目的 探讨整合素连接激酶(ILK)抑制剂QLT0267在高糖诱导肾间质纤维化过程中的作用.方法 体外培养HK-2细胞,分为正常对照组(A组)、高糖干预组(B组,高糖30 mmol/L)、QLT0267干预组(C组,QLT0267 30 mmol/L)和高渗干预组(D组,高渗液30 mmol/L).采用MTT法观察细胞增殖情况,免疫荧光和RT-PCR法分别检测ILK、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白和mRNA表达.结果 B组细胞增殖率较A组增加(0.417±0.072 vs.0.336士0.062)(P＜0.05),而C组细胞增殖率较A组降低(0.146±0.027 vs.0.336士0.062)(P＜0.01).与A组相比,B组和C组细胞中ILK、α-SMA蛋白和mRNA表达均增加(P＜0.05);B组α-SMA蛋白和mRNA表达高于C组(P＜0.05),但B组与C组间ILK蛋白和mRNA表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 QLT0267可能部分抑制ILK信号传导通路的下游效应分子,从而延缓上皮细胞-间充质转化的进展速度.

目的 探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)抑制剂在人近端肾小管上皮细胞转分化中的作用及可能机制.方法 对数生长期人近端肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为对照组(无糖DMEM/F12培养液)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液)、抑制剂组(30.0 mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液+30.0μmol/LQLT0267 100μL),培养48 h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测HK-2细胞ILK、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,P-Akt)相对表达量,反转录PCR法检测ILK mRNA、纤连蛋白(fibronectin,Fn) mRNA表达量.结果 对照组HK-2细胞呈椭圆形或圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长;高糖组细胞向长梭型转变,细胞间紧密连接消失,呈离散状生长;抑制剂组细胞改变同高糖组,但程度较轻;高糖组、抑制剂组HK-2细胞E-cadherin相对表达量(0.43±0.04、0.80±0.05)均低于对照组(1.04±0.05)(P＜0.05),且高糖组低于抑制剂组(P＜0.05);高糖组、抑制剂组P-Akt相对表达量(0.49±0.05、0.31±0.03)均高于对照组(0.21±0.01)(P＜0.05);且高糖组高于抑制剂组(P＜0.05),高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK相对表达量(0.52±0.02、0.51±0.02)均高于对照组(0.22±0.01) (P＜0.05),高糖组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P＞0.05);高糖组、抑制剂组及对照组HK-2细胞Akt相对表达量(0.91±0.03、0.92±0.02、0.94±0.05)比较差异均无统计学意义(P＞0.05);高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK mRNA(1.83±0.23、1.64±0.07)、Fn mRNA相对表达量(2.06±0.07、1.79±0.06)均高于对照组(0.83±0.04、1.14±0.08) (P＜0.05),且高糖组Fn mRNA相对表达量高于抑制剂组(P＜0.05),ILK mRNA相对表达量与抑制剂组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ILK抑制剂QLT0267可抑制ILK下游效应分子Akt的磷酸化,减少Fn、E-cadherin下调,从而抑制或延缓肾小管上皮细胞转分化进程.

目的 观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl2作用浓度.以100μmol/L的CoCl2作用于HLECs建立缺氧模型,分别于缺氧0、6、12、24、48 h时以Western blotting法检测HLECs中的ILK.将HLECs分为CoCl2组、ILK抑制剂组、对照组,其中CoCl2组和ILK抑制剂组加入100μmol/L的CoCl2制作缺氧模型,ILK抑制剂组用ILK特异性抑制剂QLT0267(10 nmol/L)预处理1 h,对照组常规培养.三组继续培养24 h后采用Western blotting法检测细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN),采用实时荧光定量PCR法检测α-SMA、FN mRNA.结果 缺氧6、12、24、48 h时ILK蛋白相对表达量均增高,其中缺氧12、24 h时ILK蛋白相对表达量高于缺氧6、48 h时(P均<0.05).CoCl2组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).CoCl2组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量低于CoCl2组(P均<0.01).结论 CoCl2诱导的缺氧HLECs中ILK表达增高;抑制ILK表达后,HLECs中EMT标志蛋白表达下调,EMT过程受到抑制.