当前检索词:“PGEX-4T-3/Myo5a”。为您检索到约 1 条结果
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基因片段Myo5a原核表达、纯化及多克隆抗体制备
编辑人员丨2023/11/25
目的:制备了PGEX-4T-3/Myo5a原核表达载体,并表达与纯化融合蛋白,制备其多克隆抗体.方法:通过PCR扩增Myo5a末端一个基因小片段,Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到原核载体pGEX-4T-3,制备原核表达载体PGEX-4T-3/Myo5a.鉴定后,在BL21菌中诱导表达蛋白并对重组蛋白进行纯化,重组蛋白PGEX-4T-3/Myo5a采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹进行鉴定.采用融合蛋白免疫家兔,制备其抗血清,测定抗血清效价和特异性.结果:经鉴定后原核表达载体PGEX-4T-3/Myo5a制备成功,表达的重组蛋白相对分子量约为30 kD.免疫家兔后抗血清滴度为1∶128 000,免疫印迹和间接免疫荧光证明其特异性.结论:实验成功制备了PGEX-4T-3/Myo5a原核表达载体,融合蛋白具备了较高的免疫反应性,并得到了其多克隆抗体,为进一步探讨Myo5a的生物学意义做了铺垫.
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编辑人员丨2023/11/25
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