目的:初步评价自主构建的结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014免疫原性和保护效果，为研制结核新疫苗、有效防控结核病提供科学基础。方法:选择结核分枝杆菌全长蛋白抗原3种（EsxH、Rv2628和HspX）和经表位预测和优化的表位优势蛋白抗原2种（nPPE18和nPstS1），共5种组分构建蛋白抗原组合物EPRHP014，包括融合表达纯化的多组分蛋白抗原（EPRHP014f）和分别表达纯化单个蛋白构成多组分混合蛋白抗原（EPRHP014m）。EPRHP014f和EPRHP014m分别辅以铝佐剂制备多组分蛋白疫苗，采用卡介苗（BCG）作对照。皮下注射免疫BALB/c小鼠后，采用ELISA法检测血清特异性抗体效价，采用ELISpot和Luminex技术检测多种细胞因子分泌情况，采用结核分枝杆菌体外生长抑制试验观察其免疫保护作用。结果采用 t检验或秩和检验进行统计分析。 结果:EPRHP014m和EPRHP014f免疫小鼠后均能诱导产生高效价的IgG抗体及其亚型IgG1和IgG2a，抗体效价与BCG免疫组小鼠差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014f组诱导产生的分泌IFN-γ和IL-4的斑点形成细胞（SFC）数量均高于EPRHP014m组和BCG组（ P<0.05），而EPRHP014m组和BCG组的IFN-γ和IL-4的SFC数量差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014m组诱导分泌的GM-CSF、IL-12p70均高于BCG组（ P<0.05），而IL-6和IL-10分泌水平与BCG组的差异无统计学意义（ P>0.05）；EPRHP014f组和BCG组的IL-6、IL-10、IL-12和GM-CSF分泌水平差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014m组、EPRHP014f组和BCG组具有明显的体外抑菌作用，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:EPRHP014f和EPRHP014m免疫后均能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，且有较强的体外抑制结核分枝杆菌生长的能力，显示抗原组合物EPRHP014具有良好的结核疫苗研发和应用价值。

目的 原核系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,并检测其能否被结核感染者外周血PBMC细胞识别,通过小鼠模型判定其免疫原性.方法 按照原核系统密码子特点,全基因合成Rv2628c-Rv1737c表达核酸序列,构建表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c,原核细胞内诱导表达、亲和层析纯化Rv2628c-Rv1737c蛋白;分离不同患者样本PBMC细胞,抗原刺激后,通过q-PCR分析IFN-γ mRNA表达差异,判定融合蛋白能否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫应答水平.结果 原核克隆的重组表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c测序正确,融合蛋白以包涵体表达形式存在,经复性、亲和纯化后,分子量为57 kDa,纯度90％以上.以Rv2628c-Rv1737c融合蛋白刺激TB感染者,尤其TB潜伏感染(LTBI)者,外周血PBMC细胞IFN-y mRNA水平高于健康对照者(P＜0.05);同时,BCG+Rv2628c-Rv1737c/DMT诱导小鼠能产生高水平的IgG抗体.结论 原核重组可获得高纯度Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,其作为潜伏感染抗原,可被TB感染者PBMC细胞识别,具有较强的免疫原性,是具有潜力的TB候选亚单位疫苗靶抗原,可用于TB感染尤其是潜伏感染的预防及实验室诊断.

目的 应用生物信息学软件预测分析结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv1733c的结构和功能.方法 采用生物信息学软件ORF Finder、Interproscan、SOSUI、Protpapram、ProtScale、Signal IP、Tmpred、TMHMM、NetNGlyc、NetPhos 3.1 Servera、PSORT、WoLF PSORT、TargetP-2.0-CBS、NLStradamus、SOMPA、IEDB、SYFPEITHI、RANK-PEP、NetMHCIIpan、BLAST、STRING等对结核分枝杆菌Rv1733c蛋白的理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜区、信号肽、糖基化及磷酸化位点、亚细胞定位、二级结构、B细胞与T细胞抗原表位以及蛋白质的相互作用进行预测分析.结果 Rv1733c蛋白由210个氨基酸组成,分子式为C988 H1620N298 O 289 S5,原子总数3200,其编码基因全长633 bp,等电点10.31,不稳定性指数34.84,脂肪族氨基酸指数102.76,平均疏水性0.14.该蛋白有跨膜区无信号肽,有2个糖基化位点和13个磷酸化位点.该蛋白二级结构以α-螺旋(占41.90％)为主,结构较松散.其亚细胞定位于细胞质,非分泌蛋白,属于稳定的疏水性蛋白.RRv1733c蛋白含有7个B细胞抗原表位,多个T细胞表位.其互作蛋白分别为Rv2628、Rv1734c、Rv2627c、Rv0079、Rv1733c、h1rp1、esxA,并参与多种生物学过程.结论 生物信息学分析Rv1733c为稳定疏水性胞浆蛋白,含有多个T、B细胞抗原表位,能够磷酸化并与多种蛋白相互作用,可作为抗结核多肽疫苗的候选蛋白.

目的 应用生物信息学预测分析Hrp1蛋白结构功能和生物学特性.方法 生物信息学软件ORF Finder、SO-SUI、Protpapram、ProtScale、Signal IP、Tmpred、TMHMM、NetNGlyc、NetPhos-3.1-Servera、PSORT、WoLF PSORT、TargetP-2.0-CBS、NLStradamus、SOMPA、SWISS-MODEL、IEDB、SYFPEITHI、RANKPEP、BLAST、DNAStar、STRING对Hrp1蛋白的理化性质、结构功能、生物学特性、抗原表位及蛋白相互作用进行预测分析.结果 Hrp1蛋白原子总数2166,等电点4.96,不稳定性指数19.62,脂肪族氨基酸指数100.35,平均疏水性0.042,有跨膜区无信号肽,1个糖基化位点6个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋为主.其亚细胞定位于细胞质,属于稳定的亲水性蛋白.经预测,Hrp1蛋白含有4个B细胞表位,多个T细胞表位,且其相互作用蛋白分别为Rv2627c、Rv2628、Rv1738、devR、Rv2624c、TB31.7、rip3、pfkB、guaA、hspX,并参与多种生物学过程.结论 生物信息学分析Hrp1蛋白为稳定亲水性胞浆蛋白,具有良好的抗原表位,为结核病诊断及治疗的潜在候选因子,是探索结核分枝杆菌持久性感染机制的重要研究靶标,可作为抗结核多肽疫苗的候选蛋白.