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骨肉瘤长链非编码RNA基因芯片检测及差异分析
编辑人员丨1周前
目的:采用长链非编码RNA(lncRNA)芯片检测在骨肉瘤与瘤旁组织中lncRNA表达谱，分析差异表达的lncRNA，探讨其功能。方法:利用lncRNA芯片筛查2010年至2012年期间广州市第一人民医院和南部战区总医院7对骨肉瘤组织与瘤旁组织中lncRNA表达谱，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证芯片结果；分层聚类和火山图分析特征性表达lncRNA，结合基因本体论数据库(GO)分析和通路分析探讨lncRNA参与肿瘤细胞的生物过程。使用Agilent Array平台对样品进行微阵列分析。Agilent Feature Extraction软件分析采集阵列图像。GeneSpring GX v11.5.1软件包进行分子标准化和随后数据处理。采用重复测量设计的方差分析评价各组之间的变化，多组间比较采用单因素方差分析。结果:筛选得到7组瘤组织中差异lncRNA总数为4 221个，其中上调的1 995个，下调的2 226个；RT-qPCR验证结果与lncRNA结果基本一致；分层聚类分析显示骨肉瘤组织(T)和瘤旁组织(C)中的lncRNA表达差异有统计学意义；GO分析显示lncRNA广泛参与细胞的生物过程，还参与细胞的细胞器组成。结论:lncRNA芯片能有效检测骨肉瘤组织差异性表达的lncRNA，结合分子生物学分析技术发现lncRNA参与骨肉瘤细胞多种生物活性过程。
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编辑人员丨1周前
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干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨干扰素(IFN)-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制.方法 采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U2OS细胞72 h,通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率,应用流式细胞术检测细胞周期停滞,通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53在mRNA水平的表达,通过小干扰RNA(siRNA)干扰沉默p53的表达,采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达.结果 药物处理72 h,IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为:(2.29±1.03)％、(23.85±3.09)％和(50.51±3.77)％,IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.008).在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变.足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为(19.68±3.62)％和(11.33±2.94)％,G2/M期细胞为(65.02±2.55)％和(76.09±2.87)％,两者组间差异有统计学意义(P=0.037).IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达,但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为:(55.72±3.88)％、(51.63±4.36)％和(36.40±3.95)％,p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.023),同时联合用药组的PARP裂解明显减弱.泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α+足叶乙甙组、足叶乙甙+Z-VAD-FMK组和IFN-α+足叶乙甙+ Z-VAD-FMK组的生长抑制率为(3.52±1.98)％、(27.11±4.06)％、(56.44±4.78)％、(21.37±3.55)％、(23.81±4.22)％.Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P =0.015),并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱.结论 IFN-α在人骨肉瘤U20S细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡,该作用依赖p53和Caspase.
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编辑人员丨2023/8/6
