目的 采用Cocktail混合探针药物法,探究聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)对大鼠体内Cyp450同工酶活性的影响,为提高临床低生物利用度药物的疗效提供新的途径,也为药物研发领域研制新型制剂选择合适的辅料提供理论依据.方法 选用非那西丁、奥美拉唑、安非他酮和咪达唑仑分别作为大鼠体内4种Cyp450酶(Cyp1a2、Cyp2c11、Cyp2b1、Cyp3a1)的探针药物.SD雄性大鼠连续尾静脉注射吐温80溶液14d,第14日给药30 min后,尾静脉注射混合探针药物后于各时间点取血.采用LC-MS/MS法测定试验组和对照组混合探针药物的血药浓度,用DAS 2.0软件拟合药代动力学参数.结果 吐温80连续尾静脉注射2周后,与空白对照组相比,非那西丁、奥美拉唑、安非他酮的代谢明显减慢,而咪达唑仑的代谢无明显差异.结论 吐温80对大鼠体内Cyp2c11、Cyp2b1、Cyp1a2酶有明显抑制作用,而对大鼠体内Cyp3a1无明显影响.因此,在临床上吐温80与CYP1 A2、CYP2B6、CYP2C19酶相关的底物合用时,应注意给药剂量,防止药物在体内的血药浓度过高从而导致不良反应.

该研究探讨龙胆泻肝汤氯仿提取物(CELX)对白念珠菌VVC临床株外分泌水解酶的影响.分别采用牛奶培养基、蛋黄培养基、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)培养基对15株白念珠菌VVC临床株进行分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)、磷脂酶(PL)、脂肪酶(Lip)阳性菌株的筛选;牛奶平板法、蛋黄平板法、吐温-80平板法分别检测CELX干预后,Sap,PL与Lip的活性变化;qRT-PCR检测基因SAP1 ～7,10,PLB1 ～2,LIP3 ～6的表达量.结果可见,15株VVC临床株的Sap,PL均为阳性,11株Lip阳性菌株.随着CELX剂量的递增,与空白对照组相比,各含药培养基(牛奶培养基、蛋黄培养基、吐温-80培养基)上菌落的沉淀圈逐渐减小,当药物达256 mg·L-1时,菌落沉淀圈几乎消失,酶活力显著减弱.qRT-PCR结果显示,256mg·L-1CELX时,除SAP5,SAP6外,SAP1,SAP2,SAP3,SAP4,SAP7,SAP9,SAP10分别下调了62％,55％,62％,84％,61％,51％,68％;PLB1下调了67％;LIP3,LIP4,LIP6分别下调了51％,54％,55％.研究表明,CELX能抑制白念珠菌重要毒力因子天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶与脂肪酶的活性.

基于聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)中聚乙氧基团与硫氰酸钴铵生成可溶于有机溶剂的蓝色复合物的显色反应,建立一种适用于药用辅料吐温80快速、准确定量的比色测定方法,为中药注射剂质量控制提供可靠技术手段.在反应动力学研究基础上,对显色反应温度、时间和萃取有机溶剂等关键条件进行优化,并以中药注射剂苦木注射液为供试品进行系统的方法学验证和适用性考察.最终确定在试样溶液中加入3 mL硫氰酸钴铵溶液,于沸水浴中显色反应2 h,冷却至室温后精密加入二氯甲烷5 mL萃取显色产物,根据萃取溶液在623 nm波长处的吸光度计算试样中吐温80含量.在优化测定条件下,吐温80在0.8～3.0 mg与吸光度呈良好线性关系(y=0.258x-0.047,r=0.9996,n=6),精密度RSD<2.0％,平均回收率为99.66％.该方法可快速、准确测定药物制剂中吐温80的含量,适用于中药注射剂的质量控制.

为增加复方甘草汤中挥发油的溶解度,提高其治疗慢性湿疹的疗效,该实验拟将其制成微乳制剂.以挥发油为微乳油相,提取液为微乳水相,通过绘制伪三元相图得到微乳区域面积与体系的最大容水比,进而确定表面活性剂和助表面活性剂的种类以及二者的质量比Km.以微乳粒径、有效成分皮肤滞留量为指标,采用D-最优混料设计法对微乳处方进行优化,进而考察了优选处方的体外释药行为.结果显示,微乳中表面活性剂和助表面活性剂分别选择聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween-80)和无水乙醇效果最好;Km为1时,形成微乳区域面积最大;提取液质量浓度为0.5 g·mL-1时,对微乳的粒径分布影响最小.优选处方为9.4％ Tween-80,9.4％无水乙醇,1.0％薄荷油,80.2％的0.5 g·mL-1提取液,所制得微乳黏度较小、稳定性良好,药物皮肤滞留量较高;体外释放实验结果表明,微乳对于甘草酸、甘草苷具有一定的缓释作用,基本达到了课题预期目的.

为增加石菖蒲挥发油的溶解度,该研究拟将其制成自纳米乳制剂.通过相容性研究、辅料配伍试验、伪三元相图的绘制初步筛选处方,以粒径、载药量为指标,采用Box-Behnken效应面法优化处方,并对最优处方的自纳米乳制剂进行表征、体外溶出评价.结果显示,石菖蒲挥发油自纳米乳的最优处方为:41.7％石菖蒲挥发油、46.8％聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、11.5％ PEG-400;所制得的自纳米乳澄清透明,载药量为(192.77 ±1.64) mg·g-1,粒径为(53.20±0.94) nm,PDI为0.230±0.013,Zeta电位为(-12.2±0.7)mV;在体外溶出度实验中,石菖蒲挥发油自纳米乳明显高于石菖蒲挥发油.该研究中石菖蒲挥发油直接作为自纳米乳中的油相,处方更简单且载药量更高,制得的自纳米乳符合相关的质量要求,为挥发油的制剂研究提供了一定的参考.

药物类过敏性检测是一个国际性的难题,至今尚无一个成熟而可靠的动物模型或试验方法.为探索和建立一种适用于注射类药物临床前类过敏性评价的试验方法和评定标准,该研究根据静脉注射C48/80或聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween 80)导致的小鼠类过敏反应症状,整理出小鼠全身类过敏反应症状表,通过引入能表证类过敏症状强弱的症状强度系数(K)及其计算公式,制订了小鼠全身类过敏症状强度评定标准.以此评定标准为对照,筛选出组胺、类胰蛋白酶和IgE等3个血液生物标志物作为评定药物类过敏性的实验室检测指标,建立了症状评定与血液指标检测联合评价小鼠全身类过敏性的试验方法.该试验方法评定类过敏性的特征:K值、血液组胺水平与C48/80或Tween 80静注剂量呈高度相关;血液组胺对数值升高与K值呈高度正相关;类胰蛋白酶水平表现为升高、持平或下降,其变化状态可能与受试物特性和取血时间有关;IgE水平表现为持平或下降,但不会升高,此可明显区别于I型过敏反应.在此基础上,选用碘海醇、碘普罗胺、紫杉醇以及血塞通注射液、注射用双黄连、生脉注射液等进行适用性考察,检测结果与临床实际用药后情况呈现高度的一致性.结果 提示,小鼠全身类过敏试验方法敏感性高,特异性强,与临床一致性好,建议进一步验证和推广使用.