目的:观察沉默胚胎致死性异常视觉1(embryonic lethal abnormal visionlike 1,ELAVL1)基因表达对前列腺癌PC-3细胞生长的影响,并探讨可能的分子作用机制.方法:分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法、免疫组织化学法及免疫荧光法检测前列腺癌PC-3和正常前列腺上皮RWPE-1细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平并定位.将携带有特异性针对ELA VL1基因-shRNA (shELAVL1)的重组腺病毒Ad5-shELAVL1-GFP感染PC-3细胞以沉默ELAVL1基因的表达,同时以腺病毒空载体Ad5-GFP感染PC-3细胞作为对照组.通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,FCM检测细胞周期,蛋白质印迹法检测PC-3细胞中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)和磷酸化-AKT (phospho-Akt,p-AKT)蛋白的表达水平.建立PC-3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予瘤内注射Ad5-shELAVL1-GFP、Ad5-GFP(对照组)及0.9％氯化钠溶液(空白对照组),观察移植瘤的生长情况.结果:PC-3细胞中ELAVL1 mRNA和蛋白的表达水平均高于RWPE-1细胞(P值均＜ 0.001);ELAVL1蛋白在PC-3细胞中主要表达于细胞质中,在RWPE-1细胞中则主要表达于细胞核中.沉默ELAVL1基因表达后,与对照组相比,PC-3细胞的增殖能力明显下降,G1期细胞所占百分比明显提高,而G2期细胞所占百分比明显减少(P值均＜0.05);同时,与细胞增殖有关的分子cyclin D1和Cox-2蛋白的表达水平明显降低,PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及p-AKT的蛋白表达也明显下调(P值均＜0.05).与对照组相比,裸鼠移植瘤在经过Ad5-shELAVL1-GFP处理后移植瘤的生长减缓,移植瘤的体积和质量明显减小(P值均＜0.05).结论:ELAVL1蛋白在前列腺癌PC-3细胞中高表达且主要表达于细胞质中;ELAVL1蛋白可能通过PI3K/AKT经典肿瘤信号通路对前列腺癌细胞的生长起着促进作用.

目的:利用生物信息学方法构建融合基因在横纹肌肉瘤(RMS)发病机制中潜在的miRNA-mRNA调控网络,为研究RMS提供新方向.方法:采用GEO2R分析工具筛选融合基因阳性和阴性RMS组织差异表达基因(DEGs)和差异表达miRNA;预测差异表达miRNA的靶基因,重叠DEGs和靶基因筛选出目标基因;采用DAVID数据库对目标基因进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.采用STRING和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络、筛选Top10核心基因(hub基因)并构建hub基因与miRNA的分子调控网络,通过Kaplan-Meier生存曲线,分析Top10 hub基因与肉瘤患者预后的关系.结果:筛选出891个DEGs(P<0.01,|logFC|≥1)和14个差异表达miRNA(P<0.05,|logFC|≥3),预测出差异表达miRNA的靶基因1654个,将靶基因与DEGs重叠共获得115个目标基因.GO功能富集分析,目标基因主要富集在细胞增殖的正向调节、细胞表面和蛋白结合等生物学过程;KEGG信号通路分析,目标基因主要富集在细胞外基质-受体相互作用和癌症中蛋白聚糖等通路.PPI网络中筛出的Top10 hub基因为表皮生长因子受体4(ERBB4)、受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶D(PTPRD)、胰岛素受体底物1(IRS1)、整合素金属蛋白酶10(ADAM10)、Yes相关蛋白1(yes YAP1)、转录因子AP-2A(TFAP2A)、细胞黏附分子1(CADM1)、ELAV类似RNA结合蛋白2(ELAVL2)、锌指转录因子1(SNAI1)和ERBB受体反馈抑制剂1(ERRFI1).生存分析,肉瘤组织中PTPRD(HR=1.79,P=0.005)、ADAM10(HR=1.94,P=0.010)、ELAVL2(HR=1.56,P=0.031)和ERRFI1(HR=2.05,P=0.005)表达水平升高与肉瘤患者的不良预后有关.结论:本研究筛选出参与RMS发病机制的hub基因和对应的miRNA,构成了miRNA-mRNA网络,为深入研究融合基因与RMS的关系提供了理论依据.