目的 建立NMM肿瘤DNA疫苗原液中乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA-2Na)残留量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并进行验证,用于DNA疫苗质量控制.方法 将NMM肿瘤DNA疫苗原液与硫酸铜络合后,建立EDTA-2Na残留量HPLC检测方法:色谱柱为Agilent ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相为水-10％四丁基氢氧化铵-乙腈溶液(74.5∶0.5∶25);检测波长为254 nm;流速为0.8 mL/min;柱温为20 ℃;进样量为20 μL.对方法的专属性、线性范围、检测限及定量限、溶液稳定性、耐用性、准确度、精密度进行验证.用建立的方法对多批次DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量进行检测.结果 EDTA-2Na对照品及加入EDTA-2Na的DNA疫苗原液与硫酸铜反应后,在5.3 min附近出现吸收峰,而DNA疫苗原液与硫酸铜反应后未见吸收峰;对照品在4～400μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,R2=0.999 9;该方法检测限为10 ng/mL,定量限为40 ng/mL;对照品及供试品溶液放置12 h,溶液稳定性良好;方法检测条件发生微小变动时(不同流动相比例、不同流速、不同柱温),对检测结果的影响在可接受范围内;低、中、高浓度加标样品EDTA-2Na回收率均值为101.38％,RSD为0.39％;0.1mg/mL对照品溶液连续进样6次,峰面积RSD为0.04％,6份供试品溶液均未检出EDTA-2Na,含EDTA-2Na的供试品溶液峰面积RSD为0.02％,中间精密度良好.多批次DNA疫苗原液均未检测出EDTA-2Na残留.结论 建立的方法操作简便,准确可靠,专属性强,可用于DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量检测.

目的:建立依地酸二钠(EDTA-2Na)中残留甲醛的测定方法.方法:采用顶空气相色谱法测定.Agilent DB-WAX气相毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.5 μm),分流进样,分流比为2: 1;载气为N2,流速为1.0 ml·min-1;检测器为FID;进样口温度为230℃,检测器温度为260℃;采用程序升温法:起始温度40℃,保持6 min,再以40℃·min-1速率升温到230℃后,维持10 min;进样量为1 μl.分别取对照品溶液和供试品溶液,95℃加热平衡25 min,顶空进样,按外标法以峰面积计算含量.结果:甲醛标准溶液在5.10~102.00 μg·ml-1浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为84.60%(RSD=3.82%,n=9).结论:本方法简单、快速、准确,可以用于依地酸二钠中甲醛残留量的测定.

目的 建立检测甲型肝炎(hepatitis A,HA)灭活疫苗(MRC-5细胞)中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的HPLC 法,并进行验证.方法 色谱条件:选用反相色谱柱;流动相为水相-有机相,水相为四丁基氢氧化铵的磷酸盐溶液,有机相为乙腈;流速为1.0 mL/min;检测波长为257 nm;进样量为20 μL;柱温为30℃;保留时间为10 min.筛选色谱柱并优化流动相条件(水相与有机相的比例、pH 及磷酸盐).验证方法的适用性、专属性、线性范围、准确度、精密度、耐用性、定量限和检测限.采用该方法检测3 批HA灭活疫苗原液供试品中EDTA-2Na残留量.结果 最适色谱条件:采用美国Thermo公司的C18色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5 μm),水相与有机相比例为9:1,pH为2.4,磷酸盐为0.01 mol/L磷酸二氢铵.EDTA-2Na对照品色谱峰的理论塔板数大于10 000,分离度大于1.5;仅对照品有色谱峰,且无其他色谱峰干扰;对照品在0.2～20 μg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y = 20 482.18X+0.512 6,R2 = 0.999 9;准确性验证中,浓度为2、5、10 μg/mL 的加标样品平均回收率分别为97.44％、100.6％及100.4％,RSD为1.6％;5 μg/mL的加标样品重复性及中间精密度的RSD分别为1.4％和1.6％;定量限及检测限分别为0.2 和0.05 μg/mL;不同pH(2.0、2.4、3.0)流动相的色谱峰面积的RSD 分别为0.24％、0.31％及0.18％,相对误差(RE)分别为99.25％、99.12％及99.33％.3批供试品均未检出EDTA-2Na.结论 成功建立了检测HA灭活疫苗中EDTA-2Na残留量的HPLC 法,该方法具有良好的专属性、线性范围、准确度、精密度及耐用性,为HA 灭活疫苗的质量控制研究奠定了基础.

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定蔬菜、水果中4种乙撑二硫代氨基甲酸酯类农药残留量的方法.方法 试样采用L-半胱氨酸盐酸盐和碱性EDTA-Na2溶液进行提取,碘甲烷衍生,QuEChERS原理净化浓缩,UPLC-MS/MS对乙撑二硫代氨基甲酸酯类农药衍生物进行测定,外标法定量.结果 水果的检出限为5μg/kg,蔬菜的检出限为10μg/kg,相关系数大于0.998,添加回收率的范围为82.3％～115.1％,相对标准偏差为2.3％～6.9％.结论 本文所建立的方法能够满足多种水果和蔬菜中乙撑二硫代氨基甲酸酯类农药快速准确检测.