目的:观察人膀胱尿路上皮癌T24细胞中整合素连接激酶(ILK)基因的表达，通过ILK-小干扰RNA(siRNA)转染模型验证人膀胱尿路上皮癌细胞中ILK基因沉默与膀胱尿路上皮癌细胞生物特性之间的关系。方法:选择人尿路上皮癌T24细胞(中国科学院细胞库)进行体外实验，通过构建一套ILK-siRNA转染模型，转染T24细胞并通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测出最有效的干扰序列，将T24细胞分为3组，即膀胱尿路上皮癌T24细胞组(阴性对照组)、膀胱尿路上皮癌T24细胞阴性转染组(阴性转染组)和膀胱尿路上皮癌T24细胞＋ILK-siRNA组(目的转染组)，分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)的方法定量检测3组细胞中ILK mRNA和ILK的表达。采用流式细胞术、噻唑蓝(MTT)法分别检测3组细胞的细胞增殖能力和凋亡率，进行细胞侵袭、迁移实验。实验数据以均值±标准差( Mean± SD)表示。组间比较采用 t检验。 结果:3组细胞流式细胞术检测(亚G 0/G 1期、G 0/G 1期)为(3.16%、45.55%)、(3.23%、46.65%)、(7.86%、55.43%)。MTT法细胞存活率目的转染组(0.687±0.008)%、阴性对照组(0.998±0.006)%、阴性转染组(0.992±0.008)%比较，差异有统计学意义(阴性对照组 t＝55.408， P<0.05，阴性转染组 t＝48.160， P<0.05)。肿瘤细胞侵袭实验倒置显微镜400倍镜视野下细胞计数目的转染组(29.500±2.121)个、阴性对照组(55.501±4.950)个、阴性转染组(54.000±1.414)个，差异有统计学意义(阴性对照组 t＝6.828， P<0.05，阴性转染组 t＝13.590， P<0.05)。肿瘤细胞迁移实验倒置显微镜400倍镜视野下细胞计数目的转染组(44.500±2.828)个、阴性对照组(89.001±4.243)个、阴性转染组(87.000±2.828)个，差异有统计学意义(阴性对照组 t＝11.395， P<0.05，阴性转染组 t＝13.275， P<0.05)。 结论:沉默ILK基因的表达具有抑制T24增殖、侵袭、迁移的功能，同时能够提高T24细胞的凋亡率。

目的:探讨糖尿病肾病(DN)肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)进程中整合素连接激酶(ILK)/锌指转录因子(Snail)信号通路的表达情况及大黄酸对其的影响。方法:将8周龄的健康雄性Wistar大鼠，随机分为正常组、糖尿病肾病组、大黄酸组及缬沙坦组，每组各12只。使用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型，大黄酸组及缬沙坦组分别给予大黄酸100 mg/(kg·d)、缬沙坦30 mg/(kg·d)灌胃。于第8、16周末，以上四组大鼠各处死6只，原位灌洗肾脏，取出大鼠的肾脏组织后固定于蜡块并切片，使用HE及Masson染色分别对肾小管间质损伤指数、间质胶原相对面积进行评价；免疫组织化学方法测定E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ILK、Snail及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达并作半定量分析。结果:与正常组比较，糖尿病肾病组大鼠肾小管间质损伤指数升高、肾间质胶原相对面积增加，肾小管上皮细胞E-cadherin表达下调、α-SMA表达上调( P<0.05)。与糖尿病肾病组比较，大黄酸组、缬沙坦组肾小管间质损伤指数下降、肾间质胶原相对面积减少，肾小管上皮细胞E-cadherin表达上调、α-SMA表达下调( P<0.05)，且大黄酸组、缬沙坦组两组间差异无统计学意义( P>0.05)。与正常组比较，糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞ILK、Snail及MMP-2的表达均随病情发生进行性升高( P<0.05)。与糖尿病肾病组比较，大黄酸组、缬沙坦组ILK、Snail及MMP-2的表达均有所下降( P<0.05)，且大黄酸组、缬沙坦组两组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:大黄酸可通过下调DN大鼠肾小管上皮细胞ILK/Snail信号通路的表达阻抑EMT的进展。

目的:观察整合素连接激酶-小干扰RNA-特异性腺相关病毒(ILK-siRNA-AAV)对大鼠青光眼滤过术后滤过通道瘢痕形成的抑制作用。方法:选取SPF级8~9周龄SD大鼠48只，采用随机数表法将其分为空白对照组、ILK-siRNA-AAV组、NC-siRNA-AAV组和丝裂霉素C(MMC)组，每组12只。每只大鼠均取左眼为实验眼，右眼不做特殊处理。采用前房植入引流管法建立大鼠青光眼滤过术球结膜滤过泡模型，空白对照组、ILK-siRNA-AAV组和NC-siRNA-AAV组术后1 d滤过泡内分别注入磷酸盐缓冲液、ILK-siRNA-AAV和NC-siRNA-AAV各5 μl，MMC组术中采用含0.4 mg/ml MMC的小棉片置于结膜瓣下5 min。术前及术后1、2、3、7、14、21、28 d，采用手持式眼压计测量术眼眼压；术后1、2、3、7、14、21、28 d，采用手术显微镜观察术眼滤过泡形成情况，采用Kaplan-Meier生存分析计算滤过泡生存天数；术后28 d，采用逆转录PCR及Western blot法检测术区结膜及结膜下组织中ILK的mRNA及蛋白表达，检测ILK基因沉默效应；采用苏木精-伊红染色观察 ILK基因沉默对滤过通道组织形态的影响；采用Masson染色观察 ILK基因沉默对球结膜滤过泡术区组织胶原纤维沉积作用，计算胶原纤维染色阳性面积占整个组织视野面积的百分比。 结果:各组大鼠手术前后不同时间点眼压总体比较，差异均有统计学意义( F分组＝76.84， P<0.001； F时间＝114.49， P<0.001)，其中ILK-siRNA-AAV组术后第1、7、14和28天眼压均低于空白对照组，MMC组术后第2、3、7、14和28天眼压均低于空白对照组，ILK-siRNA-AAV组术后第7、14、21和28天眼压均低于NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，空白对照组、NC-siRNA-AAV组、ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数分别为(3.50±1.51)、(5.00±3.41)、(31.50±3.15)和(31.33±2.46)d，总体比较差异有统计学意义( F＝395.83， P<0.05)，其中ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数均多于空白对照组和NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。各组ILK mRNA及蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义( F＝222.32、752.69，均 P<0.05)，其中ILK-siRNA-AAV组ILK mRNA及蛋白相对表达量明显低于空白对照组和NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示，空白对照组和NC-siRNA-AAV组术区纤维结缔组织增生，细胞大量增生，成纤维细胞密度高，呈团块状生长；ILK-siRNA-AAV组球结膜较薄，纤维结缔组织排列疏松，少量成纤维细胞增生；MMC组结膜纤维层疏松、菲薄，形成空洞，细胞稀少。各组胶原纤维染色阳性面积百分比总体比较差异有统计学意义( F＝741.66， P<0.05)，其中与空白对照组比较，ILK-siRNA-AAV组和MMC组阳性染色百分比显著降低，ILK-siRNA-AAV组阳性染色百分比明显低于NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:ILK-siRNA-AAV沉默ILK表达可抑制大鼠滤过术后滤过区组织瘢痕形成，降低眼压。

目的:探讨黄芪多糖对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取50只雄性7周龄SD大鼠，按照随机数字表法分为正常组、单纯烧伤组、黄芪多糖组、抑制剂组和抑制剂+黄芪多糖组，每组10只。除正常组外，其余4组大鼠均在背部制作1个深Ⅱ度烧伤创面。正常组、单纯烧伤组大鼠腹腔注射生理盐水，其余3组大鼠分别注射黄芪多糖和/或整合素连接激酶（ILK）抑制剂。注射7 d后，计算4组烧伤大鼠创面愈合率，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测5组大鼠血清中γ干扰素、白细胞介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。取正常组大鼠正常皮肤组织及4组烧伤大鼠创面组织，测定水分并计算水分占比，采用ELISA法检测γ干扰素、IL-2和TNF-α的含量，采用实时荧光定量反转录PCR法检测表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以及ILK mRNA表达量，采用蛋白质印迹法检测ILK、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成激酶-3β（GSK-3β）及磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达量。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果:注射7 d后，黄芪多糖组大鼠创面愈合率为（67±5）%，明显高于单纯烧伤组的（52±4）%和抑制剂+黄芪多糖组的（59±5）%（ P值均<0.05）；抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面愈合率明显高于抑制剂组的（48±4）%（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠血清或正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量和创面组织水分占比均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量及创面组织水分占比均明显升高（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量及创面组织水分占比均明显降低（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显升高（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显降低（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠创面组织中EGF、bFGF、ILK mRNA表达量及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中EGF、bFGF和ILK mRNA表达量及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显降低（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中EGF、bFGF和ILK mRNA表达量以及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显升高（ P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤组织以及4组烧伤大鼠创面组织中Akt和GSK-3β蛋白表达量比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:黄芪多糖可能通过激活ILK/Akt/GSK-3β信号通路，减轻深Ⅱ度烧伤大鼠全身和局部炎症反应，减轻组织水肿，促进愈合因子表达，从而促进创面愈合。

目的:探讨丹皮酚(paeonol，Pae)对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)的影响及可能机制。方法:不同浓度Pae处理MDA-MB-231细胞后，设立对照样本。采用CCK8方法检测细胞增殖活性；Transwell法检测细胞的侵袭能力；流式细胞技术检测细胞周期；Western blot检测整合素β3 (integrin β3，ITGB3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，p38MAPK)、磷酸化-p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK，p-p38MAPK)蛋白的表达以及EMT相关标志物纤维连接蛋白(fibronectin，FN)、波形蛋白(vimentin，Vim)、N-钙粘蛋白(N-cadherin，N-cad)的表达变化。结果:60 mg/L的Pae对于乳腺癌细胞产生了明显的抑制作用，故本实验使用60 mg/L的Pae浓度。Pae分别处理24、48 h后，G0/G1的细胞周期分别从对照组的50.6%增加到53.0%和65.4%。S期处理48 h后，Pae组肿瘤细胞百分比从37.6%降低至26.6%。Transwell结果显示，与对照组相比，Pae处理乳腺癌细胞24、48 h后细胞侵袭数明显减少，差异有统计学意义[个：(378.73±47.62)比(193.64±32.54)或(174.37±27.83)， t＝5.35、5.75， P值均<0.05]。与对照组相比，Pae处理后乳腺癌细胞ITGB3、p38MAPK、p-p38MAPK表达水平明显降低；EMT标记物FN、N-cad、Vim表达均显著下降，差异有统计学意义[(0.97±0.19)比(0.48±0.10)，(1.24±0.24)比(0.56±0.18)，(0.93±0.18)比(0.51±0.13)， t＝4.08、3.93、3.28， P值均<0.05；(0.88±0.16)比(0.46±0.08)，(0.96±0.17)比(0.43±0.12)，(0.87±0.15)比(0.37±0.13)， t＝4.06、4.42、4.36， P值均<0.05]。 结论:Pae显著抑制三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖，侵袭和EMT，该作用可能与ITGB3/p38MAPK信号通路激活有关。

蛋白质的翻译后修饰在细胞信号转导过程中起核心调控作用.除了单一翻译后修饰的调控外,细胞中还存在由多个翻译后修饰共同调控一些关键的代谢或信号通路的分子机制.翻译后修饰是蛋白质之间的语言,通过不同修饰之间的相互作用和协同调控,把复杂的信号整合后传递到下游其他蛋白并形成信号网络,最终影响蛋白质的结构、亚细胞定位、相互作用以及生物学功能.本文概述磷酸化、泛素化和类泛素化三类重要的翻译后修饰在植物细胞信号通路中的串扰作用模式及协同调控机制.

目的:筛选头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)差异预后乳酸代谢相关基因(LRGs),构建HNSCC 的LRGs预后模型,并阐明其潜在的作用机制.方法:由癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达综合(GEO)数据库获取HNSCC基因表达及临床数据,由GeneCards数据库中获取LRGs,采用 R软件筛选 HNSCC的LRGs.采用单因素Cox回归分析得到预后相关基因,基于预后相关LRGs鉴定出 2 种不同亚型,采用Kaplan-Meier(K-M)曲线分析比较 2 组患者预后,采用CIBERSORT算法进行2组患者间的免疫相关分析.采用多因素 Cox回归分析和LASSO回归分析构建预后模型,采用受试者工作特征曲线(ROC)和 K-M生存曲线评估LRGs 与 HNSCC 患者生存和预后的关系.采用GSE27020、GSE41613 和 GSE65858数据集验证预后模型.基于风险评分进行分组,并进行免疫相关分析和肿瘤相关评分分析.结果:通过TCGA数据库从 HNSCC样本中差异分析筛选出1 196个LRGs,单因素 Cox 回归分析筛选出 27个差异表达基因(DEGs)与 HNSCC患者预后相关,根据预后相关基因鉴定出2种不同的LRGs亚型(分组1和分组2),K-M生存曲线显示分组2患者总生存期(OS)明显高于分组1,分组 2患者免疫细胞浸润水平明显高于分组1.多因素 Cox回归分析和LASSO回归分析筛选出9个LRGs,包括次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶 1(HPRT1)、淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、糖原磷酸化酶(PYGL)、尿激酶型纤溶酶原激活物(PLAU)、大麻素受体 2(CNR2)、斯钙素2(STC2)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(NLRP1)、整合素连接激酶(ILK)和叉头框蛋白B1(FOXB1),构建预后模型,K-M曲线和ROC 曲 线 显 示上述9个基因表达水平与HNSCC 患者生存和预后有关联,且均具有良好的 1、2 和 3 年生存预测作用,ROC 曲线下面积(AUC)均大于0.650,且预后模型的预后预测作用在GSE27020、GSE41613 和 GSE65858数据集中得到验证.根据风险评分分类的患者具有可区分的免疫状态.结论:基于生物信息学方法筛选出的HNSCC 差异表达LRGs与 HNSCC 患者生存和预后有关联,由 9 个LRGs构建的预后模型可预测HNSCC患者的生存情况和治疗反应.

背景:课题组前期研究发现气虚血瘀证是脊髓型颈椎病各种中医证型中的主要证型.然而,用于气虚血瘀证发育性颈椎管狭窄向脊髓型颈椎病转化的早期诊断蛋白组学标志物未见相关报道.目的:探讨发育性颈椎管狭窄与脊髓型颈椎病的血清蛋白组学差异质,寻找并鉴定两者之间的潜在血清生物学标志物.方法:分别采集气虚血瘀证脊髓型颈椎病患者(实验组)血清9例、气虚血瘀证发育性颈椎管狭窄(对照组)血清9例,选用同位素相对标记与绝对定量技术(TMT)联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术进行蛋白组学分析,以此寻找并鉴定差异表达的蛋白质.结果与结论:①TMT技术共筛选出有意义差异蛋白1 027种,最终鉴定出显著性差异蛋白89种(P<0.05),其中与对照组比较,实验组中α-肌动蛋白4、α-肌动蛋白1、细胞分裂控制蛋白42同系物、整合素连接蛋白激酶、Β-肌动蛋白等 45种蛋白表达上调;纤维连接蛋白、纤维蛋白原γ链、纤维蛋白原α链、纤维蛋白原β链等44种蛋白表达下调;②基于GO富集分析,这些差异蛋白参与了信号受体结合、激酶结合、蛋白激酶活性、整合素结合、肌动蛋白丝结合等分子功能;③KEGG 通路分析,筛选20条主要共同差异信号/代谢通路,分别为粘着斑、紧密连接、Rap1信号通路、血小板活化、肌动蛋白细胞骨架的调节等信号通路;④PPI分析表明,气虚血瘀证发育性颈椎管狭窄与脊髓型颈椎病之间的共同差异蛋白中ILK,FGA,FGB,FGG,FN1,CDC42,ACTN1,ACTN4,ACTB等位于蛋白质互作网络的节点,且与骨生成与破坏系统、神经系统、凝血系统、细胞炎症等系统关系密切;⑤结论:采用TMT联合LC-MS/MS技术成功筛选出了气虚血瘀证发育性颈椎管狭窄与脊髓型颈椎病之间的血清差异表达蛋白质,明确了ILK、FN1、CDC42、ACTN4是气虚血瘀证发育性颈椎管狭窄向脊髓型颈椎病转化的特异性标志物,为进一步阐明其转化机制提供了依据.

目的 探讨重组Wnt3a蛋白对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和黏附的影响及相关机制.方法 原代培养大鼠VSMCs,实验分为Wnt3a组和对照组,通过Transwell实验检测VSMCs的迁移能力,细胞基质黏附实验检测VSMCs黏附细胞外基质的能力,Western blot检测VSMCs中β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化β-catenin(Ser675)、糖原合成激酶3β(GSK-3β),磷酸化GSK-3β(Ser9)、整合素连接激酶(ILK)的蛋白表达水平.结果 Wnt3a组中VSMCs迁移的数量明显高于对照组(P<0.05).与对照组相比,Wnt3a组中VSMCs黏附于胶原Ⅰ的数量和光密度值均显著增加(P<0.05),且Wnt3a组中磷酸化β-cate-nin(Ser675)、磷酸化GSK-3β(Ser9)和ILK蛋白的表达水平均显著上调(P<0.05).结论 Wnt3a可以通过ILK调节VSMCs迁移和黏附.

目的 通过研究膀胱癌中ILK、Cyclin D1及MMP-9的表达,探讨它们在膀胱癌发生、发展中的作用. 方法 采用免疫组织化学SP法检测ILK、Cyclin D1及MMP-9在58例膀胱癌和20例癌旁正常组织中的表达,并对检测结果进行分析.结果 ILK、Cyclin D1及MMP-9在膀胱癌及正常组织中的表达分别为62.1％和15.0％,70.7％和20.0％,65.5％和15.0％ (P＜0.05).同时,其阳性表达随着肿瘤分化程度的降低呈上升趋势(P＜0.05).ILK与Cyclin D1和MMP-9的表达均呈正相关(P＜0.05). 结论 ILK、Cyclin D1及MMP-9蛋白在膀胱癌中均呈过表达,且与病理分化程度密切相关,提示其参与膀胱癌的发生及转移,是肿瘤病理学分期分级的有效参考指标,联合检测有助于膀胱癌的临床诊断与预后.