目的:探讨神经肽P物质(substance P，SP)活化NK92-MI细胞脱颗粒作用，分析差异表达circRNA调控NK92-MI细胞可能的机制。方法:将培养后的NK92-MI细胞分为空白对照组、SP刺激组和NK-1受体拮抗剂(neurokinin-1 receptor antagonist，NK-1RA)组。荧光定量PCR(real-time quantification PCR，qRT-PCR)法检测并分析NK92-MI细胞经SP刺激后穿孔素mRNA表达的时间效应，流式细胞术检测NK92-MI细胞脱颗粒标志物CD107a的表达，高通量测序技术分析circRNA表达谱，qRT-PCR法验证差异倍数最大的circZNF609和circAMBRA1的表达。生物信息学分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的微小RNA(microRNA，miRNA)，并分析circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA表达的相关性。结果:刺激12 h后，SP刺激组穿孔素mRNA表达较对照组升高约2.06倍，刺激24 h后，穿孔素mRNA表达继续升高，约为对照组3.65倍，差异均具有统计学意义( t值分别为4.00、4.72， P值均<0.05)；在12 h时，NK-1RA组穿孔素mRNA的表达高于对照组，差异具有统计学意义( t＝2.39， P<0.05)，但在24 h时，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。与静息NK92-MI细胞组相比，K562刺激组、K562+SP组、K562+SP+NK-1RA组中NK92-MI细胞CD107a的表达显著升高{(0.81±0.38)%比[(9.59±2.52)%，(17.78±1.94)%，(10.19±2.04)%]， t值分别为6.27、12.19、7.83， P值均<0.05}。SP作用NK92-MI细胞后共有9个差异表达的circRNAs：circZNF609、circAMBRA1、circCAMSAP1、circAAGAB、circLMBR1、circGNB1、circBPTF、circGPI和circCSNK1G3。NK-1RA可以阻断除circCSNK1G3外的上述8个circRNAs的表达。qRT-PCR验证circZNF609和circAMBRA1的表达与测序结果一致。生物信息学预测，circZNF609、circAMBRA1与穿孔素相关的miRNAs为miR-149-5p、miR-940和miR-942-5p。circZNF609、circAMBRA1与穿孔素mRNA的表达均呈负相关( r值分别为-0.57、-0.74， P值均<0.05)。 结论:SP可以通过与NK-1R结合活化NK92-MI细胞，下调circZNF609和circAMBRA1的表达，上调穿孔素mRNA的表达，促进NK92-MI细胞脱颗粒增强其杀伤功能。

目的 探究CircCSNK1G1调节miR-381-3p/S期激酶相关蛋白2(Skp2)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响.方法 将 HGC-27 细胞分为未转染组、si-NC 组、si-CircCSNK1G1 组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-NC 组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-381-3p 组.qRT-PCR 分别检测 GC 肿瘤组织和 GC 不同细胞系中 CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2 mRNA 的表达;MTT法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室法测定细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;双荧光素酶实验验证CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2三者的靶向关系.结果 与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,GC肿瘤组织和GC细胞系中的CircCSNK1G1、Skp2 mRNA高表达,miR-381-3p低表达(P＜0.05),且HGC-27细胞中miR-381-3p表达水平最低,CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达最高,因此后续选用HGC-27细胞并敲低CircCSNK1G1进行实验.与未转染组和si-CircCSNK1G1-NC组相比,转染si-CircCSNK1G1能够降低HGC-27细胞中CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达、细胞增殖活性、细胞迁移数以及Vimentin蛋白表达(P＜0.05),提高miR-381-3p的表达、细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达(P＜0.05).双荧光素酶实验验证了 CircCSNK1G1、Skp2均与miR-381-3p存在靶向关系,而且CircCSNK1G1可作为miR-381-3p的海绵RNA,进一步调节Skp2的表达和活性.结论 敲低CircCSNK1G1能够靶向上调miR-381-3p表达,抑制Skp2表达,进而促进GC细胞凋亡,抑制其增殖和迁移.

目的:探讨CircCSNK1G1 调节miR-381-3p/溴结构域蛋白4(BRD4)轴对喉癌(laryngeal cancer,LC)细胞恶性生物学行为的影响.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、western blot分别检测 60 例LC患者癌组织、癌旁组织及喉上皮细胞NP69 及人LC细胞Hep-2、Tu212、M4E中CircCSNK1G1、miR-381-3p、BRD4 蛋白表达;将人喉癌 Hep-2 细胞分为:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-CircCSNK1G1 组(转染si-CircCSNK1G1)、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组(si-CircCSNK1G1 和inhibi-tor-NC共转染)、si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组(si-CircCSNK1G1 和miR-381-3p inhibi-tor共转染);RT-qPCR检测Hep-2 细胞中CircCSNK1G1、miR-381-3p的表达水平;MTT法检测Hep-2细胞增殖;划痕实验检测Hep-2 细胞迁移;Transwell小室检测Hep-2 细胞侵袭;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡;western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及BRD4 蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证CircCSNK1G1 和miR-381-3p、miR-381-3p和BRD4 的关系.结果:在LC组织和LC细胞中,CircCSNK1G1、BRD4 蛋白高表达,miR-381-3p低表达,且在Hep-2 细胞中CircCSNK1G1、BRD4 蛋白水平最高,miR-381-3p表达最低(P＜0.05),因此,选择Hep-2 细胞进行转染;与control组、si-NC组比较,si-CircCSNK1G1 组Hep-2 细胞中CircCSNK1G1 表达、OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4 蛋白表达显著降低,miR-381-3p、凋亡率、Bax 蛋白表达显著升高(P＜0.05);与si-CircCSNK1G1 组、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组比较,si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组Hep-2 细胞中OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4 蛋白表达显著升高,miR-381-3p、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P＜0.05);CircCSNK1G1 靶向调控miR-381-3p表达,miR-381-3p靶向负调控BRD4 表达.结论:敲低CircCSNK1G1 可能通过靶向miR-381-3p来下调BRD4 表达,进而抑制Hep-2 细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡.