目的:探究稀释性(Diluent)吸痰技术对危重症气管插管患儿的影响。方法:选取安康市中医医院在2020年10月至2023年10月期间儿科接收的60例危重症患儿作为观察对象，随机分为对照组和干预组，对照组30例实施常规气管插管护理措施。干预组30例联合实施稀释性(Diluent)吸痰技术插管护理措施，于干预前、干预7 d后，对两组患儿临床指标、口腔健康状态、并发症及重新气管插管等指标进行对比分析。结果:干预组，患儿在有效气管插管平均留置时间高于对照组，PICU居住时间、平均住院时间短于对照组，血氧饱和度高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；干预前，两组患儿口腔评分情况比较差异无统计学意义( P>0.05)；干预7 d后，干预组患儿在牙龈和口腔黏膜、唾液、舌头、口唇、牙齿等口腔评分低于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；干预组患儿在口腔溃疡、导管相关性肺炎、舌后坠、呼吸道肉芽肿等并发症发生及重新气管插管率低于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:稀释性吸痰技术气管插管护理措施有效改善患儿临床各项指标，提高口腔健康，降低并发症与重新气管插管。

目的 比较 RT-LAMP、LAMP、L-J 法检测 MTB的效果,为结核病的快速诊断提供依据.方法 用常见的非结核分枝杆菌与其他常见的呼吸道感染病菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌)检测特异性,并用酶切实验对结核分枝杆菌特异性产物进行酶切鉴定;用 RT-LAMP、LAMP、L-J 法检测100名结核病患者和22名来自无结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌测试灵敏性;对浓度为1 ng/μL H37Rv标准株进行对倍比稀释用于 RT-LAMP 极限检测实验.结果 RT-LAMP、LAMP、L-J 方法的阳性率分别为100%,92%和88%;RT-LAMP和L-J,RT-LAMP和LAMP差异均有统计学意义;RT-LAMP的灵敏度比LAMP高10倍;RT-LAMP不仅可以识别活菌,并且能够重复检测MTB的单一拷贝.结论 RT-LAMP检测效果优于 LAMP及 L-J,适于基层医院结核病诊断的推广和应用.

背景 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量.通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充.目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理,在Clin-ToFⅡ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱(PCR-TOF MS)系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值.方法 2020年2—3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据.于2020年1—2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份(咽拭子样本55份、痰液样本25份)及健康人群样本20份(均为咽拭子样本)作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据.建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶(SAP)消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比(SNP)确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准.对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比.结果 通过对PCR-TOF MS模板条件的优化,模版量6μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图.建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab(ORF1ab)基因和核壳蛋白(N)基因进行有效扩增检测.本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00％,高于实时荧光定量PCR法的75.00％,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00％的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果.对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00％和85.45％,高于荧光定量PCR法的64.00％和43.64％.阴性样本两种方法均未检出.结论 通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度.MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本.该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间.

目的 了解本院老年感染患者(＞60岁)分离所得耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药性、耐药基因及患者的临床特征.方法 以2019年5月—12月本院CRKP感染老年患者为研究对象,分离所得CRKP均由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行鉴定;微量肉汤稀释法进行敏感性测定;PCR技术检测碳青霉烯耐药基因;多位点序列分型(MLST)技术对其进行分型.结果 收集的30株CRKP主要来自痰液和重症医学科;对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素的耐药率为100.00％;有24株携带blaKPC,2株携带blaNDM,以ST11型为主;CRKP感染患者在低体质量、患有肿瘤、免疫功能低下、感染过产ESBL细菌及使用过超广谱抗生素方面具有较高比例.结论 本地区老年感染患者分离的CRKP具有较高耐药率,并以产KPC酶为主要耐药机制,本研究为临床预防及控制CRKP的传播及感染提供了依据.

[背景]传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低.环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测.[目的]评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力.[方法]设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法.通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性.回顾性分析2019年11月-2021年3月北京大学人民医院的240例疑似下呼吸道感染患者的呼吸道标本(痰和肺泡灌洗液).利用 自动化核酸提取仪提取DNA后,利用特异性引物进行环介导恒温扩增检测7种病原菌.检测结果与常规细菌培养结果进行比较,分析环介导恒温扩增的灵敏度和特异性,评估优化不同菌种的阳性判断值(Ct值),探讨环介导恒温扩增技术在临床上的应用价值.[结果]LAMP法检测结果与模板浓度具有较好的线性相关性,特异性实验结果表明LAMP体系的特异性较好,与其他菌株无交叉反应.共检测了 218例痰和22例肺泡灌洗液样本,其中178例样本培养出7种目标菌,采用环介导恒温扩增法检测出7种目标菌的样本共176例.从提取核酸到环介导恒温扩增结果检出的平均检测时间为2-3h,可同时检测多个样本.7种常见呼吸道病原菌流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、卡他莫拉菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎链球菌的最佳Ct值分别为18.5、20.0、20.0、15.0、25.0、19.0和18.0.检测灵敏度和特异性分别为肺炎克雷伯菌90.7％和94.1％,鲍曼不动杆菌84.0％和94.2％,铜绿假单胞菌90.8％和89.1％,卡他莫拉菌75.0％和99.2％,金黄色葡萄球菌81.8％和97.4％,流感嗜血杆菌75.0％和90.3％,肺炎链球菌33.3％和95.4％.肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的环介导恒温扩增技术检测结果与痰培养半定量检测结果具有较好的符合率,R2值分别是0.855 7、0.804 4和0.924 3.[结论]环介导恒温扩增技术操作简单、检测快速.与培养方法相比,环介导恒温扩增检测具有较高的特异性(89.1％-99.2％),其中针对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检测具有较高灵敏度(81.8％-90.8％),可用于临床呼吸道感染病原菌的快速诊断.环介导恒温扩增技术的检测结果与痰培养半定量的检测结果符合率较好.流感嗜血杆菌和肺炎链球菌由于培养阳性标本量较少,有待进一步评估.

急性肺水肿是指各种原因引起的肺内组织液的生成增多和回流障碍,使液体从肺毛细血管内快速外渗至肺间质及肺泡内,从而造成肺顺应性降低,通气与换气功能严重障碍,引起呼吸困难、端坐呼吸、咳泡沫样痰、双肺弥漫性湿啰音等症状和体征也是导致急诊院前呼吸困难的第二位病因[1] ,住院死亡率高达4％～10％[2]. 目前诊断肺水肿的检查手段主要包括胸部X线、胸部CT、肺部超声,以及经肺热稀释技术( pulse indicator continuous cardiac output, PiCCO)等. 然而X线、胸部CT,不适用于现场诊断及危重患者的床旁使用;PiCCO受肺切除和局部血管收缩影响,需要深静脉和股动脉穿刺,创伤较大且容易并发导管相关感染. 便携式掌上超声具有简易性、便携性、无创性、诊断快速等特点,使得其应用于肺水肿早期诊断成为可能[3]. 本文对肺部超声对肺水肿的诊断原理及应用研究进展进行综述.

目的 筛选多交叉置换扩增技术(MCDA)结合纳米生物传感条(LFB)检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度、最佳扩增时间,并对MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的效果进行评估.方法 根据肺炎克雷伯菌特异的保守基因rcsA的核苷酸序列,采用Primer Premier Version 5.0软件设计一套特异性MCDA引物,其中交叉引物CP1和扩增引物C1分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),建立25μL的MCDA反应体系.将温度按60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃依次递增,分别扩增1 h,然后85℃加热5 min后终止反应,使用实时浊度仪观察DNA浓度曲线,绘制MCDA扩增反应动力学图,确定最佳扩增温度.在筛选出的最佳扩增温度下,选择10 min、20 min、30 min和40 min 4个时间点分别对10 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL和1 fg/μL的肺炎克雷伯菌DNA进行MCDA扩增,使用LFB进行检测,根据LFB检测结果确定最佳扩增时间.使用MCDA-LFB法检测36株肺炎克雷伯菌和18株非肺炎克雷伯菌,使用临床分离培养法和MCDA-LFB法检测呼吸道感染患者的42份痰液样本和3份健康对照痰液样本,观察MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的灵敏度、特异度.将肺炎克雷伯菌ATCC700603标准株基因组DNA分别稀释至10 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL和1 fg/μL,使用MCDA-LFB法检测,依据结果是否阳性判定检测下限.结果 MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度为63℃,最佳扩增时间为30 min.MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的灵敏度、特异度均为100％.MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的检测下限为100 fg/μL.结论 MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度为63℃,最佳扩增时间为30 min.MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的方法简单、快速、特异、灵敏,可以用于临床呼吸道标本中的肺炎克雷伯菌早期筛选.