目的:观察穴位贴敷对支气管哮喘（bronchial asthma，BA）小鼠皮肤、肺组织中瞬时受体电位阳离子通道香草酸亚家族成员1（TRP cation channel subfamily V member 1，TRPV1）表达及血清中IFN-γ、IL-4水平的影响，探讨穴位贴敷治疗哮喘的机制。方法:将75只BALB/c小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、穴位贴敷组、假贴敷组、地塞米松组，每组15只。采用屋尘螨滴鼻法制备BA小鼠模型。造模结束后，取小鼠双侧“肺俞”“心俞”“膈俞”进行穴位贴敷，穴位贴敷组贴敷药物为芥子、延胡索、细辛、甘遂药物组方，假贴敷组给予凡士林贴敷，1次/d，共贴敷14次；地塞米松组灌胃10 g/kg地塞米松，1次/d，连续干预14 d。运用EMKA-WBP肺功能检测系统检测小鼠气道阻力；天狼星红染色法、HE染色法观察小鼠肺组织病理形态改变，免疫组化法检测肺组织、皮肤组织中TRPV1表达，ELASA法检测肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4水平。结果:在浓度为12.5、25.0、50.0 mg/ml的氯化乙酰甲胆碱溶液激发后，与模型组比较，穴位贴敷组、地塞米松组小鼠气道高阻力Penh值下降（ P<0.05）；肺组织HE染色和天狼猩红染色显示气管内炎性浸润和胶原纤维增生情况改善（ P<0.05）；与模型组比较，穴位贴敷组、地塞米松组肺组织TRPV1［（0.28±0.06）、（0.28±0.05）比（0.31±0.08）］表达降低（ P<0.05）；肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4水平降低（ P<0.05）。 结论:穴位贴敷可通过诱发皮肤反应治疗哮喘，其作用机制可能与激活肺组织、皮肤组织中TRPV1，降低IFN-γ、IL-4水平有关。

目的 观察壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗带状疱疹后神经痛(PHN)的临床效果,以及对瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)的影响.方法 将96例PHN患者随机分为观察组(n=32)、对照1组(n=32)、对照2组(n=32),分别给予壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗、中医针灸围刺治疗、加巴喷丁胶囊口服治疗.治疗后第42天评价3组的临床疗效.在治疗前、治疗后第21天、治疗后第42天,评估3组患者的疼痛视觉模拟量表(VAS)评分,检测其静脉血和穴位血的TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平.结果 治疗后,观察组、对照1组、对照2组总有效率分别为93.75％(30/32)、81.25％(26/32)和68.75％(22/32),观察组的总有效率高于对照2组(P＜0.05).3组患者的疼痛VAS评分随治疗时间的延长而降低(P＜0.05),其中,治疗后第42天,对照2组、对照1组、观察组患者的疼痛VAS评分依次降低(P＜0.05).观察组和对照1组的静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平随着治疗时间延长而降低(P＜0.05),其中,治疗后第21天、第42天,对照2组、对照1组、观察组静脉血和穴位血TRPV1含量及TRPV1 mRNA表达水平依次降低(P＜0.05).结论 壮医莲花针拔罐逐瘀法治疗PHN疗效显著,镇痛效果优于中医针灸围刺及加巴喷丁胶囊口服治疗,其作用机制可能是通过下调TRPV1的表达来抑制炎症介质进一步释放,从而降低痛觉过敏,缓解疼痛.

成纤维细胞生长因子23(FGF23)是一种骨源性激素,它作用于其主要靶器官-肾脏,参与调节磷、钙和钠的重吸收以及活性维生素D(1,25(OH)2D)的合成.在近端肾小管,FGF23通过激活胞外信号调节激酶-1/2(ERK1/2)和血清/糖皮质激素调节激酶-1(SGK1)级联信号传导,使Na+/H+交换调节辅因子(NHERF)-1磷酸化,随后导致钠磷协同转运蛋白(NaPi)-2a内在化和降解,从而抑制磷重吸收;FGF23通过下调1α-羟化酶表达,同时上调24-羟化酶表达,从而抑制1,25(OH)2 D合成.在远端肾小管,FGF23通过激活赖氨酸缺陷型蛋白激酶-4(WNK4),上调上皮钙离子通道TRPV5(瞬时性受体阳离子电位通道亚家族V成员5)和Na+:Cl-协同转运蛋白(NCC)的顶膜表达,从而促进钙和钠的重吸收.临床中发现,由于遗传性和获得性原因导致的血FGF23浓度异常与慢性肾脏病(CKD)及其并发症密切相关.

目的 研究利多卡因对乳腺癌和前列腺癌细胞侵袭、迁移的作用及作用机制.方法 不同浓度利多卡因处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和前列腺癌PC-3细胞.采用MTT试验测定细胞活力,划痕实验评估细胞迁移距离,Transwell试验检测细胞侵袭能力.同时,使用Fluo-3 AM荧光探针对细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)进行测量,并测定各细胞中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员6(TRPV-6)mRNA和蛋白质的表达水平.结果 划痕试验及Transwell侵袭试验结果显示:与0μM利多卡因相比,100μM、1mM利多卡因处理后对MDA-MB-231、PC-3癌细胞迁移(MDA-MB-231:q100μM =4.549,q1mM=6.675;PC-3:q100μM=3.618,q1mM=5.992)、侵袭(MDA-MB-231:q100μM=3.480,q1mM=4.156;PC-3:q100μM =4.828,q1mM=7.331)均存在抑制作用.Fluo-3 AM染色后发现100μ.M、1mM处理的MDA-MB-231、PC-3的[Ca2+];下降(P＜0.05).qPCR与Western blot结果显示,100μM、1mM利多卡因处理后,两类癌细胞中的TRPV-6 mRNA及蛋白表达含量均降低(P＜0.05).结论 利多卡因在低于临床浓度的情况下可抑制MDA-MB-231,PC-3细胞的侵袭和迁移,此机制可能与钙流入速率及TRPV-6表达下调相关.

目的:探讨大黄素对洛哌丁胺(loperamide,Lop)所致小鼠便秘的治疗作用及其潜在机制.方法:采用Lop构建小鼠便秘模型,采用大黄素处理便秘小鼠.统计小鼠在 2 h观察期内的排便频率,收集粪便并检测粪便含水量;通过钡餐法检测肠通过时间;通过一氧化氮(nitric oxide,NO)检测试剂盒检测血清 NO含量;通过 HE染色观察小鼠结肠组织形态学改变;通过免疫组化检测小鼠结肠中血管活性肠肽受体 1(vasoactive intestinal peptide receptor 1,VIPR,1和 5-羟色胺(5-hydroxytryptarnine,5-HT)4型受体(5-HT4受体)的表达水平:通过 Western blot检测瞬时受体电位阳离子通道亚家族 V成员 1(transient receptor potential cation channel subfamily V member 1,TRPV1)、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)、脑源性神经营养因子(brain-de-rived neurotrophic factor,BDNF)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase.NOS)、c-Kit和干细胞因子(stem cell factor.SCF)的表达水平.结果:大黄素可显著增加便秘小鼠在观察期内的排便次数以及粪便含水量(P ＜0.05或P＜0.01),显著降低粪便的肠通过时间和血清 NO水平(P＜0.01).HE染色结果显示,大黄素可减轻Lop引起的结肠组织炎症渗透.免疫组化结果显示,大黄素显著降低便秘小鼠结肠组织中 VIPR1表达水平(P ＜ 0.01).显著增加5-HT4受体表达水平(P＜0.01).Western blot结果显示,大黄素可显著降低小鼠结肠组织中 TRPV1和 NOS的表达水平(P＜0.01),显著增加 GDNF,BDNF 、c-Kit和 SCF的表达水平(P ＜0.05或 P ＜0.01).结论:大黄素通过修复肠神经系统失调进而缓解Lop诱导的便秘.

哮喘(asthma)是临床常见的呼吸系统疾病之一.目前全世界约有3亿哮喘患者[1],且有证据表明,该病在世界范围内的患病率和死亡率均在逐年上升,预计到2025年,哮喘患者会增加到4亿,同时每年会有约25万人死于哮喘[2].我国哮喘的患病率约为4. 2％,目前全国有超过4570万的哮喘患者,这表明哮喘已成为严重威胁公众健康的疾患[3].

目的:探究瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel sub?family V member 4,TRPV4)在H9C2细胞中缺氧环境下的作用机制.方法:采用H9C2细胞建立缺氧损伤模型,检测缺氧不同时间细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性.将细胞分为常氧组(0 h)、HC-067047(TRPV4抑制剂)预处理+常氧(0 h)组、缺氧(24 h)组和HC-067047预处理+缺氧(24 h)组,使用Fluo-4 AM检测细胞内Ca2+含量,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测TRPV4蛋白水平,RT-qPCR检测TRPV4的mRNA水平,DCFH-DA检测ROS含量,酶标仪检测CAT和SOD活性,CCK-8法检测细胞活力.结果:与0 h组相比,随着缺氧时间的延长,LDH释放率提高(P<0.05),细胞内ROS和MDA含量上升(P<0.05),CAT和SOD活性增强(P<0.05),氧化损伤逐渐加重并在24 h达到顶峰.此外,缺氧后细胞出现钙超载现象,线粒体膜电位下降,TRPV4被激活.使用TRPV4抑制剂HC-067047预处理后,H9C2的氧化损伤明显被抑制,细胞活力上升(P<0.05),并且钙超载现象和线粒体膜电位下降均有所逆转.结论:在心肌细胞缺氧后,TRPV4被激活,Ca2+内流,线粒体膜电位受损,ROS增多,氧化损伤加重,抗氧化系统被激活,CAT和SOD活性上升,进而调控氧化与抗氧化平衡.