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三角帆蚌Dmrta2-2基因的鉴定与表达分析
编辑人员丨2023/8/5
为了研究DMRT 基因家族中Dmrta2-2(Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor a2-2)基因在淡水蚌的性腺发育和性别分化等过程在发挥的作用,本研究从本实验室已有的三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)cDNA库中筛选出Dmrta2-2(HcDmrta2-2)短片段,利用RACE技术扩增和鉴定出了HcDmrta2-2基因.获得核苷酸序列全长为1 682 bp(登录号:MK372348),ORF(Open reading frame)区为1 170 bp,编码389个氨基酸.NCBI在线预测该基因保守位点,发现存在一个超保守的DM和DMA区域,氨基酸序列比对及系统发育树表明三角帆蚌与池碟蚌(Hyriopsisschlegelii)亲缘关系高达90％,在进化树中聚为一小支.通过实时荧光定量(qRT-PCR)和原位杂交检测HcDmrta2-2基因在各组织和发育时期的表达水平,发现该基因在成熟蚌的鳃、肝、肾、外套膜、闭壳肌、斧足及性腺中均表达,除了肝,其它各组织中雌雄表达差异均显著(p＜0.05),雌性性腺表达明显高于雄性;早期表达显示在第3天和3月龄表达量显著高于其它时期,推测HcDmrta2-2参与了三角帆蚌早期胚胎和幼龄发育过程;1～3龄雌雄性腺定量显示在1龄表达水平最高且雌雄差异极显著,而后随着时间雌雄各表达量逐级递减.原位杂交结果显示雌性性腺中有明显信号产生,在雄性中较弱.研究推测三角帆蚌HcDmrta2-2基因可能参与了早期幼龄发育过程,且对卵巢的分化起到重要作用,同时可能对于精巢的维持发挥着一定作用.本研究结果为进一步开展三角帆蚌HcDmrta2-2基因的功能特性研究提供了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
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淡水贝类:三角帆蚌(Hyriopsis cumingii) Dmrta2-1基因全长cDNA的克隆与表达分析
编辑人员丨2023/8/5
Dmrt (Doble-sex and mab-3 relatated transcription)基因家族是一系列广泛存在动物界的发育转录因子,参与生物体性别决定与分化、早期胚胎发育及器官组织功能稳定的维持等过程.本研究克隆和鉴别了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)中Dmrt家族的亚族Dmrta的基因,与Dmrta2同源性很高,将其命名为HcDmrta2-1.该基因全长1 723 bp(登录号:MK372349),开放阅读框1 158 bp,编码385个氨基酸,5'非编码区为237 bp,3'非编码区为328 bp.预测理论等电点/蛋白相对分子量为4.97/143 293.27,不含信号肽或跨膜结构,存在1个DM保守结构域和1个DMA保守基序.采用荧光定量和原位杂交技术鉴定该基因在各组织及发育不同时期性腺中的表达及定位分析.结果 表明,HcDmrta2-1基因在2龄成熟蚌的性腺、鳃、肝脏、肾脏、外套膜、闭壳肌及斧足中均表达,除了肝脏,其它各组织中雌雄表达差异表现为极显著(p＜0.01),其中雌性性腺表达明显高于雄性;早期不同发育阶段的性腺表达在1月龄出现最高值,8月龄表达量次之,推测HcDmrta2-1参与了三角帆蚌幼龄性腺发育过程.2龄性腺组织原位杂交结果表明在雌雄个体中均检测到染色信号,且在雌性中很强,雄性中较弱.由此推测HcDmrta2-1基因参与了三角帆蚌幼龄发育和分化过程,且对雌蚌性腺的分化和成熟雄蚌性腺的功能维持起到重要作用.本研究对探讨淡水贝类中Dmrt家族的保守性及其性别决定机制和功能探索具有借鉴意义,为农业生产和人工养殖提供理论指导.
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编辑人员丨2023/8/5
