目的:探讨上调骨桥蛋白(OPN)和TIP30表达对口腔鳞状细胞癌cal-27细胞增殖和迁移能力的影响.方法:采用过表达OPN载体病毒和过表达TIP30质粒分别感染或转染cal-27细胞株后,通过实时荧光定量PCR法和蛋白印迹western blot法检测OPN和TIP30的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力.结果:过表达OPN栽体病毒感染的cal-27-sbOPN细胞株OPN mRNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-shN细胞株(P＜0.001,P=0.002),且细胞的增殖能力和迁移能力强(P＜0.001,P=0.002).过表达TIP30质粒转染的cal-27-pTIP30细胞株TIP30 mRNA和蛋白的表达均明显高于cal-27-pc3.0细胞株(P=0.001,P=0.003),且细胞的增殖能力和迁移能力弱(P＜0.001,P=0.005).结论:OPN能促进cal-27细胞的增殖和迁移,TIP30抑制cal-27细胞的增殖和迁移.

组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用.C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性.KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性.KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达.KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生.进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助.

PTIP (Pax transactivation domain-interacting protein,PAXIP1)蛋白参与MLL3(lysine methyltransferase 2C,KMT2C)/MLL4(lysine methyltransferase 2B,KMT2B)组蛋白H3K4甲基转移酶复合体,促进基因的转录激活.但关于PTIP蛋白的乙酰化修饰及人宫颈癌细胞中PTIP转录激活靶基因的研究尚无报道.本研究以稳定表达SFB-PTIP蛋白的293T细胞株为对象,通过免疫沉淀和Western印迹法发现,PTIP蛋白能够发生乙酰化修饰,乙酰转移酶CBP/P300介导PTIP蛋白的乙酰化过程,CBP是主要乙酰转移酶.去乙酰化酶HDAC 1/2/3介导PTIP蛋白的去乙酰化过程.选择性HDAC1-3抑制剂MS-275促进PTIP蛋白乙酰化水平上升,且呈剂量和时间依赖性.以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,RNA-seq和RT-qPCR证明,CCDC121 (coiled-coil domain containing 121)和G蛋白偶联受体75 (G protein-coupled receptor 75,GPR75)是PTIP的转录激活靶基因(P＜0.01).和对照相比,MS-275介导的蛋白质乙酰化水平上升,促进基因CCDC121和GPR75的mRNA转录呈现不同程度的剂量依赖性上升(P＜0.01,P＜0.05).由此推测,MS-275有可能是通过促进PTIP蛋白的乙酰化水平,促进CCDC121和GPR75的转录.但其详细机制有待进一步研究.本研究对今后深入探讨PTIP乙酰化修饰对下游肿瘤相关基因转录的调节和功能,如肿瘤发生、进展等方面的调控机制提供了基础.

目的 探索PTIP相关蛋白1 (PTIP associated protein 1, PA1) 在小鼠睾丸发育过程中的表达定位.方法 采用RTPCR、实时定量PCR和免疫组织化学方法, 对PA1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达及定位进行检测.结果 RT-PCR和实时定量PCR结果显示, PA1 m RNA在1w、2w、4w、8w、12w、18w和24w的小鼠睾丸中均有表达, 且其表达量在2w时达到最高峰, 在小鼠性成熟 (8w) 以后, PA1的表达量趋于平稳.ABC法免疫组织化学染色显示PA1在1w、2w、4w和8w小鼠睾丸各级生精细胞、支持细胞和间质细胞的胞核中均有表达, 免疫荧光双标进一步确定PA1表达于支持细胞和间质细胞.结论 PA1可能在维持生精细胞的正常分化及调节睾丸内分泌的平衡中起重要作用.

Dietzia属菌具有很好的烃类降解和良好的高盐、高碱耐受能力.为研究Dietzia属降解烷烃和耐受盐碱的分子机制,以Dietzia sp.DQ12-45-1b为研究菌株,利用双质粒系统pTip-istAB-sacB和pRTSK-sacB,成功构建库容为30 720的随机突变体文库.随机挑选的突变克隆及突变克隆传代20次后的Southern blot结果表明:转座序列插入的随机性较好,均为单插入突变,并且具有较好的遗传稳定性,可用于长期筛选功能基因.在此基础上,分别以高盐培养和正十六烷为单一碳源培养,利用高通量基因筛选,成功获得了一个耐盐突变体M9G和5个降解利用正十六烷相关突变株M6A、M6B、M7A、M9A、M81C.与野生型相比,5个降解利用正十六烷相关突变株的降解率下降范围为16.67％-84.35％.插入位点分析结果显示,M9G、M6A、M6B、M7A、M9A和M81C的插入基因分别预测为丝氨酸蛋白酶、铁氧化还原蛋白、假定蛋白、铁氧化还原蛋白还原酶、ABC转运蛋白和细胞色素P450类CYP153烷烃羟化酶.其中除了预测假定蛋白外,有些基因与传统上确定的功能存在差异,暗示着其可能具有新的功能.Dietzia菌随机插入突变体文库的构建及筛选可为研究Dietzia菌的抗逆和烷烃降解机制奠定基础.