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细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的诱导表达及3D结构预测
编辑人员丨2023/8/5
目的 探索重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162最佳的表达条件,大量诱导及鉴定蛋白质,并预测重组蛋白质的三维结构模型.方法 将原核重组质粒pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162转化至E.coli.BL21 (DE)菌株中,在不同条件下诱导重组蛋白进行表达,SDS-PAGE分析上清及沉淀中重组蛋白表达并用Western blot鉴定.I-TASSER在线预测重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的三维结构.结果 可溶性重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162在异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)(终浓度0.2 mmol/L),28℃ 4h诱导条件下表达量较高;包涵体中的重组蛋白在IPTG(终浓度0.8 mmol/L),28℃ 2h并37℃ 2h诱导条件下表达量最高.Western blot鉴定该蛋白的相对分子量约为32×103,与预期相符.利用I-TASSER在线预测重组蛋白质HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的3D结构模型,结果显示相邻的蛋白CTLA-4IgV与蛋白EgG1Y162能抵抗空间位阻的影响进行正常折叠.结论 探索出重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的最佳诱导表达条件并对重组蛋白成功鉴定,根据预测的重组蛋白3D结构验证选用linker序列"GTDDDDKAMADIGSEF"能使其前后相邻的两个蛋白独立正常折叠,为进一步深入研究细粒棘球蚴重组疫苗创造了条件.
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编辑人员丨2023/8/5
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细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2诱导表达条件探索
编辑人员丨2022/6/18
目的 探索细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的最佳诱导表达条件,并对其蛋白结构进行预测.方法 构建pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组质粒,将其转化至Ecoli.BL21(DE3)细菌中,选择不同的时间段和温度,用不同浓度的IPTG进行诱导蛋白表达.将得到的菌液通过超声破碎,经离心后用SDS-PAGE分别分析上清和沉淀中重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2的表达情况.Western Blot鉴定重组蛋白表达.鉴定成功后进行大量诱导表达.采用生物信息学的方法,使用在线软件SWISS MODEL对HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白三维结构进行预测.结果 HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白在28℃条件下,诱导4 h,IPTG的浓度为0.2 mmol/L时可溶性蛋白表达量达到最大.蛋白的相对分子量约为29kD,结果与预期相符.其蛋白三维结构的预测与2×44.1.A结构的相似程度为78.13％.结论 探索出HIS-4IgV-EgG1Y162-2重组蛋白最佳诱导表达条件,并成功预测出其蛋白的三维结构模型,为细粒棘球蚴重组疫苗的进一步研究创造条件.
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编辑人员丨2022/6/18
