海马神经细胞丢失是阿尔茨海默病(AD)的主要病理特征之一,其发生与海马神经细胞凋亡有关.黄蒲通窍胶囊用于治疗AD,但其作用机制尚未明确.该实验通过观察黄蒲通窍胶囊含药血清对Aβ25-35诱导的原代培养海马神经元AD细胞模型神经损伤的保护作用及细胞凋亡的影响,探讨黄蒲通窍胶囊治疗AD的神经保护作用机制.原代培养海马神经元,倒置显微镜观察细胞生长状态,MAP-2免疫荧光法鉴定原代培养的海马神经元.运用血清药理学方法制备黄蒲通窍胶囊含药血清,MTT法筛选黄蒲通窍胶囊含药血清最佳浓度范围和Aβ25-35造模浓度.用Aβ25-35诱导建立AD细胞模型后,给予不同浓度的黄蒲通窍胶囊含药血清继续干预,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞内Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达.结果显示,原代培养海马神经元成功,且海马神经元在培养至第7天时生长成熟;与正常组比较,模型组海马神经元细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊含药血清组细胞存活率明显升高,细胞凋亡率减少,Bax,Cyt C,caspase-3蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).结果表明,黄蒲通窍胶囊含药血清对Aβ25-35诱导的原代培养海马神经元损伤具有保护作用,可抑制海马神经元细胞凋亡从而起到治疗AD的作用.

目的 探讨黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆的影响及其可能作用机制.方法 SD大鼠予以腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35建立AD动物模型,期间给予不同剂量黄蒲通窍胶囊干预28天,同时设立假手术组和多奈哌齐阳性对照组.Morris水迷宫实验测试各组大鼠逃避潜伏期变化,HE染色观察各组大鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测大鼠海马Bax表达,ELISA法检测大鼠血清中谷胱甘肽(GSH)含量,比色法检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,Westernblot法检测大鼠海马组织细胞色素C(Cyt C)、Bcl-2、Caspase-3含量.结果 与假手术组比较,模型组逃避潜伏期明显延长,海马神经元损伤严重,GSH、Bcl-2含量和SOD活性明显降低,MDA含量和Cyt C、Bax、Caspase-3表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组逃避潜伏期明显缩短,海马神经元损伤较轻,GSH、Bcl-2含量和SOD活性明显升高,MDA含量和Cyt C、Bax、Caspase-3表达明显降低(P ＜0.01,P ＜0.05).结论 黄蒲通窍胶囊对AD大鼠的学习记忆能力有明显改善作用,可减少AD大鼠海马神经元的损伤,其机制可能与减少氧化应激和抑制线粒体凋亡途径有关.

目的:研究黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠JNK信号通路蛋白及炎性因子表达的影响,探讨其治疗AD的作用机制.方法:48只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、黄蒲通窍组(HPTQ组)和多奈哌齐组(Don组),每组12只.除Sham组外,其余各组采用大鼠腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射β-淀粉样肽25-35(β-amyloid peptide 25-35,A β25-35)建立AD动物模型.各组采取相应干预28d.采用Morris水迷宫法测试大鼠逃避潜伏期,HE染色观察大鼠海马CA3区神经元损伤情况,ELISA法检测大鼠血清IL-1 β、TNF-α含量,Western Blot法检测大鼠海马组织JNK、p-JNK含量.结果:与Sham组比较,Model组大鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.01),海马CA3区神经元损伤明显,IL-1β、TNF-α含量明显升高(P＜0.01),JNK及P-JNK蛋白表达显著增强(P＜0.0l);与Model组比较,HPTQ,Don组大鼠逃避潜伏期明显缩短(p＜0.01),海马CA3区神经元损伤较轻,IL-1 β、TNF-α含量明显降低(P＜0.01),JNK及P-JNK蛋白表达明显减弱(P＜0.01,P＜0.05).结论:中药黄蒲通窍胶囊可抑制JNK信号转导通路异常激活,控制血清中的炎性因子,改善AD大鼠海马神经元损伤.

黄蒲通窍胶囊(Huangpu Tongqiao Capsules,HPTQC)功能益气补肾,豁痰化瘀,具有治疗阿尔茨海默病(AD)的作用,但其作用机制需进一步探讨.为了探讨黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病的治疗作用机制与EGFR-PLCγ信号通路的关系,该实验选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组:假手术组(sham)、模型组(model)、黄蒲通窍胶囊组(HPTQC)、尼莫地平组(NMP),运用腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35的方法进行造模,给药28 d后,Moms水迷宫实验和HE染色结果显示:AD大鼠学习记忆能力明显下降(P＜0.01),海马神经元出现明显损伤,而黄蒲通窍胶囊可显著提高AD大鼠学习记忆能力(P＜0.05),减轻海马神经元损伤.免疫荧光实验结果显示:AD大鼠海马CA1区EGFR和p-Tau表达明显增加(P＜0.01),而黄蒲通窍胶囊可显著减少AD大鼠海马EGFR和p-Tau表达(P＜0.01).Western blot实验结果显示:AD大鼠海马EGFR,PLCγ,IP3R,p-Tau蛋白表达明显增加(P＜0.01),而黄蒲通窍胶囊可显著减少AD大鼠EGFR,PLCγ,IP3R,p-Tau蛋白表达(P＜0.05);RT-PCR实验结果显示:AD大鼠海马EGFR,PLCγ,IP3R,Tau的mRNA水平明显升高(P＜0.01),而黄蒲通窍胶囊可显著降低AD大鼠EGFR,PLCγ,IP3R,Tau的mRNA水平(P＜0.05).结果 表明,黄蒲通窍胶囊可改善AD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与调节EGFR-PLCγ信号通路有关.

目的 观察黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆的影响,探究其潜在作用机制.方法 将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄蒲通窍胶囊组,每组10只,腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35复制AD大鼠模型;给药28 d,采用Mor-ris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,检测后取材,采用苏木精-伊红染色观察海马神经细胞损伤情况,采用Western blot法检测海马组织中Wnt5、Frizzled、PLCβ蛋白表达水平,采用ELISA法检测血清三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)表达水平.结果 Morris水迷宫实验结果显示:训练期,各组大鼠的逃避潜伏期随时间的增加呈下降趋势;测试期,与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,目标象限路程与时间百分比明显减少(P<0.05);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠逃避潜伏期明显缩短,目标象限路程百分比和时间百分比明显增加(P<0.05).苏木精-伊红染色结果显示:与空白组比较,模型组大鼠海马神经细胞萎缩破裂、层数减少、排列松散;与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠海马神经细胞损伤减轻.Western blot法检测结果显示:与空白组比较,模型大鼠Wnt5、Frizzled、PLCβ表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠Wnt5、Frizzled、PLCβ表达水平均明显降低(P<0.05).ELISA法检测结果显示:与空白组比较,模型组大鼠IP3表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组IP3表达水平明显降低(P<0.05).结论 黄蒲通窍胶囊可减少AD模型大鼠海马神经细胞的损伤,改善其学习记忆的能力,其机制可能与抑制Wnt/Ca2+信号通路有关.