目的 检测长链非编码RNA(lncRNA)RP11-333E1.2在子宫内膜癌中的表达,观察下调RP11-333E1.2对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其调控机制.方法 qPCR检测45对子宫内膜癌及癌旁组织、5种子宫内膜癌细胞株(RL95-2、Ishikawa、HEC-1B、HEC-1A、AN3CA)和1种正常子宫内膜细胞株(ESC)中RP11-333E1.2的表达.以RP11-333E1.2表达最高的子宫内膜癌细胞株为转染对象,分别转染空载质粒和可干扰RP11-333E1.2表达的siRNA质粒,命名为空载体组和siRNA组.qPCR检测转染后RP11-333E1.2表达量;MTT法和Transwell侵袭实验分别检测低表达RP11-333E1.2对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭能力的影响;qPCR和Western blotting检测神经前体细胞表达发育下调基因9(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated 9,NEDD9)的mRNA和蛋白水平的表达.结果 RP11-333E1.2在子宫内膜癌和癌旁组织中的相对表达水平分别为5.73±0.74和1.46±0.55,子宫内膜癌组织中RP11-333E1.2明显高表达(P<0.01).与人正常子宫内膜细胞相比,子宫内膜癌细胞株中RP11-333E1.2明显高表达(P<0.01),Ishikawa细胞中的表达量最多(P<0.01).与空载体组相比,siRNA组Ishikawa细胞中RP11-333E1.2表达明显降低(P<0.01).与空载体组相比,siRNA组下调RP11-333E1.2可明显抑制Ishikawa细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01).与空载体组相比,siRNA组Ishikawa细胞中NEDD9在mRNA和蛋白水平的表达明显降低(P<0.01).结论 RP11-333E1.2在子宫内膜癌中呈高表达,下调RP11-333E1.2可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖能力和侵袭能力,其机制可能与NEDD9基因表达改变相关.

目的 探究神经前体细胞表达发育下调蛋白9(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 9,NEDD9)通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制.方法 通过qPCR和Western blot检测人鼻咽上皮细胞NP69以及人鼻咽癌细胞系中NEDD9的表达水平.将CNE-1细胞分为NC组、NEDD9组和si-NEDD9组,分别转染空载质粒、NEDD9过表达和NEDD9沉默质粒.通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力.结果 与NP69比较,人鼻咽癌细胞系中NEDD9 mRNA和蛋白的水平均显著上调(P<0.05),其中CNE-1细胞中NEDD9 mRNA和蛋白水平最高.与NC组比较,NEDD9组NEDD9 mRNA和蛋白的水平显著升高(P<0.05),si-NEDD9组NEDD9 mRNA和蛋白的水平显著降低(P<0.05).NEDD9组细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及Rac1/Cdc42通路水平显著高于NC组(P<0.05),si-NEDD9组的增殖、迁移和侵袭能力以及Rac1/Cdc42通路水平显著低于NC组(P<0.05).结论 NEDD9在鼻咽癌细胞中过表达,并且NEDD9可能通过促Rac1/Cdc42通路诱导NPC细胞增殖和转移.

背景与目的:类泛素化neddylation修饰在乳腺癌中的作用鲜有报道.该研究的前期研究发现,抑制neddylation修饰可诱导乳腺癌细胞发生衰老,但具体机制尚未完全阐明.研究报道核纤层蛋白lamin B1缺失可导致细胞衰老.本研究旨在探讨在乳腺癌中,neddylation修饰与lamin B1是否存在相关性及其可能的机制.方法:利用113例乳腺癌患者肿瘤组织制成的组织芯片对neddylation修饰过程中关键蛋白神经前体细胞表达发育下调蛋白8(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 8,NEDD8)、NEDD8活化酶E1(NEDD8-activating enzyme 1,NAE1)及核纤层蛋白lamin B1进行免疫组织化学染色.采用Spearman rank分析NEDD8和NAE1与lamin B1表达的相关性.采用CRISPR/Cas9技术敲低NEDD8的表达以阻断neddylation修饰,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测neddylation修饰对Lamin B1表达的调控作用及其机制.结果:Lamin B1表达与NEDD8(r=0.817,P<0.0001)和NAE1(r=0.406,P<0.0001)表达呈显著正相关.敲低NEDD8以阻断neddylation修饰可显著抑制Lamin B1的表达.沉默P53表达可部分逆转阻断neddylation修饰对lamin B1表达的抑制.结论:Neddylation修饰与lamin B1表达呈正相关,靶向neddylation修饰可能通过P53依赖的方式抑制lamin B1的表达.这为乳腺癌的治疗提供了新的靶点和方向.