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ASTL抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨龙虾肽酶样金属内肽酶（ASTL）抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。方法:培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞，根据细胞处理方法的不同，按以下方式进行分组。（1）将ME-180细胞分为4组：对照组、照射组（4 Gy）、ASTL抗体组、ASTL抗体+照射组（4 Gy），采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色、3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测每组细胞的增殖能力与存活情况，并于照射后0、24、48、72 h采用免疫荧光、Western blot实验检测ASTL在细胞中的定位情况。（2）将ME-180细胞分为2组：照射组、ASTL抗体+照射组，分别进行0、2、4、8 Gy照射，并采用克隆形成实验检测每组细胞的增殖能力。（3）将HeLa细胞分为2组：照射组、ASTL抗体+照射组，分别进行0、2、4、8 Gy照射，采用MTT实验检测细胞的存活情况。（4）将ME-180细胞分为2组：短发夹RNA对照组（sh-对照组）、短发夹RNA ASTL转染组（sh-ASTL组），采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、Western blot实验检测蛋白激酶B (AKT）等靶基因的表达情况；同时，分别用0、5、10 nmoL/L的抗体处理ME-180细胞，采用Western blot实验检测抗体中和对靶基因表达情况的影响。（5）将ME-180细胞分为2组：对照组、照射组（4 Gy），采用Western blot实验检测ASTL、AKT等靶基因的表达情况。以上照射均使用 137Cs γ射线照射源，剂量率为1 Gy/min。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:（1）EdU染色实验结果显示，与照射组相比，ASTL抗体+照射组（4 Gy）抑制了ME-180细胞的增殖，差异有统计学意义（ t=9.25， P< 0.05）；MTT实验结果显示，与照射组相比，ASTL抗体+照射组（4 Gy）在照射后24、48、72 h时，ME-180细胞生长速度明显降低，且差异均有统计学意义（ t=5.17、10.32、14.27，均 P<0.05)。免疫荧光、Western blot实验结果显示，4 Gy照射后24 h时，ME-180细胞中ASTL在细胞质的定位显著增加，照射后48~72 h，ASTL重新定位于细胞膜上。（2）克隆形成实验结果显示，与照射组相比，ASTL抗体+照射组能够抑制8 Gy照射后ME-180细胞的增殖，且差异有统计学意义（ t=7.63， P<0.05）。（3) HeLa细胞MTT实验结果显示，与照射组相比，ASTL抗体+照射组能够降低2、4、8 Gy照射后HeLa细胞的存活率，且差异均有统计学意义（ t=4.27、9.66、15.71，均 P<0.05）。（4）qRT-PCR实验结果显示，ASTL干扰片段转入后，AKT的表达水平下调（ t=13.94， P<0.05），同时，Western blot实验结果表明，ASTL干扰或加入ASTL抗体能够降低AKT等靶基因的表达水平。（5）Western blot实验结果显示，与对照组相比，照射组（4 Gy) ASTL、AKT等靶基因的表达水平显著升高。 结论:人宫颈癌ME-180细胞的放射敏感性与ASTL的水平相关，ASTL抗体或sh-ASTL能够增强照射后ME-180细胞的放射敏感性。
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编辑人员丨4天前
