目的 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T812-2022),获得8种沙门菌主要血清型标准株,并建立标准株筛选主要流程.方法 分别对原代及传代沙门菌菌株进行形态学观察、生化试验及基因组测序分析,获得形态及生化典型、基因组稳定的标准菌株.结果 从24株沙门菌中筛选获得8株分属8种血清型(伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、单相鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌)的菌株,这8株菌在沙门菌推荐用选择性培养基上形态典型,生化反应典型,传代后基因组变异较小,血清凝集结果稳定,可以作为沙门菌检验的参比菌株.结论 本研究通过筛选获得具有相应血清型病原特征的8种沙门菌主要血清型标准株,可作为沙门菌检测、血清分型质控、基因组进化分析的参比菌株,并为后续核酸标准品的研制提供基础.

目的 了解2013—2015年上海市流行的鼠伤寒沙门菌单相变异株的基因型和耐药谱.方法 对2013—2015年上海市疾病预防控制中心细菌检测实验室保存的1179株分离自腹泻患者的沙门菌进行血清分型复核,结合聚合酶链反应(PCR)筛选、鉴定鼠伤寒沙门菌单相变异株.采用PCR检测鼠伤寒沙门菌单相变异株基因型.采用改良纸片扩散法对鼠伤寒沙门菌双相株和单相株进行14种抗菌药物体外药物敏感性试验,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判断结果.结果 1179株沙门菌中共检出鼠伤寒沙门菌单相变异株52株,在沙门菌和鼠伤寒沙门菌中的阳性率分别为4.4％和23.3％,病例来源主要为上海郊区,且以青中年人群为主.在52株鼠伤寒沙门菌单相变异株中,有44株(84.6％)fljB基因缺失;在8株fljB基因未缺失株中,有2株(3.8％)基因型为fljB+fljA-hin-,6株(11.6％)为fljB+fljA+hin+.药物敏感性试验结果显示,耐3类以上抗菌药物的单相株有40株(76.9％),耐4类以上抗菌药物的单相株有36株(69.2％),并且鼠伤寒沙门菌单相株对氨苄西林-链霉素-磺胺类药-四环素(ASSuT)的耐药率(61.54％)和对氨苄西林-氯霉素-链霉素-磺胺类药-四环素(ACSSuT)的耐药率(19.23％)均远高于双相株(10.6％)(P<0.05).结论 上海市鼠伤寒沙门菌单相变异株检出率较高且人群分布不均,多重耐药性严重,在疾病防控中应注意合理布局资源和使用药物.

目的 鉴定鼠伤寒沙门菌和单相变异株,比较其脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型与耐药特征,为鼠伤寒沙门菌和单相变异株病原研究及食源性疾病防控提供依据.方法 通过优化鉴定鼠伤寒沙门菌和单相变异株的双重PCR反应条件,对2010-2017年四川省食品中分离的27株疑似鼠伤寒沙门菌进行鉴定,并运用PFGE分析其同源性,采用最小抑菌浓度法(MIC)测定14种药物敏感性.结果 运用优化的双重PCR方法,27株疑似鼠伤寒沙门菌经鉴定有14株鼠伤寒沙门菌和13株单相变异株.其中,有71.4％(10/13)单相变异株均来源于生猪肉.鼠伤寒沙门菌PFGE型别呈现出遗传的多样性,而单相变异株主要聚集于SC10型.单相变异株对AMP和TET的耐药率均远高于鼠伤寒沙门菌(P＜0.05).耐3种以上抗菌药物的单相株有6株(46.2％),鼠伤寒沙门菌有5株(35.7％),并且单相株表现出对AMP-TET-NAL有高的耐药率(23.1％).结论 双重PCR方法能准确地鉴定和区分鼠伤寒沙门菌和单相变异株.四川省食品中的鼠伤寒沙门菌和单相变异株在PFGE型别以及耐药上存在差异.单相变异株呈现多重耐药趋势,应加强监测.

目的 对1起农村家宴所致疑似细菌性食源性疾病暴发进行病原学检验与溯源分析,为患者诊治、事件处置提供依据.方法 2019-05广元市某县发生1起村民家中自办丧宴所致食源性疾病暴发事件,根据流行病学调查信息,采集患者粪便或肛拭和可疑食物,开展病原菌分离鉴定、药敏试验、脉冲场电泳(PFGE)试验、分子分型聚类与溯源分析.结果 从3例患者粪便标本和4份可疑食品中均检出鼠伤寒沙门菌单相变异株;PFGE聚类分析结果显示患者分离株与食品分离株PFGE型别一致;所有分离株均对氨苄西林、四环素、氯霉素、复方新诺明耐药.结论 本次食源性疾病由鼠伤寒沙门菌单相变异株污染食品所致.

目的 了解贵州省鼠伤寒沙门菌单相变异株规律的成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)的基因型及遗传多样性,为贵州省沙门菌病的预防控制提供依据.方法 对分离 自2013-2018年贵州省7个市(州)的71株疑似鼠伤寒沙门菌单相变异株进行系统生化鉴定及血清分型,结合双重PCR法确定疑似菌株为鼠伤寒沙门菌单相变异株.提取鼠伤寒沙门菌单相变异株的DNA作为模板,进行CRISPR1和CRISPR2的PCR扩增,将阳性扩增产物进一步测序,获得菌株的CRISPR1和CRISPR2间隔序列,根据间隔序列的组成,确定CRISPR基因型,并使用Bionumerics软件对菌株进行遗传多样性分析.结果 71株疑似鼠伤寒沙门菌单相变异菌株经系统生化鉴定、血清分型及双重PCR法鉴定为鼠伤寒沙门菌单相变异株,经CRISPR1和CRISPR2两个位点的PCR扩增和产物测序,71株菌共检测到163个间隔序列,其中CRISPR1有102个,CRISPR2有61个.联合CRISPR1和CRISPR2两个位点的间隔序列进行分析,发现71株菌被分为33个CRISPR基因型(TSTs),其中TST11和TST1为贵州省的优势基因型,分别占总菌株数的25.35％和12.68％.71株菌经Bionumerics软件聚类分析后被分为A、B、C、D 4个簇,A簇包含的菌株最多,B簇包含的基因型最多,不同来源的3株参考株独立成簇,D簇包含7个TSTs基因型.结论 贵州省鼠伤寒沙门菌单相变异株具有优势的CRISPR基因型和遗传多样性的特点,可能有其他的感染来源.

目的 分析河南省腹泻病例粪便标本中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的鼠伤寒沙门菌单相变异株耐药情况,并研究其分子学特征.方法 对河南省腹泻粪便中分离的124株鼠伤寒沙门菌单相变异株沙门菌,通过肉汤稀释法进行抗生素敏感性试验并筛选产ESBLs菌株;PCR方法检测β-内酰胺酶编码基因携带情况,采用质粒接合试验分析耐药基因的水平转移情况,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行亲缘关系分析.结果 124株鼠伤寒沙门菌单相变异株沙门菌耐药严重,其中有16株为产ESBLs菌株.16株产ESBLs菌株均携带CTX-M型耐药基因,并检测出OXA型和TEM型耐药基因;其中9株菌可将CTX-M基因通过质粒转移到大肠埃希菌J53,药敏分析发现其他抗生素的耐药性可以发生共转移.16株产ESBLs鼠伤寒沙门菌单相变异株沙门菌经Xba I酶切后共分为14种带型,无明显的优势带型.结论 检出产ESBLs的鼠伤寒沙门菌单相变异株沙门菌基因型具有多样性,耐药基因可通过接合性质粒在不同菌属间播散.