为琴蛙属和皖南地区的生物地理学和地史研究提供了重要数据.

背侧褶是无尾两栖类的重要形态特征,但对于其组织结构和功能缺乏了解.本文运用组织学技术,H.E、AB-PAS和Masson三色三种染色方法对蛙科4属的代表物种滇蛙(Dianrana pleuraden)、阔褶蛙(Sylvirana latouchii)、仙琴蛙(Nidirana daunchina)、沼蛙(Boulengerana guentheri)背侧褶和背部皮肤的显微结构进行了系统的比较研究.结果发现:1)蛙科物种的皮肤腺体单元丰富多样,由黏液腺和颗粒腺组成.其黏液腺均为普通黏液腺,按照其分泌物及分泌细胞形态将黏液腺分为Ⅰ型黏液腺和Ⅱ型黏液腺.Ⅰ型黏液腺在沼蛙和仙琴蛙中缺失,Ⅱ型普遍分布.颗粒腺分Ⅰ型颗粒腺、Ⅱ型颗粒腺及特化颗粒腺,Ⅱ型颗粒腺仅见于仙琴蛙,特化颗粒腺仅见于阔褶蛙和沼蛙的背侧褶;2)滇蛙与仙琴蛙背侧褶基本结构与其背部常规皮肤一致,且两种皮肤结构组成也较为相似,在真皮层下都有一层较厚的脂肪层,滇蛙脂肪层厚度约为真皮层厚度的1.52倍,仙琴蛙脂肪层厚度约为真皮层的1.60倍;阔褶蛙与沼蛙背侧褶基本结构也与其常规皮肤一致,且背侧褶结构组成也较为相似,阔褶蛙及沼蛙真皮层内具有单层排列、集中分布的大型特化颗粒腺,其分泌物为两种颗粒物的混合物.3)蛙科中两种背侧褶结构类型代表了两个进化方向,其功能分别为能量储存和反捕,推测其与环境适应进化相关.

目的:利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ)技术对东北林蛙等24种进行鉴别,构建邻接(NJ)系统发育树,对24种进行系统聚类分析,为东北林蛙等蛙类的鉴别,分类及新种的发现提供一定的依据.方法:收集东北林蛙、中国林蛙、黑龙江林蛙、徂崃林蛙、桓仁林蛙各10只,提取其DNA并进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,将扩增成功的序列测序,共测得50条CO Ⅰ基因序列;从GenBank数据库中获得蛙科蛙属24种163条CO Ⅰ基因序列及蛙科侧褶蛙属,臭蛙属,琴蛙属,水蛙属,湍蛙属各一条CO Ⅰ基因序列;利用MEGAX进行序列比对,分析各物种CO Ⅰ基因序列简约性信息位点,计算种内,种间遗传距离,构建NJ树进行系统聚类分析.结果:东北林蛙等24种CO1基因序列长度为554 bp,共有210个简约性信息位点,各物种种内遗传距离均＜2％;除桑植蛙与明全蛙种间遗传距离为0.004外,其余各物种种间遗传距离范围为0.024～0.228;桑植蛙与明全蛙聚为一支,部分东北林蛙与Rana utenoi聚为一支,中国林蛙有2个独立的分支,其余各物种均独立聚为一支.结论:DNA条形码CO Ⅰ技术能够对东北林蛙等21种进行鉴定及鉴别,支持桑植蛙与明全蛙,韩国林蛙与昆嵛林蛙为同物异名,其中一支中国林蛙可能是蛙科蛙属未下载的4个种之一或新种.这表明DNA条形码CO Ⅰ技术不仅可以鉴定及鉴别东北林蛙等24种蛙类,也可以为蛙科蛙属的分类,新种或亚种的发现提供一定的科学依据.

江西武夷山国家级自然保护区内分布的琴蛙属Nidirana物种此前均被记录为弹琴蛙N.adenopleura.通过对该保护区及周边地区的琴蛙种群进行采样,结合形态比较和线粒体COⅠ基因的分子系统发育分析,发现保护区及周边地区的琴蛙种群包含2个不同的物种——弹琴蛙和孟闻琴蛙N.mangveni.孟闻琴蛙系江西省两栖类新记录,这一发现将孟闻琴蛙的分布区域由已知的浙江北部和东部向南扩展至赣东北地区,为琴蛙属的系统学和谱系地理学研究提供了重要信息.此外,讨论了琴蛙属内物种同域分布的现象,并提出需要对保护区及周边地区同域分布的弹琴蛙和孟闻琴蛙种群做进一步的种群遗传学研究.

广西境内的琴蛙有多个地理种群,主要分布于桂东北地区的龙胜、灌阳,北部地区的融水,中部地区的金秀和南部地区的上林及武鸣,现己证实在灌阳都庞岭的种群为湘琴蛙(Nidirana xiangica),在大瑶山的种群为瑶琴蛙(N.yaoica),在大明山的种群为广西琴蛙(N.guangxiensis).雷山琴蛙(N.leishanensis)是近年发现的两栖类新物种,目前已知分布在贵州雷公山和梵净山.针对广西柳州市融水县同练乡的琴蛙种群,通过形态比较、声谱分析和线粒体COI基因的分子系统发育分析,确定该种群与分布于贵州雷公山和梵净山的雷山琴蛙为同一物种,系广西壮族自治区两栖类分布新记录种.这一发现将雷山琴蛙的分布区域由此前己知的贵州东部向南扩展至广西北部,为琴蛙属的多样性和谱系地理学研究提供了重要信息.广西复杂的河流和山地系统可能对琴蛙种群的交流起到了重要隔离作用,并促进其种群分化和新物种的形成.

2020年5月23日在湖南省通道县万佛山镇(26° 11′47″N,109°56′21″E,海拔924 m)采集到4号两栖动物标本,经形态特征比较,与雷山琴蛙(Nidirana leishanensis)相似;基于线粒体16S rRNA构建的琴蛙属(Nidirana)部分物种贝叶斯系统发育树显示,此次采集的琴蛙标本与雷山琴蛙聚为一支,且具有较高的支持率(1.00);基于Kamura双参数模型估算本次采集的琴蛙标本与雷山模式产地标本间的遗传距离为0.8％,远小于琴蛙属物种间的遗传距离(1.4％～6.4％).综合形态特征和系统发育比较,确定此次采集到的琴蛙标本为无尾目(Anura)蛙科(Ranidae)琴蛙属的雷山琴蛙,系湖南省两栖动物分布新记录种.