目的 评价结核分枝杆菌(MTB)潜伏相关抗原Rv1737c用于活动性肺结核(ATB)和潜伏性结核病感染(LT-BI)的诊断价值.方法 纳入西安交通大学第一附属医院感染科2022年1月—2023年8月294例ATB病例和299例LTBI病例.用荧光斑点(FluoroSpot)法检测特异性T细胞经MTB毒力因子ESAT-6和CFP-10、MTB潜伏相关抗原Rv1737c刺激后分泌的IFN-γ和IL-2.受试者操作特征(ROC)曲线用于定义在区分ATB和LTBI时潜伏期相关抗原的最佳截断值.结果 在MTB特异性ESAT-6和CFP-10肽刺激后,ATB组仅分泌IFN-γ的T细胞(IFN-γ+T细胞)百分比显著高于LTBI组(P<0.001);相反,仅分泌IL-2的T细胞(IL-2+T细胞)百分比显著低于LTBI组(P<0.001).MTB潜伏相关抗原Rv1737c刺激后,LTBI组IL-2+T细胞百分比显著高于ATB组(P<0.001).由Rv1737c刺激的IL-2+T细胞百分比得出的ROC曲线下面积(AUC)为0.812(95%CI:[0.775,0.850]),区分ATB和LTBI的敏感性和特异性分别为81.9%和84.4%.仅考虑ESAT-6或CFP-10刺激的IFN-γ+T细胞百分比,ESAT-6及CFP-10 FluoroSpot对ATB和LTBI鉴别诊断的敏感性和特异性分别为77.6%和75.3%,AUC值为0.739(95%CI:[0.695,0.782]).在ESAT-6和CFP-10 FluoroSpot的基础上,与Rv1737c联合使用可将特异性提高到92.3%(95%CI:[0.872,0.994]),AUC增加至0.881(95%CI:[0.853,0.910]).结论 Rv1737c与ESAT-6和CFP-10结合,可作为基于T细胞的结核病诊断测试的候选抗原,用于区分ATB和LTBI.

目的 原核系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,并检测其能否被结核感染者外周血PBMC细胞识别,通过小鼠模型判定其免疫原性.方法 按照原核系统密码子特点,全基因合成Rv2628c-Rv1737c表达核酸序列,构建表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c,原核细胞内诱导表达、亲和层析纯化Rv2628c-Rv1737c蛋白;分离不同患者样本PBMC细胞,抗原刺激后,通过q-PCR分析IFN-γ mRNA表达差异,判定融合蛋白能否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫应答水平.结果 原核克隆的重组表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c测序正确,融合蛋白以包涵体表达形式存在,经复性、亲和纯化后,分子量为57 kDa,纯度90％以上.以Rv2628c-Rv1737c融合蛋白刺激TB感染者,尤其TB潜伏感染(LTBI)者,外周血PBMC细胞IFN-y mRNA水平高于健康对照者(P＜0.05);同时,BCG+Rv2628c-Rv1737c/DMT诱导小鼠能产生高水平的IgG抗体.结论 原核重组可获得高纯度Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,其作为潜伏感染抗原,可被TB感染者PBMC细胞识别,具有较强的免疫原性,是具有潜力的TB候选亚单位疫苗靶抗原,可用于TB感染尤其是潜伏感染的预防及实验室诊断.

研究结核杆菌RV1737多肽免疫特性及在结核病中诊断鉴别能力,多肽抗原模拟干扰素γ(IFN-γ)释放实验(IGRA),刺激后潜伏结核感染(LTBI)组IFN-γ高于结核(TB)组(P＜0.05),A+B+C联合组的灵敏度高于多肽A、B、C与融合D(P＜0.05).同时多肽建立间接ELISA法检测血清结核IgG抗体,TB组有更好的反应性,多肽A的IgG抗体吸光度高于多肽B、C(P＜0.05),组间绘制ROC,多肽A面积最大,联合A+B+C多肽,曲线面积升高且与单独面积比较差异有统计学意义(P＜0.05).RV1737多肽有成为潜伏结核诊断候选抗原潜力.多肽抗原建立ELISA检测外周血结核IgG抗体可能成为血清学实验结核病筛选新抗原且多肽A效果较突出.