目的:了解新冠病毒感染者病毒RNA脱落时间与病毒单核苷酸突变和感染者人口、基础疾病等因素的关系，为新冠病毒感染动力学的研究提供更多线索。方法:收集江苏省2021年7月至9月暴发的一起新冠肺炎聚集性疫情感染者流行病学、临床表现、基础疾病等资料，采集病例鼻咽拭子样本，采用二代测序技术对样本进行病毒全基因组测序。利用在线分析平台判断病毒型别、分析突变位点，利用Cox比例风险模型分析新冠病毒RNA脱落时间与各研究因素的关系。结果:本起新冠疫情最终获得病毒全基因组序列的人员350例，其中女性占60.3%，年龄中位数49岁[四分位数间距( IQR，37~65岁)]，中位病毒RNA脱落时间33天( IQR，26~44天)。全基因组测序分析显示，同武汉参考株序列相比，感染者序列存在34~41个核苷酸突变位点，属于VOC/Delta变异株(B.1.617.2进化分支)，C346T、C1060T、T2803C、T7513C、A29681C为本起疫情350例病例新冠病毒基因组序列主要单核苷酸变异位点(SNP)。单因素Cox回归分析显示，年龄、基础疾病、临床分型、疫苗接种情况、SNP T2803C和T7513C对新冠病毒RNA的脱落时间存在影响；调整后的多因素Cox回归结果显示，年龄[ HR＝0.73，95% CI(0.55，0.95)]及T7513C[ HR＝0.37，95% CI(0.18，0.77)]仍然是新冠病毒RNA脱落时间延长的危险因素。 结论:本研究从病例个体因素和病毒单核苷酸变异两个角度分析了对病毒RNA脱落时间的影响，发现年长、患有高血压、较重临床症状、未接种或未全程接种疫苗，感染病毒存在T7513C突变者，存在新冠病毒RNA脱落时间较长的风险，应给予重点关注和康复后随访。

目的 确定SARS-CoV-2无症状感染者与COVID-19患者流行病学特征差异.方法 提取PubMed、Web of Science、中国知网、维普网、万方数据知识服务平台内SARS-CoV-2无症状传播文献相关数据,截止日期为2020年8月1日.根据预先制定的纳入排除标准筛选和提取流行病学信息.对元症状传播者的年龄、性别、病毒RNA脱落时间及病毒载量等情况进行汇总和分析.结果 共38篇文献符合标准,其中17篇文献为无症状感染病毒RNA脱落时间相关病例报告.与有症状感染者相比,无症状感染者更加年轻[加权均数差(weighted mean difference,WMD),WMD=-5.27,95％ CI:-9.78～-0.76,P＜0.001]、病毒RNA脱落时间(中位数:11 d)较有症状感染者缩短(中位数:16 d)(P＜ 0.001)、上呼吸道拭子核酸载量较低(WMD=2.36,95％ CI:0.65～4.07,P=0.007),二者性别组成无统计学差异.结论 与COVID-19患者相比,SARS-CoV-2无症状感染者较年轻,病毒载量较低,病毒RNA脱落时间较短.

应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除MDBK细胞的SERPINF2基因,以探明SERPINF2基因对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的影响.采用CRISPR/Cas9技术建立SERPINF2敲除细胞;实时荧光定量PCR、免疫荧光染色、Reed-Muench法等检测BVDV感染SERPINF2敲除细胞后病毒RNA水平、dsRNA积累、病毒滴度和CPE等.构建SERPINF2基因敲除的MDBK细胞SERPINF2 KO,测序27株阳性克隆中有19株基因序列发生缺失(-)和插入(+)等移码突变,敲除效率约为70.37％;实时荧光定量PCR检测BVDV TC株感染MDBK细胞后SERPINF2 mRNA转录水平显著升高;与对照组Scramble细胞相比,BVDV TC株感染SERPINF2 KO细胞后病毒RNA水平和dsRNA积累显著性降低,CPE发生延迟,相同时间导致细胞脱落数量显著减少,BVDV滴度显著性降低.应用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除MDBK细胞的SERPINF2基因,建立SERPINF2 KO细胞,试验表明敲除SERPINF2基因显著性抑制BVDV复制.