目的:建立能够准确鉴别诃子、绒毛诃子及其混伪品的分子鉴定方法.方法:对诃子、绒毛诃子及其混伪品的新鲜果实进行烘干,观察其干燥前后的形态;提取样品DNA,采用DNA条形码内转录间隔区 2(ITS2)序列和psbA-trnH序列进行聚合酶链式反应扩增并测序,采用DANMAN 7、MAGE 6 软件对测序结果进行序列比对,计算Kimura 2-paramete遗传距离,并构建邻接法系统发育树.结果:形态观察发现,诃子、绒毛诃子果实干燥前后与混伪品有较大的差异,可以通过形态差异进行鉴别;DNA条形码序列表明,诃子和绒毛诃子ITS2 序列基本一致,仅发现 4 个单核苷酸多态性位点,但不能由此对两者进行区分;诃子和绒毛诃子的psbA-trnH序列存在 2 处明显差异,可对两者进行准确区分;绒毛诃子中存在 2 种类型的单倍型,其明显差异在于是否在psbA-trnH序列上存在 1 段 16 bp的串联重复序列;混伪品与诃子、绒毛诃子之间具有较大的psbA-trnH序列差异,可直接在美国国家生物技术信息中心比对进行区分;对市场上流通的诃子炮制品进行鉴定发现,其多为 2 种单倍型绒毛诃子,且存在毛诃子混伪的情况.结论:利用psbA-trnH序列可准确鉴别诃子、绒毛诃子及其混伪品,发现绒毛诃子中存在 2种类型的单倍型.

目的 用高内涵分析技术(high content screening,HCS)研究绒毛诃子致肝毒性的物质基础.方法 分别将莽草酸、苯甲酸、没食子酸以及1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖分别作用于HepG2肝癌细胞后,利用Hoechst 33342等荧光染液对细胞染色,对其扫描图像,将采集后的数据输入分析模板中得出不同单体,在不同浓度下对细胞数目、DNA含量、谷胱甘肽(glutathione,GSH)降低水平、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量、线粒体膜电位(mitochondrial mem-brane potential,MMP)等指标的量效关系曲线,由此判断单体的肝毒性.结果 阿司匹林和莽草酸指标显示为阴性,而噻氯吡啶、苯甲酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、没食子酸可引起细胞数目明显下降、ROS含量升高,有致肝毒性风险.结论 没食子酸、苯甲酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖均存在致肝毒性风险,且没食子酸致肝毒性风险最大,推测为绒毛诃子致肝毒性的物质基础,没食子酸在给药浓度为30 mg·L-1以下时较为安全.

目的 探究对绒毛诃子对小鼠毒性的影响.方法 采用14 d急性毒性经典实验方法,单次给药后,观察记录实验期间小鼠的体质量变化、生理状态变化以及死亡情况,检测其生化指标和肝肾脏器指数,计算最小致死量和半数致死量(median lethal dose,LD50).采用20 d剂量递增蓄积系数法进行小鼠蓄积性毒性实验,每阶段递增剂量给药,观察记录实验期间小鼠的体质量变化、生理状态变化以及死亡情况、检测其相关重要生化指标,对心、肝、脾、肺、肾做病理切片,计算蓄积系数.结果 绒毛诃子水煎液半数致死量LD50为18.926 g生药/kg,是70 kg人最大日用量的147.8倍;蓄积系数K＞5,为轻度蓄积.结合血清生化结果和病理切片结果,急性毒性和蓄积毒性的毒性靶器官都指向肝脏.结论 绒毛诃子水提物的LD50为18.926 g生药/kg,其蓄积毒性为轻度蓄积,毒性表现主要是肝毒性.

目的:基于UPLC特征图谱对不同基原诃子药材进行对比研究,为诃子药材质量控制和评价提供参考.方法:采用Waters CORTECS T3(150 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱;以乙腈?0.2％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为270 nm;流速为0.35 mL/min;柱温为30℃.结果:建立了诃子药材UPLC特征图谱共有模式,标定了9个共有峰,并指认了其中6个峰;30批样品相似度均大于0.87;聚类分析及主成分分析结果显示,30批样品可以分为2类,可用于诃子的基原鉴定.结论:诃子与绒毛诃子化学成分种类基本一致,但存在成分含量的差异,该方法可用于中药诃子的物种鉴定和品质评价.

目的:建立不同基原诃子(诃子和绒毛诃子)中诃子次酸、没食子酸、柯里拉京、诃子鞣酸及诃子酸5个成分含量测定方法,为诃子药材的质量评价提供依据.方法:采用Waters Cortecs T3 C18(150 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱;以乙腈-0.2％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.35 mL/min;检测波长为270 nm;柱温为30℃;进样量为1μL.采用SPSS 20.0、SIMCA-P 14.1软件对数据进行分析.结果:诃子中诃子鞣酸的平均含量最高,为76.73 mg/g,绒毛诃子中诃子次酸的平均含量最高,为23.75 mg/g.聚类分析、主成分分析及偏最小二乘判别分析结果显示2种基原的药材可明显分为2类,偏最小二乘判别分析结果确定其主要差异成分为诃子鞣酸和诃子酸.结论:该研究建立的方法简便、准确,可为不同基原诃子药材的质量控制提供分析方法和参考依据.