研究珠子参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的影响及作用机制.将雄性昆明小鼠随机分为空白组、TSPJ组(200 mg·kg-1,ig)、模型组、APAP+TSPJ低剂量组(50 mg·kg-1,ig)、APAP+TSPJ中剂量组(100 mg·kg-1,ig)、APAP+TSPJ高剂量组(200 mg·kg-1,ig)和APAP+N-乙酰半胱氨酸组(200 mg·kg-1,ip).给药组每天ig或ip相应的药物,每天1 次,连续14 d.末次给药1 h后,除空白组和TSPJ组外,各组小鼠均灌胃给予 500 mg·kg-1 APAP,24 h 后收集小鼠血清与肝脏组织进行血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrans-ferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2、IL-6、IL-4、IL-10 及肝组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的水平,苏木精-伊红染色观察肝组织形态学改变;实时定量PCR法测定肝组织中淋巴细胞抗原 6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、半乳糖凝集素 3(galectin 3,Mac-2)、TNF-α、IL-1β、COX-2、IL-6、IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot法测定肝组织中Ly6G、Mac-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)、COX-2、核因子κB抑制因子α(inhibitor of nu-clear factor κB protein α,IκBα)、磷酸化核因子 κB 抑制因子 α(phosphorylated inhibitor of nuclear factor κB protein α,p-IκBα)、胞浆和胞核中核因子κB亚基p65(nuclear factor κB subunit p65,NF-κB p65)蛋白表达.结果显示,TSPJ可显著降低APAP诱导小鼠肝脏系数、血清中ALT、AST、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2 水平及肝组织LDH、MPO、MDA水平和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高血清中IL-4、IL-10 含量及肝组织中GSH、CAT、SOD、T-AOC水平和肝组织中IL-4、IL-10 mRNA表达;改善肝脏病理损伤程度,抑制肝组织中性粒细胞浸润和巨噬细胞募集;降低肝组织中中性粒细胞标记物Ly6G、巨噬细胞标记物Mac-2 和COX-2 mRNA和蛋白表达,降低p-ERK、p-IκBα、胞核NF-κB p65 蛋白表达和p-ERK/ERK、p-IκBα/IκBα比率,升高胞浆NF-κB p65 蛋白表达.以上结果表明,TSPJ对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著保护作用、可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制与抑制ERK/NF-κB/COX-2 信号通路激活,进而抑制炎性细胞浸润、炎症因子生成和抑制肝细胞损伤密切相关.

目的 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶14(GalNAc-T14)在胞内高表达促进多形性胶质母细胞瘤凋亡的机制.方法 培养多形性胶质母细胞瘤U87MG细胞株,构建的pcDNA3.1-T14质粒转染U87MG细胞,分为未处理组(Control组)、转染pcDNA3.1(+)空载体组(NC1组)、转染pcDNA3.1-T14组(T组),采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测GalNAc-T14、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表达、ERK1/2的磷酸化水平;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况.应用SPSS 13.0统计软件分析,计量资料均值±标准差(Mean±SD)表示.结果 质粒转染前GalNAc-T14、ERK1/2、bcl-XL相对表达量为1,在U87MG细胞内高表达GalNAc-T14相对量为(15 393.43±30.35).qPCR显示ERK1、ERK2、bcl-XL的mRNA相对表达量:NC1组为(0.98 ±0.12)、(0.91±0.05)、(0.89±0.11),T组为(0.74±0.29)、(0.68±0.31)、(0.68 ±0.23),T组ERK1/2与抗凋亡蛋白bcl-XL的基因表达水平较对照组下降;Western blot分析显示:Control组、NC1组、T组ERK1/2的灰度值分别为(85.42 ±3.11、86.25±4.25、66.36±4.25),抗凋亡蛋白bcl-XL的灰度值为(82.57±3.71、79.52±3.78、46.85±4.52).通过Annexin V-FITC/PI双染色的方法,在流式细胞仪上检测细胞凋亡显示高表达GalNAc-T14时U87MG细胞株早期凋亡与晚期凋亡的百分数分别为(7.74±1.23)％、(10.08 ±2.41)％,高于对照组(1.12±0.18)％、(0.51±0.14)％及NC1组(1.37±0.12)％、(0.90±0.08)％,差异有统计学意义(t=3.417,P＜0.05).结论 GalNAc-T14通过抑制ERK1/2及bcl-XL的表达促进多形性胶质母细胞瘤细胞的凋亡.