目的:构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体，优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法:在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体，estrogen receptor)，选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498; http：//n2t.net/addgene：49498; RRID：Addgene_49498)，设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD，分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD，改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化。待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳，可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带，即为可溶性ERα-LBD蛋白。结果:pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD，重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体；以0.2 mmol/L IPTG 16 ℃过夜诱导培养，则可得到可溶性ERα-LBD蛋白。结论:成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件，获得可溶性ERα-LBD蛋白。

基于网络药理学研究杜仲和菟丝子治疗骨质疏松的作用机制。 方法:从 TCMSP、OMIM、Drugbank、GeneCards、PharmGkb、TTD 数据库中确定杜仲和菟丝子的潜在活性成分、作用靶点和疾病的差异基因,取两者交集,利用Cytoscape 3. 9. 0 软件构建“中药-活性成分-交集靶点-疾病”调控网络图,string数据构建杜仲、菟丝子和骨质疏松的PPI网络;通过R包进行GO和KEGG功能富集分析。结果:经TCMSP数据库确定杜仲、菟丝子2 个药物共有39 个化合成分,211 个药物靶标;经OMIM、Drugbank、GeneCards、PharmGkb、TTD 数据库分析确定杜仲和菟丝子治疗骨质疏松共同靶点83个,利用string数据构建杜仲、菟丝子和骨质疏松的靶点。GO分析表明生物过程( BP)涉及对药物的反应、对氧化应激的反应、细胞对化学压力等,细胞成分( CC)涉及膜筏、膜微域、膜区等区域,分子功能( MF)涉及核受体活性、配体激活的转录因子活性、DNA结合的转录因子结合等生物学过程。KEGG结果表明,杜仲、菟丝子治疗骨质疏松的信号通路包括药物的反应、氧化应激反应、细胞对化学压力的反应、活性氧代谢过程等通路。结论:杜仲和菟丝子改善骨质疏松的作用机制可能是通过影响蛋白激酶(Akt1)、原癌基因 c-FOS(FOS)、雌激素受体α基因(ESR1)、钙黏蛋白相关蛋白(CT-NNB1)、肿瘤抑制蛋白(TP53)、促分裂原活化蛋白激酶1(mapk1)、类视黄醇X受体(RXRA)、表皮生长因子受体(EGFR)、核受体辅激活蛋白1基因(NCOA1)、白介素10(IL10)等基因的表达进而调控氧化应激反应、荷尔蒙反应、雌性激素反应等信号传导途径实现的。

[目的]从覆盆子中筛选具有雌激素样活性的化合物.[方法]基于配体=受体理论,以人源雌激素受体亚型的配体结合域(hERα-LBD、hERβ-LBD)为靶点,以17β-雌二醇(E2)为阳性对照,采用Thermal Shift高通量筛选方法筛选覆盆子中具有雌激素样活性的化合物.[结果]山柰酚明显提高雌激素受体配体结合域的(hERα-LBD、hERβ-LBD)热稳定性.[结论]山柰酚能与hERα-LBD和hERβ-LBD结合,具有雌激素样活性.

孤儿核受体雌激素相关受体α(estrogen-related receptorα,ERRα)是核受体超家族(nuclear receptor superfamily,NRs)中无需和配体结合便可发挥其生物学功能的特殊类型.早期对ERRα的研究主要侧重于其参与和影响雌激素信号转导途径,以及其对机体正常能量代谢的调控研究.近年来,研究发现ERRα能在肿瘤发生和发展进程中调控肿瘤细胞的代谢重编程来满足其能量需求.ERRα在肿瘤领域受到广泛的关注还表现在其用于靶向治疗的成药潜力,以及对肿瘤患者不良预后的评估作用等方面.

雌激素受体(ER)-α36属于ER-α的亚型,其分子量为36 kD,为ER-α36的变异体.ER-α36主要表达在细胞质和细胞膜上,与ER-α66比较,其缺少了转录激活结构域(AF)-1和AF-2,保留了ER-α66的DNA结合结构域、部分二聚化结构域,以及部分配体结合结构域,可以与多种信号因子如蛋白激酶A、蛋白激酶C、Ca2+协同作用,能在短时间内快速地激活非基因组雌激素信号通路,来调控肿瘤的生物学行为.目前的研究已经发现ER-α36在人乳腺癌、子宫内膜癌等多种雌激素相关肿瘤细胞中表达.因此,ER-α36与乳腺癌的关系非常值得研究.