患者男性，38岁，因"全身多处化学物烧伤5.5 h"入院。患者于5.5 h前在工厂工作时发生爆炸，致患者头面颈、躯干及四肢被化学物质（丙烯腈、三氯乙酰氯）烧伤，后出现意识不清，呼之无应答，急诊行"左颈内静脉穿刺置管术，快速补液，亚硝酸异戊酯解毒，留置导尿，气管切开"等治疗后，考虑"全身多处88% Ⅱ~Ⅲ度化学烧伤、吸入性损伤"，病情危重，收入本科。入院查体：体温36.8℃，脉搏96次/min，呼吸频率18次/min，血压108/59 mmHg，意识不清，双眼睑烧伤，球结膜缺血坏死，角膜基质深层水肿，混浊明显，瞳孔无法观察，气管切开，双肺呼吸音粗，无干湿性啰音，心律尚齐，肢端冷，创面位于头面颈、胸腹背臀及四肢，大部分成片状，部分散在，创面皮肤大部分呈灰色或棕黑色，部分苍白，肿胀明显，总面积约88%。进行辅助检查，血气分析：葡萄糖14.40 mmol/L，钾离子3.10 mmol/L，氯离子165 mmol/L，血浆乳酸2.9 mmol/L，高铁血红蛋白分数：2.1%，氧合血红蛋白分数：83.7%，酸碱度：7.28，二氧化碳分压：41 mmHg，氧分压60 mmHg，碱剩余-7.2 mmol/L，氧饱和度：86%，标准碳酸氢根浓度18.1 mmol/L。血常规：白细胞计数17.1×10 9/L，中性粒细胞比率77.1%。生化全套：丙氨酸氨基转移酶21U/L，天门冬氨酸氨基转移酶43 U/L，肌酐73 μmol/L，总胆红素15.2 μmol/L，乳酸脱氢酶287 U/L，肌酸激酶180 U/L，肌钙蛋白T 0.02ng/mL。头颅、胸部、全腹部CT：未见明显异常。入院诊断：(1)化学烧伤全身多处88%(Ⅱ~Ⅲ度)；(2)吸入性肺损伤；(3)眼烧伤；(4)气管切开；(5)呼吸衰竭；(6)休克；(7)丙烯腈中毒。入院后给予快速扩容补液，第1个24 h补充晶体8000 mL、胶体4000 mL、水分2000 mL；监测尿色及尿量，目标维持每小时至少0.5 mL/kg以上的清亮尿液；清创包扎，清除皮肤毒物残留。患者烧伤创面大，病情危重，予哌拉西林他唑巴坦针4.5静滴抗感染，每8小时1次，并予创面培养，余护胃、化痰等对症治疗。解毒方面则采用亚甲蓝联合硫代硫酸钠针治疗丙烯腈造成的氰化物中毒的方案。亚甲蓝（D1 400 mg、D2 600mg）、硫代硫酸钠针25.6 g分次静推解毒，患者高铁血红蛋白升高及血乳酸慢慢下降（图1）。入院第三天患者高铁血红蛋白降至正常，血压平稳，停硫代硫酸钠和亚硝酸异戊酯吸入，并予以甲强龙0.1 g每天１次静滴控制炎症反应。患者神志转清，病情稳定后前后行"四肢深度创面切削痂+自体皮浆、异体皮移植术"、"四肢残余创面扩创MEEK植皮术"，行"颈部疤痕切除松解+脱细胞异体真皮、自体大张刃厚皮移植术及多次双眼羊膜移植、眼睑缝合术及睑外翻畸形矫正术"，经过顺利，病情好转，后康复出院。

目的 比较无去污剂的细胞总蛋白三种酶切样品制备方法. 方法 采用细胞吸入胶内酶切法、蛋白吸入胶内酶切法及超滤管辅助溶液酶切法对细胞总蛋白进行酶切,再用液质联用技术对三种酶切方法制备的多肽样品进行蛋白鉴定.结果 通过液质联用技术鉴定,细胞吸入胶内酶切法制备的样品获得3 835个蛋白,蛋白吸入胶内酶切法制备的样品获得2 340个蛋白,超滤管辅助溶液酶切法制备的样品获得4 248个蛋白.韦恩图分析显示,不同酶切方法得到的蛋白种类存在差异.对细胞吸入胶内酶切法和超滤管辅助溶液酶切法所获得的蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)分析发现,细胞吸入胶内酶切法能获得更多膜结合蛋白. 结论 三种无去污剂酶切方法,避免了去污剂的种种弊端,其中超滤管辅助溶液酶切法和细胞吸入胶内酶切法更优.

[目的]通过观察平喘方对支气管哮喘模型小鼠肺组织浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)/传统DC(conventional DC,cDC)通路各因子的影响,阐释平喘方治疗哮喘的机制及药物间的相互作用.[方法]将40只雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、地米组和平喘方组,每组10只.采用10％鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液腹腔注射致敏和5％OVA雾化吸入激发,建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型.小鼠激发开始时按20mL/kg·d灌胃相应的药物,用药1周后处死小鼠,采集支气管肺泡灌洗液,以ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的含量;分离小鼠肺组织,HE染色后镜下观察肺组织形态,Western blot检测肺组织中维甲酸相关孤儿受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)及叉头蛋白P3(forkhead box P3,FOXP3)的蛋白表达量;Real-time PCR测定肺组织中吲哚胺-2,3-二氧化酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)、肿瘤坏死因子超家族4(tumor necrosis factor superfamily4,TNFSF4)的基因相对表达量;Masson染色检测肺组织胶原蛋白面积、气道平滑肌面积(airway smooth muscle area,WAm)、气道内壁面积(airway inner wall area,WAi).[结果]与空白组比较,模型组支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β的含量以及肺组织中RORγt、TNFSF4表达均增高,FOXP3、IDO表达均降低,胶原蛋白面积、WAm、WAi均增加,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,地米组、平喘方组病理切片表现均有所改善,支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β的含量、肺组织中RORγt、TNFSF4表达均减低,FOXP3、IDO表达均增高,差异有统计学意义(P<0.05);与地米组比较,平喘方组IL-17的含量、RORγt、TNFSF4、FOXP3、IDO的表达量及胶原蛋白面积、WAm、WAi差异无统计学意义(P>0.05).[结论]平喘方对pDC/cDC的干预可能是诱导气道免疫耐受的一个切入点,从而抑制T细胞表达失衡,改善气道炎症及气道重建.

目的 对脑内小胶质细胞及TAK1基因的表达上调对空间记忆的影响进行初步探索,为围手术期神经认知障碍(perioperative neurocognitive disorders,PND)中空间学习记忆能力的减退提供神经炎症机制证据.方法 采用8～9月龄C57BL/6J小鼠,异氟醚吸入下行剖腹盲肠切除术建立PND模型与普通型C57BL/6J小鼠作对比.分别在不同时间点利用水迷宫实验检测小鼠的空间记忆.并通过免疫组化技术检测术后小鼠不同脑区小胶质细胞改变及TAK1蛋白表达变化.Western印迹法检测术后小鼠脑内TAK1的表达水平.结果 术后3d前额叶皮层,海马CA2/3、DG区,纹状体区域小胶质细胞胞体增大,数量增多(P＜0.05).术后7d各脑区小胶质细胞数量逐渐下降(P＜0.05),至术后15d恢复至术前水平.Westem印迹法实验提示术后3 d TAK1蛋白在前额叶皮层和海马的表达均增高.术后2d小鼠出现空间学习能力受损,7d出现空间记忆能力受损(P＜0.05).结论 吸入麻醉下盲肠切除术后早期,包括海马区域在内的多个与学习记忆功能相关的脑区,均有明显的小胶质细胞活化扣TAK1蛋白表达上调,提示中枢炎症的发生.同时,术后早期,小鼠出现空间学习记忆能力受损,提示腹部手术后PND的发生发展或与记忆相关脑区中枢炎症的发生相关.

目的:探讨支气管哮喘中的分泌型磷脂酶A2-X(sPLA2-X)与嗜酸性粒细胞的关联,为支气管哮喘的治疗提供新的思路与策略.方法:SPF级6～8周雌性BABL/c小鼠48只,分为4组,每组12只,分为健康对照组、哮喘对照组、哮喘/嗜酸性粒细胞删除组及哮喘/嗜酸性粒细胞删除同型对照组.构建小鼠支气管哮喘模型,除健康对照组小鼠于0、7、14 d腹腔注射生理盐水外,其余组小鼠每只分别于0、7、14 d腹腔注射50μg OVA与2 mg氢氧化铝凝胶(溶于200μL生理盐水).随后根据分组于第21和26天分别进行嗜酸性粒细胞删除抗体(anti-CCR3)及同型对照的腹腔注射及吸入麻醉后的删除抗体滴鼻.于雾化结束后48 h内完成小鼠肺功能检测,每组小鼠一半行全肺灌洗、一半用于肺组织切片HE染色,全血用于检测血清IgE,肺泡灌洗液(BALF)上清液应用于检测细胞因子,肺泡灌洗液细胞用于细胞总数、细胞分类及流式分析.结果:(1)与哮喘对照组相比,哮喘/嗜酸性粒细胞删除组小鼠的气道、肺泡炎症反应显著减轻.(2)哮喘/嗜酸性粒细胞删除组(OVA/anti-CCR3)支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的百分比显著降低(P<0.05).(3)与哮喘对照组比较,哮喘/嗜酸性粒细胞删除组小鼠气道高反应显著降低(P<0.05).(4)与哮喘对照组相比,哮喘/嗜酸性粒细胞删除组小鼠BALF上清与血清中的sPLA2-X水平均显著降低(P<0.05).(5)与哮喘对照组对比,哮喘/嗜酸性粒细胞删除组小鼠BALF上清中的IL-4、IL-5和IL-13水平显著降低,血清中IgE的水平也显著降低(P<0.05).结论:支气管哮喘中嗜酸性粒细胞与sPLA2-X有重要的关联.