目的:观察胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂(GANT-61)对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)分化及对Hedgehog信号通路的调控作用的影响。方法:磁珠分选法获得CD133 ＋ CRC-CSCs，用含不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)的GANT-61的干细胞培养液干预，设为对照组、低、中、高剂量组，测定干预不同时刻细胞活性、CRC-CSCs球形成率、CD133 ＋占比、核转录因子1(Gli1)、Hh受体蛋白(Ptch1)、c-Myc、细胞角蛋白20(CK20) mRNA和蛋白表达。多样本计量资料比较采用单因素方差分析，两两样本比较采用SNK- q检验。 结果:与对照组比较，GANT-61各剂量组不同时刻CCK-8试验吸光度( A)值均降低(24 h： t＝2.445、4.985、6.903；48 h： t＝2.859、5.270、7.488；72 h： t＝3.324、8.053、12.042， P<0.05)，且随GANT-61干预剂量升高而降低( F＝13.382、16.842、41.053， P<0.05)，差异有统计学意义；对照组、低、中剂量组CCK-8试验 A值随干预时间延长升高，且干预不同时刻CCK-8试验 A值比较差异均有统计学意义( F＝44.598、31.844， P<0.05)，而高剂量组随干预时间延长无明显变化( F＝1.585， P>0.05)，差异无统计学意义。对照组、GANT-61低、中、高剂量组CRC-CSCs球形成率分别为(13.57±1.55)%、(11.22±1.01)%、(5.46±0.67)%、(1.60±0.30)%，CD133 ＋占比分别为(96.20±3.07)%、(81.34±5.84)%、(62.01±5.03)%、(45.38±4.21)%；与对照组比较，GANT-61各剂量组CRC-CSCs球形成率及CD133 ＋占比均降低(CRC-CSCs球形成率： t＝2.840、10.739、16.954， P<0.05；CD133 ＋占比： t＝5.036、12.974、21.809， P<0.05)，且随GANT-61干预剂量升高而降低，各剂量组组间比较差异均有统计学意义(CRC-CSCs球形成率： F＝225.500， P<0.05；CD133 ＋占比： F＝62.988， P<0.05)。与对照组比较，GANT-61各剂量组Gli1、Ptch1、c-Myc、CK20 mRNA和蛋白相对表达量均降低(mRNA：低剂量组 t＝2.577、2.659、2.524、4.031；中剂量组 t＝5.271、5.587、6.163、6.500；高剂量组 t＝7.442、8.976、8.750、9.632， P<0.05；蛋白：低剂量组 t＝3.008、2.517、2.385、2.981；中剂量组 t＝5.664、8.923、9.500、11.180；高剂量组 t＝14.435、14.137、15.727、14.142， P<0.05)，且随GANT-61干预剂量升高而降低(mRNA： F＝14.825、21.057、22.389、27.160， P<0.05；蛋白： F＝65.340、95.789、151.230、119.877， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:GANT-61可能通过下调Hedgehog信号通路基因Gli1、Ptch1、靶基因c-Myc、分化基因CK20 mRNA和蛋白的表达，从而起到抑制CRC-CSCs细胞自我更新能力、促进细胞分化作用。

目的 探讨miR-34a-5p靶向刺猬(Hh)信号通路对肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的调控作用.方法 采用生物信息学分析筛选出LX2细胞中靶向Hh信号通路的差异miRNA,通过Cytoscape构建miRNA-mRNA网络.体外培养LX2细胞,通过转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立LX2细胞活化模型.细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测miR-34a-5p过表达对LX2细胞增值活力的影响;流式细胞分析法(Annexin-V-FITC/PI)检测miR-34a-5p过表达对LX2细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR和Western blotting分析miR-34a-5p过表达对声波刺猬(Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(Gli1)、脑胶质瘤相关癌基因2(Gli2)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 LX2细胞经TGF-β1诱导活化后,细胞活力显著升高,Shh、Gli1、Gli2、Col-Ⅰ及α-SMA表达均增高(P＜0.01).Hh信号通路特异性阻断剂环靶明脂可降低LX2细胞活力,下调Shh、Gli1、Gli2、Col-Ⅰ及α-SMA蛋白表达(P＜0.01).miR-34a-5p过表达可显著提高LX2细胞活力,上调Gli1、Gli2、Col-Ⅰ及α-SMA蛋白表达(P＜0.05).结论 miR-34a-5p靶向调控LX2细胞的Hh信号通路,过表达miR-34a-5p可以上调Hh信号通路相关蛋白表达,促进LX2细胞活化.