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补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞PEDF及VEGF的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 应用改进的酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将其分为正常对照组(NC组)、正常中药干预组(NCM组)、低AGEs组(LA组)、高AGEs组(HA组)、低AGEs中药干预组(LAM组)、高AGEs中药干预组(HAM组)、模拟缺氧组(SH组)、模拟缺氧中药干预组(SHM组),用酶联免疫吸附法(ELISA)对相关干预条件下体外培养视网膜Müller细胞上清液进行VEGF及PEDF含量的测定.结果 (1)VEGF表达量:①24、48、72 h时,SH组、LA组、HA组视网膜Müller细胞VEGF表达量均高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);HA组、SH组表达量均高于LA组,差异均有统计学意义(P<0.05).②24 h时,SH组表达量高于HA组;48 h时,SH组表达量低于HA组,差异均有统计学意义(P<0.05).③除72 h NCM组VEGF表达量与NC组相比,差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时段有中药干预组的表达量均较对应无中药干预组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).④SH组、LA组、HA组、LAM组、HAM组、SHM组细胞48、72 h时VEGF表达量均较前一时段增高,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)PEDF表达量:①SH组、LA组、HA组各个时段视网膜Müller细胞PEDF表达量较NC组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).②24、72 h时,HA组、SH组PEDF表达量较LA组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).③24 h时,SH组PEDF表达量较HA组降低,差异有统计学意义(P<0.05).④24、72 h NCM组、LAM组,24、48、72 h HAM组,24 h SHM组视网膜Müller细胞PEDF表达量均较对应无中药干预组增高,差异有统计学意义(P<0.05).⑤LA组、HA组、SH组、LAM组、HAM组、SHM组48、72 h时细胞PEDF表达量均较前一时段降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)VEGF/PEDF比值:①NC组、NCM组各时段其比值几乎相同,表明视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的量处于相对平衡的状态.②LA组、HA组、SH组、各时间点其比值较NC组均有不同程度的升高.③LA组、HA组、SH组比值均随着时间的延长而升高;LAM组、HAM组、SHM组比值均随着时间的延长而升高,但较之LA组、HA组、SH组,其升高幅度降低.结论 (1)AGEs以及缺氧均可导致视网膜Müller细胞分泌VEGF增加、PEDF减少,并且这种改变在HA组比LA组更明显.(2)在AGEs以及缺氧条件下,补肾活血中药复方含药血清可降低视网膜Müller细胞VEGF的表达,提高PEDF蛋白的表达,这可能是补肾活血法防治糖尿病视网膜病变(DR)的药物干预途径之一.(3)正常状态下视网膜Müller细胞的VEGF与PEDF呈动态平衡;AGEs以及缺氧条件下不仅使视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的动态平衡均被打破,并且AGEs对视网膜Müller细胞VEGF与PEDF动态平衡的损害程度与AGEs浓度有关.(4)补肾活血中药含药血清可减轻在AGEs以及缺氧条件下VEGF与PEDF的不平衡,这可能是其防治DR的一个重要作用机制.
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编辑人员丨2023/8/5
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补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究
编辑人员丨2023/8/5
目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2(BMP-2)、Smad5表达的影响方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只.制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达.结果:干预12h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低.干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P<0.05).补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组.与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P<0.05).与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05).结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达.
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编辑人员丨2023/8/5
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补肾活血中药复方含药血清通过调节NCC和CLC-5对高盐诱导的体外NRK-52E细胞发挥保护作用
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨补肾活血中药复方含药血清(NKABRS)通过钠氯同向转运体(NCC)和电压门控性氯离子通道5(CLC-5)对高盐诱导的体外大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E损伤、凋亡和骨代谢相关因子表达的影响及作用机制.方法:取SPF级2月龄雌性SD大鼠30只,随机分为对照组与补肾活血中药复方组,分别灌胃给药后制备对照血清和补肾活血中药复方含药血清并作用于体外培养的NRK-52E细胞,CCK-8法检测NKABRS对细胞活力的影响.体外培养的NRK-52E细胞,分为对照组、NKABRS(3%)组、NaCl(0.25 mol/L)组和NaCl+NKABRS组,CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot和RT-qPCR法检测细胞内骨桥蛋白(OPN)、NCC、CLC-5、骨形态发生蛋白7(BMP-7)和1α-羟化酶(CYP27B1)的表达,免疫荧光法检测细胞内CLC-5和NCC的蛋白含量及分布.通过RNA干扰技术敲减NRK-52E细胞NCC和CLC-5的表达,RT-qPCR检测敲减后各组细胞内BMP-7、1α-羟化酶和OPN的表达.结果:NaCl(0.25 mol/L)可抑制体外NRK-52E细胞的活力并增加其细胞凋亡率(P<0.01),同时增加细胞NCC和OPN表达,并减少CLC-5、BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01);NKABRS可增加NaCl诱导的细胞活力并降低细胞凋亡率(P<0.01),降低NCC和OPN表达,并提高CLC-5、BMP-7和1α-羟化酶的表达(P<0.01).沉默体外培养的NRK-52E细胞内NCC基因可下调OPN表达并增加BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01),NKABRS可进一步提高BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.05);沉默细胞内CLC-5基因可增加OPN表达并减少BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01),NKABRS可抑制OPN表达并上调BMP-7和1α-羟化酶表达(P<0.01).结论:NKABRS可减轻高浓度NaCl引起的体外NRK-52E细胞的损伤和凋亡,其机制可能与减少NCC表达并增加CLC-5及细胞内骨代谢正向调节因子1α-羟化酶和BMP-7的表达有关.
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编辑人员丨2023/8/5
