目的 利用液相色谱质谱联用和网络药理学、分子对接技术探讨秦巴硒菇提取物治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的潜在活性靶点及相关信号通路,并通过体外实验进一步验证.方法 应用液相色谱质谱分析秦巴硒菇提取物的活性成分,通过Swiss Target Prediction数据库预测药物靶点;从GeneCards、DisGeNET数据库获取CML的疾病靶点.筛选出药物和CML的共同靶点,通过STRING数据库进行蛋白质互作分析,利用Cytoscape软件构建蛋白互作网络图,并通过DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析.分别应用DockThor和Pymol进行分子对接及可视化处理.利用CCK-8法测定秦巴硒菇提取物对K562细胞的增殖抑制作用,Western blot验证其对相关蛋白及磷酸化水平的影响.结果 秦巴硒菇提取物活性成分共126种,药物和疾病共同靶点172个;KEGG通路分析结果显示PI3K/Akt/mTOR信号通路可能在治疗CML疾病中起到关键作用.秦巴硒菇提取物在K562细胞中24、48 h的IC50分别为1.86、1.48 g·L-1,秦巴硒菇提取物可抑制PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平.结论 秦巴硒菇提取物可通过多成分、多通路、多靶点、多种方式协同作用治疗CML,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

目的 比较香菇、金针菇、平菇、双孢菇、秦巴硒菇等5种食用菌95％乙醇提取物的抗氧化活性,并测定其总黄酮含量.方法 采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法和铜离子还原能力法(CUPRAC)测定5种食用菌抗氧化活性,并比较其抗氧化活性.同时使用亚硝酸钠-硝酸铝法测定其总黄酮含量.结果 5种食用菌提取物均具有抗氧化活性,其清除DPPH自由基的半数有效量分别为5.003、5.681、8.804、28.596和1.249 mg/mL,Cu2的还原能力Trolox当量(TEAC值)分别为0.0059、0.0036、0.0034、0.0016和0.0258 μg/mL.5种食用菌的乙醇提取物总黄酮含量分别为0.107％、0.175％、0.155％、0.102％和0.421％.结论 5种食用菌乙醇提取物抗氧化能力强弱顺序为秦巴硒菇＞香菇＞金针菇＞平菇＞双孢菇.其总黄酮含量高低顺序秦巴硒菇＞金针菇＞平菇＞香菇＞双孢菇,食用菌抗氧化活性及总黄酮含量不存在相关性.

目的 观察秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤细胞株Raji增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制.方法 体外培养Raji细胞,分别加入浓度为0.9、1.5、2.1、2.7 mg/mL的FA-2-b-β,对照组加入等量培养基.培养24、48、72 h后收集各组细胞,采用CCK-8法检测FA-2-b-β对Raji细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 FA-2-b-β能抑制Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性(P＜0.01);给药48 h后,各浓度FA-2-b-β组细胞凋亡率较对照组均显著上升,且呈剂量依赖性(P＜0.05);各浓度FA-2-b-β组细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著低于对照组,且呈剂量依赖性(P＜0.05),Bax蛋白表达水平显著高于对照组,同样呈剂量依赖性(P＜0.05),Bax/Bcl-2比值增加.结论 rA-2-b-β呈时间-剂量依赖性诱导伯基特淋巴瘤凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关.

目的 探讨中药秦巴硒菇提取物(酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β)对人慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)原代细胞系凋亡的影响.方法 采用CCK8法检测不同时间段(24,48,72 h)FA-2-b-β作用于CML原代细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;蛋白印迹法测定相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、MET、CD44和β-catenin的表达.结果 FA-2-b-β抑制CML原代细胞增殖,并呈时间、浓度依赖性.FA-2-b-β处理后,CML原代细胞凋亡率明显升高,促凋亡蛋白Bax表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2、MET、CD44和β-catenin表达降低.结论 秦巴硒菇提取物通过下调凋亡相关蛋白抑制CML原代细胞增殖并诱导细胞凋亡,表现出较强的体外抗白血病作用.

目的:验证秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β诱导肿瘤细胞凋亡及免疫调节的作用.方法:采用CCK-8法计算FA-2-b-β对K562细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.通过尾静脉/皮下注射K562细胞构建慢性髓系白血病模型,观察小鼠成瘤负荷,每天2次观察小鼠一般情况,定期检测小鼠外周血细胞数.RT-qPCR及Western blot检测FA-2-b-β作用于白血病小鼠后相关凋亡基因/蛋白的表达;免疫荧光和免疫组织化学检测CD3、CD4、CD8的表达.结果:FA-2-b-β抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,模型小鼠成瘤率100％,药物治疗21天后,与对照组相比,外周血白细胞数明显升高,血红蛋白降低;免疫荧光及免疫组化结果显示CD3、CD4、CD8阳性,比例失调,治疗后各项指标有所改善.结论:初步验证秦巴硒菇提取物FA-2-b-β具有诱导肿瘤细胞凋亡及免疫调节作用.

目的:探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对急性T淋巴细胞白血病细胞的逆转耐药作用机制.方法:采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞周期以及胞内罗丹明蓄积情况;qPCR和Western blot检测凋亡相关基因与蛋白表达;免疫荧光观察膜表面蛋白MDR1表达.结果:不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β能够显著抑制CCRF-CEM及CEM/C1细胞增殖(P＜0.05),促进其凋亡,并调控CCRF-CEM细胞阻滞于S期、CEM/C1细胞阻滞于G0/G,期.Western blot及qPCR检测结果显示,FA-2-b-β可抑制ABCB1、ABCG2、CTNNB、MYC、BCL-2表达,并上调BAX表达.另外,FA-2-b-β可逆转CEM/C1耐药株的耐药特性,使得其线粒体膜电位下降,细胞内罗丹明蓄积明显增多,膜表面蛋白MDR1表达减弱.加入ICG001后,该过程进一步加强.结论:秦巴硒菇提取物FA-2-b-β通过抑制细胞增殖促进凋亡、调控细胞周期、减少线粒体供能及下调MDR1蛋白表达等方式逆转CEM/C1细胞的耐药性,其机制可能通过调控Wnt信号通路实现.