目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)载体对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)小鼠的治疗效果及其对巨噬细胞的作用机制。方法:对DBA/1小鼠注射牛Ⅱ型胶原建立CIA小鼠模型。建模成功的CIA小鼠分别给予尾静脉注射阴性对照腺病毒和HIF-1α-siRNA腺病毒，每周1次，共4周。实验分为空白组、CIA模型组、阴性对照组和HIF-1α-siRNA组。分离培养骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages, BMDMs)，RT-PCR检测4组小鼠BMDMs中CD206、精氨酸(arginine, Arg)的相对表达量；流式细胞术检测小鼠脾脏和胸腺中F4/80 +CD16/32 +M1和F4/80 +CD206 +M2型巨噬细胞比例；HE染色观察小鼠踝关节的病理变化；免疫组化法检测小鼠滑膜组织中巨噬细胞及其亚型水平。 结果:(1)与空白组比较，模型组小鼠BMDMs中CD206 mRNA水平降低，Arg mRNA水平升高( P<0.01)。HIF-1α-siRNA可升高CIA小鼠BMDMs中CD206 mRNA表达水平( P<0.05)，降低Arg mRNA表达水平( P<0.01)。(2)与空白组比较，CIA模型组小鼠脾细胞和胸腺细胞中F4/80 +CD16/32 +M1巨噬细胞比例增加( P<0.05)，胸腺细胞中F4/80 +CD206 +M2巨噬细胞比例下降( P<0.05)。HIF-1α-siRNA可以降低CIA小鼠脾细胞和胸腺细胞中F4/80 +CD16/32 +M1巨噬细胞比例( P<0.05)，升高胸腺细胞中F4/80 +CD206 +M2型巨噬细胞比例( P<0.01)。(3)CIA小鼠踝关节的滑膜增生，以M1型巨噬细胞浸润为主；HIF-1α-siRNA可以减轻滑膜组织的增生及炎症细胞的浸润，尤其是M1型巨噬细胞的浸润。 结论:HIF-1α-siRNA可以降低胸腺细胞、BMDMs和小鼠滑膜组织中M1型巨噬细胞的比例，增加M2型巨噬细胞的比例，减轻CIA小鼠滑膜组织的巨噬细胞浸润和增生的情况，提示HIF-1α-siRNA可以通过调控M1型和M2型巨噬细胞的分化而起到治疗CIA小鼠的作用。

目的:探索78c对RA和小鼠胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗及作用机制。方法:用78c处理小鼠CIA模型和人CD38 +NK细胞，用流式细胞术检测小鼠外周血和细胞培养液中各细胞因子浓度及各淋巴细胞亚型。用Miltenyi细胞分离试剂盒从健康志愿者外周血单核细胞中分离CD4 +T细胞和NK细胞，然后用Miltenyi CD38微珠从NK细胞中富集CD38 +NK细胞，最后将CD38 +NK细胞与CD4 +T细胞在Transwell中共培养。单因素方差分析进行多组间显著性差异分析，LSD法进行2组间比较，Pearson法进行秩相关分析。 结果:78c注射第21天后，与CIA小鼠[（4.70±0.56）mm]相比，78c明显抑制小鼠CIA足趾厚度[（4.07±0.20）mm]（ t=5.07， P<0.001）；其外周血中白细胞、中性粒细胞、血小板、IFN-γ、IL-6及TNF-α水平明显降低（ t=6.10， P<0.001； t=4.00， P=0.002； t=3.09， P=0.012； t=2.31， P=0.043； t=3.58， P=0.005； t=2.68， P=0.002）。CD38 +NK细胞的比例从[（3.9±0.9）%]降低到[（2.4±0.3）%]（ t=2.49， P=0.032），调节性T细胞（Treg）比例从[（0.81±0.33）%]升高到[（1.41±0.26）%]（ t=2.74， P=0.021），IL-10浓度也从[（99±37）pg/ml]升高到[（199±9）pg/ml]（ t=2.76， P=0.020）。与CD38 + NK细胞共培养后的CD4 +T细胞相比，和78c预处理的CD38 +NK细胞共培养后CD4 +T细胞中Treg比例从[（0.52±0.04）%]上升到[（0.69±0.08）%]（ t=3.33， P=0.029），辅助性T细胞（Th）17/Treg比值从（4.44±0.26）下降到（2.59±0.64）（ t=4.76， P=0.009），Thl/Th2的比值从（14.78+1.58）下降到（8.12±1.26）（ t=5.70， P=0.005）。 结论:78c可以通过降低CD38 +NK细胞比例提升CD4 +T细胞分化Treg的能力，恢复免疫平衡和缓解关节炎症，可能是RA潜在的治疗药物。

目的:制备探针 N- 18F-氟乙基-托法替尼，探讨其用于类风湿关节炎(RA)诊疗的可行性。 方法:采用"两步法"对托法替尼进行 18F-氟乙基修饰，应用高效液相色谱(HPLC)对探针的标记率和放化纯进行测定，并考察探针的体内外稳定性。BABL/c小鼠(正常组； n＝3)和胶原诱导型关节炎(CIA)模型鼠(实验组； n＝3)注射 N- 18F-氟乙基-托法替尼，另设阻断组(CIA模型鼠注射托法替尼+ N- 18F-氟乙基-托法替尼； n＝3)，3组小鼠行microPET显像，观察关节炎性反应部位对 N- 18F-氟乙基-托法替尼的摄取情况，计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及关节/肌肉(T/M)比值。采用单因素方差分析和最小显著差异 t检验分析数据。 结果:N- 18F-氟乙基-托法替尼的合成时间约为120 min，产率约1%，比活度>13.6 GBq/μmol，放化纯>99%。探针在PBS、血浆和体内温育2 h后，放化纯仍大于95%。MicroPET显像示，注射后30 min， N- 18F-氟乙基-托法替尼在CIA模型鼠关节部位的摄取高于正常组和阻断组[(10.22±1.64)、(2.71±0.26)和(2.81±0.33) %ID/g； F＝58.26, t值：7.83、7.67, P值：0.001、0.002]；T/M比值也高于正常组和阻断组(24.73±5.77、2.75±1.36和2.89±0.54； F＝40.64, t值：6.42、6.53, P值：0.003、0.003)。 结论:成功制备了探针 N- 18F-氟乙基-托法替尼，其体内外稳定性佳，体内显像性能良好，具有较好的临床应用前景。

目的:探讨祖师麻膏药对CIA小鼠炎症及骨破坏的抑制作用.方法:采用SPF级雄性DBA/1小鼠,随机选取6只为正常组,将造模成功的18只CIA小鼠按照随机数字表法分为模型组、膏药组(1.0 g/kg)、扶他林组(0.12 g/次),每组各6只,各个给药组按照体质量予以药物贴敷治疗,正常组和模型组给予生理盐水同时贴敷透气胶纸,每日一次,4 h/次,连续给药4周.采用关节炎评分指数观测各组小鼠关节炎症状变化及关节炎指数评分,Micro-CT观察小鼠后爪损伤情况,实时荧光PCR法检测踝关节组织IL-17、IL-1β、TNF-α mRNA表达,免疫组织化学法检测踝关节组织OPG、RANKL蛋白的表达,苏木素-伊红(HE)染色后观察滑膜组织病理改变,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)法观察踝关节组织破骨细胞变化.结果:与正常组比较,模型组小鼠关节炎指数评分明显升高(P＜0.05).Micro-CT示小鼠后爪骨侵蚀严重,骨面破坏,骨量减少;踝关节组织IL-17、IL-1β、TNF-α mRNA(PCR)表达明显升高(P＜0.05).免疫组化显示踝关节组织OPG蛋白相对表达量降低(P＜0.01),RANKL蛋白相对表达量升高(P＜0.01).HE结果显示中度的炎性细胞浸润,滑膜细胞肿大,大量的血管翳形成及滑膜增生;破骨细胞数量增加,关节软骨组织表面粗糙,出现严重的骨破坏,软骨层变薄.与模型组比较,膏药组和扶他林组小鼠关节炎症状缓解,关节炎指数评分降低;小鼠后爪骨质密度改善,有效地缓解骨质疏松;踝关节组织IL-17、IL-1β、TNF-α mRNA(PCR)表达明显降低(P＜0.05);免疫组化结果示OPG蛋白相对表达量升高(P＜0.05),RANKL蛋白相对表达量降低(P＜0.01).HE结果示滑膜细胞肿大明显改善,轻度炎性细胞浸润,滑膜增生不明显;破骨数量减少,关节软骨破坏明显改善缓解,软骨层厚度显著增加.结论:祖师麻膏药可以缓解RA局部症状,降低炎症因子表达,减轻炎症反应,可能是通过调控OPG/RANKL信号轴抑制破骨细胞的分化及活化,进一步改善关节骨及软骨破坏的生物学效应.

目的 探究色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO2)在胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠中的表达以及前列腺素E2(PGE2)抑制TDO2表达和活性调控巨噬细胞功能的机制.方法 Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠制备CIA模型.X射线检测CIA小鼠踝关节损伤变化;免疫组化检测小鼠踝关节、脾脏中TDO2表达;qPCR和免疫荧光检测小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2表达变化.通过在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予不同浓度PGE2(0.1、1、10 μmol/L)刺激和给予前列腺素受体4(EP4)激动剂 CAY10598 后,qPCR 和 Western blot 检测 TDO2 表达;流式细胞术检测巨噬细胞吞噬和极化功能;比色法检测TDO2活性.结果 与正常组小鼠比较,CIA小鼠踝关节软组织肿胀变大,关节滑膜、脾脏及腹腔巨噬细胞中TDO2表达增加.在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予PGE2刺激、给予EP4受体激动剂CAY10598后TDO2表达明显被抑制,巨噬细胞吞噬功能下降,M1/M2比值下降(P＜0.05);比色法结果显示RAW264.7细胞中分别给予PGE2刺激以及EP4激动剂CAY10598后TDO2的活性被抑制(P＜0.05).结论 巨噬细胞TDO2表达升高可能促进了 CIA小鼠关节滑膜损伤,PGE2通过激活EP4受体抑制TDO2表达和活性从而调节巨噬细胞功能.

目的 通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型观察阿巴西普对类风湿关节炎(RA)慢性炎症和骨质侵蚀的影响.方法 将60只BALB/c雌性小鼠按简单随机分组法分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)阳性对照组和阿巴西普低、中、高剂量组,每组各10只.除正常组外对其余5组小鼠通过胶原诱导建立CIA模型.CIA造模完成后,按成人常规临床剂量换算小鼠等效剂量给药.MTX阳性对照组灌胃给药MTX片,1次/周.阿巴西普低、中、高剂量组分别腹腔注射阿巴西普注射液25、50、100 mg/kg,200 μL,1次/周.正常组和CIA模型组腹腔注射0.9％氯化钠溶液,200 μL,1次/周.比较各组小鼠关节炎指数评分;采用HE染色法观察踝关节滑膜组织形态和炎症细胞浸润程度;采用免疫组化法检测踝关节TNF-α、骨桥蛋白(OPN)、NF-κB和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平;采用ELISA法检测各组血清TNF-α、IL-6及基质金属蛋白酶(MMP)水平.结果 与正常组比较,造模后,各组小鼠踝关节肿胀,活动度严重受限,关节炎指数评分升高;踝关节可见滑膜增生和明显的炎性浸润,TNF-α、OPN、NF-κB和RANKL表达均升高;血清IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9水平均升高(均P＜0.01).与CIA模型组相比,MTX阳性对照组和阿巴西普中、高剂量组小鼠踝关节肿胀减轻,关节炎指数评分均降低(均P＜0.05);踝关节滑膜增生和炎症浸润均明显减少,TNF-α、OPN、NF-κB、RANKL表达均降低;血清IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9表达水平均降低(均P＜0.01).结论 阿巴西普可以显著减轻CIA小鼠关节炎症反应,抑制滑膜增生和骨破坏.

目的 复制小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型、胶原诱导性关节炎联合一次性气管滴注博来霉素诱导肺纤维化(collagen-induced arthritis combined with bleomycin-induced pulmonary fibrosis model,CIA-BLM)复合模型,并进行两种动物模型的肺间质病变评价.方法 15 只DBA-1 小鼠随机分为空白组(NC)、模型组(CIA)、复合模型组(CIA-BLM),每组5 只.采用足趾肿胀度、关节炎指数(arthritis index,AI)评分、HE染色、马松(Masson)染色、关节及肺部影像学、肺功能等指标对模型进行评价.结果 与NC组比较,CIA、CIA-BLM组小鼠体质量、足趾肿胀度、AI评分均下降(P<0.01).相比NC组,CIA组及CIA-BLM组小鼠组织病理学均显示肺组织结构异常,肺泡壁增厚,炎性细胞浸润,CIA-BLM组较CIA组小鼠有明显蓝色胶原纤维沉积.微计算机断层扫描技术(micro-computed tomography,Micro-CT)示两个模型组小鼠关节破坏均严重.CIA组小鼠肺部影像学示局部磨玻璃样表现,CIA-BLM组小鼠以絮状影、网格状阴影、支气管牵拉扩张为主要表现.两个模型组小鼠均有肺功能下降.结论 CIA模型和CIA-BLM模型均有关节破坏特点和肺纤维化特征,根据组织病理学、影像学、肺功能检测结果,CIA-BLM模型肺纤维化特征更明显.

目的 探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制.方法 通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激.加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组.在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标.结果 与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P＜0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P＜0.01).与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P＜0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状.与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低.结论 穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用.

目的 探讨CD300c-Ig对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritish,CIA)小鼠关节损伤的影响及作用机制.方法 分别在第 1 天及第 21 天免疫DBA/1J 小鼠,构建CIA模型,随机分为处理组和对照组,每组 10 只.处理组腹腔注射 20 μg CD300c-Ig 100 μL,1 次/3d,共 6 次,总剂量为 120 μg;对照组则腹腔注射相同质量的对照Ig蛋白(control-Ig),1 次/3d,共 6 次.观察四肢关节肿胀程度,记录关节炎指数评分;DBA/1J小鼠初次免疫 40d后,取小鼠脾脏制成单细胞悬液,流式细胞术检测调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)、辅助性T细胞(T helper cells,Th17)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的表达;取小鼠下肢,脱钙,制成切片进行苏木精-伊红染色及番红O染色,观察小鼠关节病理特征并进行评分.采用荧光定量PCR法检测叉头框蛋白P3(forkhead box protein P3,Foxp3)、白介素-17(interleukin-17,IL-17)和白介素-23(interleukin-23,IL-23)的mRNA表达.结果 处理组关节肿胀程度较对照组减轻,关节炎指数与对照组相比明显降低;苏木精-伊红染色及番红O染色显示,处理组关节滑膜细胞增殖较对照组减轻、血管翳形成、骨质侵蚀情况均比对照组有明显改善(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,处理组脾脏Th17 细胞比例较对照组明显降低(P<0.05),Treg细胞比例较对照组明显升高(P<0.05);同时,处理组脾脏TNF-α、IFN-γ表达与对照组相比明显降低(P<0.05);荧光定量PCR结果显示,处理组IL-17 和IL-23 mRNA表达水平明显低于对照组.结论 CD300c-Ig可减轻CIA小鼠的关节损伤,其机制与其对Th17/Treg 细胞平衡的调控和抑制炎性因子的释放有关.

目的:探究石斛多糖(Dendrobium sonia polysaccharide,DSP)对关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型小鼠的保护作用及其与氧化应激的关系.方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、CIA组、L-DSP组、M-DSP组、H-DSP组.使用低、中、高浓度的DSP处理CIA模型小鼠.HE染色观察各组小鼠后肢组织病理改变,ELISA检测血清TNF-α、PGE2、4-HNE水平,生化检测踝关节组织GSH、GSSG和NADP+/NADPH水平,Western blot检测右肢踝关节组织IDH2蛋白表达水平.结果:相比对照组,CIA组小鼠后肢肿胀明显,滑膜增生、淋巴细胞浸润明显,TNF-α、PGE2、4-HNE、GSSG、NADP+/NADPH 水平升高(P＜0.05),GSH和IDH2 mRNA和蛋白水平降低(P＜0.05);相比CIA组,DSP组小鼠后肢肿胀减轻,滑膜增生、淋巴细胞浸润减少,TNF-α、PGE2、4-HNE、GSSG、NADP+/NADPH水平降低(P＜0.05),GSH和IDH2 mRNA和蛋白水平升高(P＜0.05),且均呈DSP剂量依赖性.结论:DSP可通过减少氧化应激反应减轻CIA小鼠的关节肿胀程度和炎症反应.