目的 探讨蓬子菜总黄酮基于转化生长因子-β(TGF-β)/Smad3和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对动脉硬化内皮细胞的影响.方法 将24只成年雄兔随机分为正常组、模型组、蓬子菜总黄酮低剂量组、蓬子菜总黄酮高剂量组,每组6只.除正常组外,其余组兔建立下肢动脉硬化闭塞模型.建模成功后,蓬子菜总黄酮低、高剂量组分别给予45 mg/kg、180 mg/kg的蓬子菜总黄酮灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.各组兔灌胃2周后处死,取右侧髂股动脉,分离培养内皮细胞.采用Western blot法检测内皮细胞中TGF-β1、Smad3、JNK及磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达情况,分别采用酶联免疫分析法、硝酸还原法、放射免疫法检测内皮细胞中炎症因子[C反应蛋白(CRP)、可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)]、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量.结果 模型组内皮细胞中 TGF-β1、Smad3、JNK、p-JNK 蛋白表达量及 CRP、sICAM-1、TNF-α、IL-1β、ET-1 含量均明显高于正常组(P均＜0.05),蓬子菜总黄酮各组上述各指标均明显低于模型组(P均＜0.05),且蓬子菜总黄酮高剂量组各指标均明显低于蓬子菜总黄酮低剂量组(P均＜0.05).模型组内皮细胞中NO含量明显低于正常组(P＜0.05),蓬子菜总黄酮各组NO含量均明显高于模型组(P均＜0.05),且蓬子菜总黄酮高剂量组明显高于蓬子菜总黄酮低剂量组(P＜0.05).结论 蓬子菜总黄酮可减轻炎症反应,保护血管内皮细胞,抑制平滑肌细胞增殖和细胞凋亡,改善血管内皮功能,机制可能与抑制TGF-β/Smad3和JNK信号通路有关.

目的 探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)对高糖诱导足细胞损伤的影响及其可能作用机制.方法 采用高糖诱导小鼠足细胞建立细胞损伤模型,不同浓度的FGVL处理足细胞,用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-TPTEP1 转染至足细胞后用25 mmol/L葡萄糖处理24 h,用脂质体转染法将si-NC、si-TPTEP1 转染至足细胞后用200 μg/ml FGVL与25 mmol/L葡萄糖处理24 h;用试剂盒检测丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TPTEP1、miR-770-5p的水平;双荧光素酶报告实验验证TPTEP1 与 miR-770-5p的靶向关系;Western印迹检测肾病蛋白(nephrin)、足突蛋白(podocin)、突触极蛋白(synaptopodin)、酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达量.结果 FGVL可明显降低高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA水平(P<0.05),并可明显降低细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白水平(P<0.05),而细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高(P<0.05),TPTEP1 表达量和nephrin、podocin、synap-topodin蛋白表达明显升高(P<0.05);TPTEP1 可靶向调控miR-770-5p表达;转染pcDNA-TPTEP1 后高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA的水平明显降低,细胞凋亡率明显下降,Cleaved Caspase-3 及Cleaved Caspase-9 蛋白表达明显下降,细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高,nephrin、podocin、synaptopodin 蛋白表达明显升高(均 P<0.05);转染 si-TPTEP1 可逆转FGVL对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡和氧化应激反应.结论 FGVL能有效调控细胞增殖与各项氧化反应,其有效调控TPTEP1/miR-770-5p表达是其发挥调控作用的基础,因此有效改善因高糖引起的足细胞受损.

目的:采用药理效应法测定蓬子菜总黄酮在大鼠体内的药动学参数.方法:以谷胱甘肽过氧化物酶活力升高率作为药理效应评价指标,测定蓬子菜总黄酮在大鼠体内的药物动力学参数.结果:低、中、高不同剂量蓬子菜总黄酮大鼠口服给药后t1/2α分别为1.23,0.93,0.97 h;t1/2 β分别为11.84,12.06, 16.51 h;AUC0-t分别为143.43,206.25,275.92 mg· L-1· h-1;AUC0-∞分别为181.02,231.74, 295.06 mg· L-1· h-1;达峰Tmax为2 h.结论:蓬子菜总黄酮口服给药后,在大鼠体内的药物动力学过程符合二室模型,且在给药剂量范围内呈线性动力学特征.

目的 研究蓬子菜总黄酮(FGVL)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的影响及机制.方法 实验分为对照(Con)组、缺氧/复氧组、蓬子菜总黄酮低、中、高浓度(H/R+ FGVL-L、M、H)组、H/R+ miR-NC组、H/R+miR-205组、H/R+ FGVL+ anti-miR-205组.试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)水平、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(western blot)法检测蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-205表达水平.结果 低、中、高浓度蓬子菜总黄酮处理后,缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞中LDH水平降低,MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05);细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,miR-205表达水平升高,且呈浓度依赖性(P＜0.05).miR-205过表达可抑制缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞氧化应激和凋亡.抑制miR-205表达逆转了蓬子菜总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的作用.结论 蓬子菜总黄酮可能通过上调miR-205表达保护缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞损伤.

目的 研究蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响.方法 实验分为5组,对照组HUVECs正常培养,其余组HUVECs培养后建立H2 O2氧化损伤模型,其中蓬子菜总黄酮低、中、高浓度组分别加入12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的蓬子菜总黄酮培养.采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平,Western blot法检测细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3蛋白表达量.结果 模型组及各浓度蓬子菜总黄酮组细胞增殖率及细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β1蛋白表达量均明显低于对照组(P均<0.05),细胞凋亡率及细胞中MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显高于对照组(P均<0.05).各浓度蓬子菜总黄酮组细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β1蛋白表达量均明显高于模型组(P均<0.05),MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显低于模型组(P均<0.05).中、高浓度蓬子菜总黄酮组细胞增殖率及细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β1蛋白表达量均明显高于低浓度蓬子菜总黄酮组(P均<0.05),且高浓度蓬子菜总黄酮组均明显高于中浓度蓬子菜总黄酮组(P均<0.05);中、高浓度蓬子菜总黄酮组细胞凋亡率及细胞中MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显低于低浓度蓬子菜总黄酮组(P均<0.05),且高浓度蓬子菜总黄酮组均明显低于中浓度蓬子菜总黄酮组(P均<0.05).结论 蓬子菜总黄酮能促进HUVECs增殖,抑制其凋亡,可通过调控TGF-β/Smad3信号通路减轻氧化应激反应,改善血管功能,从而对HUVECs起到保护作用.

目的 研究蓬子菜总黄酮微囊的制备工艺,并对其进行质量评价.方法 采用单凝聚法制备微囊,通过均匀设计法优选微囊的最佳制备条件,用电子显微镜观察微囊的形态,用紫外分光光度法测定微囊的溶出度.结果 确定最佳工艺为囊心、囊材比1∶ 4,成囊温度55℃,转速1000r.min-1,明胶浓度23％,最佳工艺制备的微囊平均包封率51.33％,载药量9.87％.结论 微囊的最优工艺重现性良好,微囊光滑圆整、粒径分布均匀,具有明显的缓释作用,对于延长有效成分的释放时间,维持稳定的血药浓度具有较为重要的意义.

目的:探究FGVL对D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的保护作用.方法:采用腹腔注射D-半乳糖建立过氧化损伤模型后,分别灌胃给予FGVL低、中、高剂量和维生素E,记录大鼠体质量变化.末次给药后取血,并取出心、肾、脾、肝和脑称重,同时进行血浆、肝脏和脑组织中T-SOD、MDA和GSH-Px的测定.结果:给予FVGL不同剂量后,D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的一般状态均明显改善,行动敏捷,毛色有光泽,体质量呈逐渐上升趋势,且与空白组相比无显著差异(P>0.05).血浆和肝脏、脑组织中的T-SOD和GSH-Px水平均不同程度增加,而MDA的水平降低.结论:FGVL可通过降低活性氧自由基的含量,改善D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的老化状态,提高其抗氧化能力,并维持各脏器指标正常,表明FVGL对衰老所致的氧化损伤具有良好的保护作用.

目的 分析蓬子菜总黄酮对动脉粥样硬化模型家兔主动脉组织中Toll样受体(TLR)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响.方法 选取75只家兔,其中15只作为正常组,其余家兔建立动脉粥样硬化模型,建模成功后随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组15只.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予0.05 mg/kg、1.00 mg/kg、1.50 mg/kg蓬子菜总黄酮灌胃,模型组和正常组给予等体积生理盐水灌胃.采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);采用放射免疫法检测6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2);采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测TLR/NF-κB通路蛋白表达量.结果 高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组IL-6、IL-1α、TNF-α水平均高于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于低剂量组(P<0.05);高剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于中剂量组(P<0.05).中剂量组、低剂量组、模型组6-keto-PGF1α水平均低于正常组,TXB2水平均高于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组6-keto-PGF1α水平高于模型组,TXB2水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组6-keto-PGF1α水平高于低剂量组,TXB2水平低于低剂量组(P<0.05);高剂量组6-keto-PGF1α水平高于中剂量组,TXB2水平低于中剂量组(P<0.05).中剂量组、低剂量组、模型组TG、TC、LDL-C水平均高于正常组,HDL-C水平均低于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组TG、TC、LDL-C水平低于模型组,HDL-C水平高于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组TG、TC、LDL-C水平低于低剂量组,HDL-C水平高于低剂量组(P<0.05);高剂量组TG、TC、LDL-C水平低于中剂量组,HDL-C水平高于中剂量组(P<0.05).中剂量组、低剂量组、模型组TLR3、NF-κB p62水平高于正常组(P<0.05);中剂量组、低剂量组TLR3、NF-κB p62水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组TLR3、NF-κB p62水平低于低剂量组(P<0.05).结论 蓬子菜总黄酮可能通过调控TLR/NF-κB信号通路中相关重要信号传导分子的蛋白表达,发挥改善动脉粥样硬化局部炎症的作用,且表现为剂量依赖.