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BVT-14225通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1还原活性促进神经干细胞增殖和迁移
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨BVT-14225(BVT)通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)的还原活性对神经干细胞(NSC)增殖、分化和迁移的影响.方法 取孕15 d SD胎大鼠的大脑皮质,分离培养原代NSC,采用免疫荧光染色法对NSC标志物巢蛋白和性别决定基因相关转录因子2(Sox2)进行染色,鉴定原代细胞;逆转录聚合酶链反应及核酸凝胶电泳法检测11β-HSD1 mRNA在NSC上的表达.细胞随机分为5组:细胞对照组(培养48 h)、溶剂对照组(0.1％DMSO孵育48 h)、DHC模型组(DHC 10.0μmol·L-1处理48 h)、BVT对照组(BVT 10.0μmol·L-1处理48 h)和BVT干预组(BVT 10μmol·L-1处理1 h后再给予DHC 10.0μmol·L-1,继续处理48 h).5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖试剂盒检测NSC的增殖能力;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性;超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)检测11β-HSD1酶的还原活性;Western印迹法检测11β-HSD1蛋白表达水平;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)抗体免疫荧光染色检测NSC的分化能力;划痕实验检测NSC的迁移能力.结果 巢蛋白和Sox2免疫染色鉴定原代培养细胞为NSC,核酸凝胶电泳条带图证明11β-HSD1 mRNA在NSC定性表达.LDH释放实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1对NSC均无毒性作用.UPLC-MS实验结果显示,BVT 10.0μmol·L-1能显著降低11β-HSD1的还原活性(P<0.01).Western印迹结果显示,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1均不改变11β-HSD1蛋白表达水平.EdU实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1可抑制NSC增殖(P<0.01),但BVT 10.0μmol·L-1预处理可显著缓解DHC 10.0μmol·L-1对NSC增殖的抑制(P<0.05).GFAP和NeuN的免疫荧光染色实验结果表明,DHC 10.0μmol·L-1和BVT 10.0μmol·L-1均不影响NSC分化.划痕实验结果显示,DHC 10.0μmol·L-1不影响NSC的迁移,但BVT 10.0μmol·L-1预处理可显著促进NSC迁移(P<0.05).结论 糖皮质激素浓度显著升高时,BVT可通过抑制NSC 11β-HSD1的还原活性促进NSC增殖和迁移,但对分化无影响.
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编辑人员丨2023/8/5
