探究珠子参总皂苷对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡和自噬的影响.利用紫外-可见分光光度计检测珠子参总皂苷中皂苷的含量;分别运用CCK-8、DAPI染色法及流式细胞术检测珠子参总皂苷对HeLa细胞活力、细胞核形态变化、细胞周期与凋亡的影响;Western blot技术检测HeLa细胞中凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白-9(cleaved caspase-9)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白-3(cleaved caspase-3),自噬相关蛋白苄氯素1(Beclin-1)和SQSTM1(p62),磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响.研究发现,珠子参总皂苷的得出率、皂苷质量分数分别为6.3％、78.3％;珠子参总皂苷可显著抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.001),影响HeLa细胞核形态,阻滞HeLa细胞G0/G1期周期,诱导细胞凋亡,且呈现一定的浓度依赖性.进一步发现珠子参总皂苷可上调促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3和自噬相关蛋白p62的表达(P＜0.05),下调抗凋亡蛋白Bcl-2和自噬相关蛋白Beclin-1的表达(P＜0.01),促进p-p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK,简称 p38)/p38、p-c-Jun 氨基末端激酶(JNK)/JNK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 水平(P＜0.05),对p-ERK/ERK影响不显著.结果表明,珠子参总皂苷可能通过激活PI3K/Akt/mTOR、JNK和p38信号通路,抑制HeLa细胞自噬,促进其细胞凋亡,表明了珠子参可能具有抗宫颈癌的潜在作用.

珠子参叶是五加科(Araliaca)植物珠子参(Panax japonicas var.major)的干燥带梗叶,为秦巴地区特色中药材.为合理开发利用珠子参叶并阐明其化学成分,该研究利用HPLC方法分析珠子参叶皂苷部位的主要化学成分,测定珠子参叶皂苷部位的脂肪酶抑制活性及抑制类型,通过分子对接及动物实验验证脂肪酶抑制机制及降血脂作用.结果表明:(1)珠子参叶皂苷部位主要成分为20(S)-人参皂苷Rg2、20(R)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rh2.(2)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷 Rg2对脂肪酶具有较强的抑制作用,其IC50分别为 0.14、2.30 μmol·L-1.(3)珠子参叶皂苷部位、20(R)-人参皂苷Rg2、人参皂苷 Rb3 对脂肪酶的抑制为可逆性抑制,抑制类型为非竞争型抑制.(4)配体与ARG337B、ASP331B、ILE248B残基结合可能有助于提高配体的脂肪酶抑制活性.(5)珠子参叶总皂苷可以显著降低高脂血症小鼠血清中胆固醇和甘油三酯的含量.该研究为珠子参叶在降血脂方面的深入开发和利用提供了理论参考.

研究珠子参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的影响及作用机制.将雄性昆明小鼠随机分为空白组、TSPJ组(200 mg·kg-1,ig)、模型组、APAP+TSPJ低剂量组(50 mg·kg-1,ig)、APAP+TSPJ中剂量组(100 mg·kg-1,ig)、APAP+TSPJ高剂量组(200 mg·kg-1,ig)和APAP+N-乙酰半胱氨酸组(200 mg·kg-1,ip).给药组每天ig或ip相应的药物,每天1 次,连续14 d.末次给药1 h后,除空白组和TSPJ组外,各组小鼠均灌胃给予 500 mg·kg-1 APAP,24 h 后收集小鼠血清与肝脏组织进行血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrans-ferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2、IL-6、IL-4、IL-10 及肝组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的水平,苏木精-伊红染色观察肝组织形态学改变;实时定量PCR法测定肝组织中淋巴细胞抗原 6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、半乳糖凝集素 3(galectin 3,Mac-2)、TNF-α、IL-1β、COX-2、IL-6、IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot法测定肝组织中Ly6G、Mac-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)、COX-2、核因子κB抑制因子α(inhibitor of nu-clear factor κB protein α,IκBα)、磷酸化核因子 κB 抑制因子 α(phosphorylated inhibitor of nuclear factor κB protein α,p-IκBα)、胞浆和胞核中核因子κB亚基p65(nuclear factor κB subunit p65,NF-κB p65)蛋白表达.结果显示,TSPJ可显著降低APAP诱导小鼠肝脏系数、血清中ALT、AST、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2 水平及肝组织LDH、MPO、MDA水平和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高血清中IL-4、IL-10 含量及肝组织中GSH、CAT、SOD、T-AOC水平和肝组织中IL-4、IL-10 mRNA表达;改善肝脏病理损伤程度,抑制肝组织中性粒细胞浸润和巨噬细胞募集;降低肝组织中中性粒细胞标记物Ly6G、巨噬细胞标记物Mac-2 和COX-2 mRNA和蛋白表达,降低p-ERK、p-IκBα、胞核NF-κB p65 蛋白表达和p-ERK/ERK、p-IκBα/IκBα比率,升高胞浆NF-κB p65 蛋白表达.以上结果表明,TSPJ对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著保护作用、可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制与抑制ERK/NF-κB/COX-2 信号通路激活,进而抑制炎性细胞浸润、炎症因子生成和抑制肝细胞损伤密切相关.

该研究以珠子参愈伤组织为材料,通过同源克隆方法获得了珠子参3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因(PjHMGR,登录号:MG712296)的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析.基于PjHMGR序列构建了珠子参过表达载体pCAMBIA2300s-PjH MGR,通过根瘤农杆菌转化法将其转化到珠子参细胞中,成功获得7株阳性转PjHMGR基因细胞系;通过实时荧光定量PCR、比色法及皂化法等技术测定阳性细胞系PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活、皂苷和植物甾醇含量变化.结果显示:(1)与野生型珠子参细胞系相比,转PjHMGR基因珠子参阳性细胞系中,PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活和皂苷含量均有不同程度的提高;在效果最好的阳性细胞中,PjHMGR基因的相对表达量、HMGR酶活和皂苷含量分别为对照的7.15、6.14和3.50倍.(2)在研究过程中,发现转基因细胞系的植物甾醇含量也有所升高.研究认为,将珠子参关键酶基因PjHMGR过表达载体导入珠子参愈伤组织细胞中,可引起相关关键酶基因相对表达量和PjHMGR酶活性的增加,从而调控珠子参总皂苷的合成,对皂苷合成途径中关键酶基因进行调控将可能实现对皂苷生物合成的调节.

为研究不同遮阴处理下皂苷合成关键酶表达对珠子参总皂苷合成与积累的影响,以全光照、30％遮阴和50％遮阴3种处理下的盆栽珠子参为材料,分别用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法测定了不同生长时期珠子参叶和根茎中3个关键酶基因(CAS,DS,β-AS)的表达和总皂苷含量.结果表明,在开花期CAS,DS,β-AS均在珠子参地上部分高表达,30％遮阴处理显著抑制了叶中CAS的表达而促进了茎,叶和花中DS,β-AS的表达,推测在此时期皂苷合成的主要部位为叶.整个生长周期内,DS,β-AS的表达与叶中总皂苷含量的变化均呈现出“低—高—低”的趋势,相关系数分析表明,两者之间为正相关关系.遮阴处理下DS,β-AS的总体表达水平和总皂苷含量远高于全光照处理,其中以30％遮阴处理对总皂苷积累的促进作用最明显.因此建议在人工栽培珠子参时,采取30％的遮阴处理,以利于珠子参皂苷的积累和品质的提升.

目的 探讨珠子参总皂苷对心肌缺血再灌注大鼠血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 40只SD大鼠随机分为模型组、假手术组及珠子参总皂苷高、中和低剂量组5组,各8只.各组按剂量灌胃给药7 d,末次给药后,结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,假手术组只穿线不结扎.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组大鼠血清MCP-1、MIF、TNF-α水平.结果 珠子参总皂苷能够降低心肌缺血再灌注大鼠血清MCP-1、MIF、TNF-α水平(P<0.05).结论 珠子参总皂苷预处理能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤炎症反应,其作用机制可能与其抑制MCP-1、MIF和TNF-α表达有关.

目的 优化珠子参总皂苷的超声-微波协同提取工艺.方法 以珠子参总皂苷得率为指标,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken响应面法对珠子参总皂苷的超声-微波协同提取工艺进行优化,并与超声提取、微波提取等方法进行比较.结果 珠子参总皂苷的最佳提取工艺为:微波功率为466 W,超声功率为359 W,提取时间为9 min,液料比为35 mL/g,珠子参总皂苷得率为(13.66±0.70)％,优于其它提取方法.结论 Box-Behnken效应面法优化提取珠子参总皂苷超声-微波协同提取方法具有提取率高、时间短、能耗低等特点,为珠子参总皂苷的进一步开发利用提供参考.

目的:探讨珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症因子表达的影响及可能机制.方法:体外培养大鼠星形胶质细胞,不同剂量(50,100,200μg·ml-1)的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的星形胶质细胞24 h、脂多糖处理转染miR-325-3p模拟物的星形胶质细胞24 h或200μg·ml-1的珠子参总皂苷作用于脂多糖诱导的的转染miR-325-3p抑制剂的星形胶质细胞24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved-caspase9)蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中微小RNA-325-3p(miR-325-3p)表达.结果:珠子参总皂苷可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌(P<0.05),促进miR-325-3p表达(P<0.05),且呈剂量依赖性.过表达miR-325-3p可降低脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡率、细胞中cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达及TNF-α和IL-6的分泌(P<0.05).敲减miR-325-3p逆转珠子参总皂苷对脂多糖诱导的星形胶质细胞凋亡及TNF-α和IL-6表达的抑制作用(P<0.05).结论:珠子参总皂苷可能通过上调miR-325-3p表达抑制脂多糖诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡和炎症反应.

目的 研究珠子参总皂苷的HPLC特征图谱研究,对其成分进行分离鉴定.方法 建立珠子参总皂苷提取物HPLC特征图谱.Ultimate LP-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1％磷酸,梯度洗脱;检测波长205 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样体积10μL.珠子参总皂苷提取物采用系统溶剂法、硅胶、制备液相进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 建立了珠子参总皂苷的HPLC特征图谱,显示16个共有峰,相对保留时间RSD<5.0％,鉴定5个共有成分.从中分离得到5个化合物,分别鉴定为竹节参皂苷-1(1)、人参皂苷Rk3(2)、齐墩果酸-3-O-[α-L-阿拉伯呋喃糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、人参皂苷Rb1(4)、人参皂苷Rc(5).结论 珠子参总皂苷HPLC特征图谱用于质量控制是可靠可行的,并为药效学研究提供依据.

目的 探讨珠子参总皂苷对人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症反应、凋亡的影响及其对miR-216a的调控作用.方法 采用HCMV感染MRC-5细胞建立病毒感染模型,不同浓度(100μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL)的珠子参总皂苷处理细胞,分别将miR-NC、miR-216a mimics转染至HCMV感染的MRC-5细胞,分别将anti-miR-NC、anti-miR-216a转染至HCMV感染的MRC-5细胞后加入珠子参总皂苷处理细胞;采用ELISA法检测TNF-α、IL-6水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测miR-216a表达量.结果珠子参总皂苷可降低HCMV感染的MRC-5细胞凋亡率及TNF-α、IL-6的水平(P＜0.05),而miR-216a的表达水平升高(P＜0.05);转染miR-216a mimics可降低凋亡率及TNF-α、IL-6的水平(P＜0.05);转染anti-miR-216a可降低珠子参总皂苷对HCMV感染的MRC-5细胞炎症反应及凋亡的作用.结论珠子参总皂苷可通过上调miR-216a的表达而抑制炎症反应及细胞凋亡从而减轻HCMV感染的MRC-5细胞损伤.